猪痢疾检疫方法概述

2014-08-15蒋刘柱张光华王学魏

四川畜牧兽医 2014年12期

关键词：痢疾螺旋体黏液

蒋刘柱，张光华，黄谦，王学魏

（1.四川省绵阳市畜牧站，四川绵阳 625000；2.四川省中江县畜牧局，四川中江 622000）

1 产地检疫

产地检疫是防止病猪进入流通环节的第一关，特别是种猪场，产地检疫尤为重要。

2 检疫方法

2.1 基本检疫方法

2.1.1 问。着重询问有无发病史、发病头数、死亡头数、临床表现、病程长短、做过何种疫苗预防注射，最近有无疫病发生等等。通过问诊，可以初步断定是急性或是慢性。

2.1.2 视。观察猪群的活动状态和精神状态，采食量的变化，饮水的具体情况；看粪便的颜色形状，腹部及背部的毛色，以及肛门周围粪便污染的情况。

2.1.3 闻。主要是闻粪便的气味，一般表现为恶臭。

2.1.4 摸。用手触摸猪皮肤、肌肉、耳朵、淋巴结等部位的温度、硬性、弹性、敏感性、疼痛性、病变部位的性状以及反射情况等，主要判断疼痛感和敏感性。

2.1.5 检。用体温计检查猪体温。重病例体温稍高，维持数天，以后下降至常温，死前体温降至常温以下[1]。

2.2 看临床症状急性症状先有个别猪突然死亡，随后其他猪出现食欲减退，精神不佳。腹泻开始为黄色软粪，后变为红黑色水样便，有时带有很多小气泡，并混有黏液及纤维伪膜、气味恶臭，肛门周围及尾根被粪便污染。病猪体温升高到39.8～40.6℃，厌食、喜饮水、拱背、脱水、腹部卷缩、行走摇摆、用后肢踢腹，被毛粗乱无光，迅速消瘦。严重者起立困难，极度衰弱，排粪失禁，肛门周围及尾根被粪便污染，共济失调，最后死亡[2-3]。

亚急性多见于流行的中后期，病程为14～21d。下痢时粪中有黑红血液和黏液（如油脂状），里急后重，反复发生，食欲减退或正常，消瘦，贫血，生长迟缓，呈恶病质状态。少数康复后过一段时间又复发，甚至多次复发，个别转为慢性型，生长发育受阻，有的成为僵猪[4-5]。

慢性病例病情较轻。下痢，粪中含黏液及坏死组织碎片较多，血液较少，病程较长（28d以上）。进行性消瘦，生长迟滞。不少病例可以自然恢复，但间隔一定时间后，部分病例可能复发甚至死亡。

2.3 解剖死猪看病理变化肠壁变薄，大肠出现卡他性和出血性炎症，肠系膜及其淋巴结充血、水肿，肠腔内有黏液和黑色血液，肠黏膜上有弥漫性坏死，呈麸皮样，黏膜易脱落，小肠及其他脏器无明显病变[6]。大肠有病变而小肠没有病变是该病典型的特征，常在回盲结合处有一条明显的分界线。此特征性病变可用来与其他腹泻病相区别。

2.4 细菌学检查

2.4.1 直接镜检。取带血丝的黏液粪便少许，直接抹片，干燥固定后，用草酸铵结晶紫液、姬姆萨染色液染色观察，判断是否为密螺旋体。本病的病原为猪痢疾短螺旋体，存在于猪病变肠段的黏膜、肠内容物及粪便中。短螺旋体有4～6个弯曲，两端尖锐，在暗视野显微镜下较活泼，以长轴为中心旋转运动。在电子显微镜下可见细胞壁与外膜之间有7～9条轴丝。革兰氏染色呈阴性[7]。

2.4.2 细菌培养。对病死猪的结肠黏膜刮取物进行病原分离培养。将镜检疑似阳性病料以10倍稀释后划线接种于添加有400 μg/mL壮观霉素和50%兔脱纤血的胰酪胨血琼脂培养基上作厌氧培养（培养环境为80%氮气，20%二氧化碳），40℃培养5～6d，得到针尖大、透明、部分呈云雾状扩散的微小菌落，培养基上的菌落周围出现明显的β溶血环[8]。涂片镜检还可见典型的猪痢疾密螺旋体，由此可确诊[9]。

2.4.3 悬滴检查。将病料用生理盐水制成悬滴标本，在400倍暗视野显微镜下检查，可观察到有蛇行样运动活泼的菌体。每张标本片至少观察10个视野，在每个视野中均有多个缓慢旋转呈蛇形运动且两端尖锐的螺旋体，由此判断为猪痢疾密螺旋体感染。

2.4.4 动物接种。可接种健康仔猪、小白鼠或豚鼠，观察其发病和病变情况，或用结肠病料剁碎液腹腔注射公兔，5～10d后作睾丸穿刺检查，若出现猪痢疾短螺旋体，则可确诊该疾病。

2.5 血清学检验

2.5.1 琼脂免疫扩散试验。自然分离株经纯化后作为诊断抗原，周围孔分别滴入待检血清、阳性和阴性对照血清，在保持一定湿度的状态下，置于温箱中，24h后观察结果。出现特异性沉淀线者为阳性。该方法可以作为诊断和净化猪场痢疾的简易手段。

2.5.2 微量凝集试验。以1%的胎牛血清PBS 0.05mL分别滴入微量滴定板1～6孔中，将10倍稀释过的被检血清50μL加入第一孔，并倍比稀释至第5孔，第6孔为抗原对照。每孔加入抗原50μL，经振荡后置38℃16～18h，再于室温下静置1～2h，观测结果。当几何平均滴度为1∶40以上时可认为该猪群感染了螺旋体。

2.5.3 荧光抗体试验。用兔的高免血清制备出荧光标记抗体，比普通显微镜更灵敏。该方法能在短时间（1.5～2h）内检出和鉴定猪痢疾短螺旋体。

2.5.4 白细胞游走抑制琼脂糖试验（LMAT）。试验原理：猪痢疾（SD）螺旋体的可溶性抗原能抑制SD患猪的白细胞游走，但不能抑制未感染猪的白细胞游走。

2.5.5 ELISA法。ELISA检测的最适条件为：抗原10 μg/mL，血清稀释100倍，酶标结合物稀释1000倍。该法比凝集试验更灵敏，是诊断猪痢疾的一种快速方法。

2.5.6 其他。还有被动溶血试验和琼扩试验等检测方法，但比较实用的是ELISA法和凝集试验，主要用于猪群检疫和综合诊断。

2.6 PCR检测该法的敏感性可以达到每0.1 g粪便中检出1～10个密螺旋体，比选择性培养基进行常规培养的敏感性高1000倍。