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氟伐他汀对尼古丁诱导血管内皮功能障碍的保护作用

2014-08-15胡翠竹蔡冬梅

实用药物与临床 2014年11期
关键词:氟伐他汀尼古丁培养液

胡翠竹,蔡冬梅,胡 健

0 引言

目前全球范围内吸烟引起的死亡率逐年升高。流行病学调查研究已经证实,吸烟是诸多心血管病危险因素中动脉粥样硬化(AS)的独立危险因素[1],烟雾中的尼古丁(Nicotine)是引起心血管疾病的主要物质之一。尼古丁可降低HDL-C水平,并使LDL-C增加,减弱血管内皮细胞的屏障功能,诱发并加速AS的发生和发展。尼古丁可通过核转录因子-κB(NF-κB)途径诱导细胞粘附分子的表达,引起内皮细胞功能紊乱,诱发并加速AS的发生和发展[2]。

氟伐他汀是一个全合成的他汀药物,为羟甲戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制剂,作用于肝脏,具有抑制内源性胆固醇的合成,降低肝细胞内胆固醇的含量,刺激LDL受体的合成,提高LDL微粒摄取,降低血浆总胆固醇浓度的作用[3]。众多试验证实他汀类药物可以保护血管内皮细胞功能,延缓AS进展,明显改善冠心病的预后,减少心脑血管疾病的终点事件[4-8]。

本实验拟观察尼古丁对血管内皮细胞白介素-8(Interleukin-8,IL-8)表达变化的影响,通过尼古丁诱导血管内皮细胞功能障碍,并观察氟伐他汀对这一过程的影响,探讨氟伐他汀是否会影响尼古丁诱导的血管内皮细胞功能紊乱,以及氟伐他汀改善尼古丁引起内皮细胞功能紊乱致AS作用的相关机制。

1 材料和方法

1.1 试剂 DMEM培养基(Sigma公司);胎牛血清、胰蛋白酶(Gibco公司);尼古丁(中国医科大学发育生物教研室翟秀岩老师惠赠);NF-κB抑制剂PDTC(Sigma公司);NF-κB活性检测试剂盒(Active Motif 公司);IL-8 ELISA检测试剂盒(吉泰生物科技有限公司)。

1.2 细胞培养及细胞分组 HUVEC株CRL-1730购自于上海拜力生物科技有限公司。细胞培养基为含有100 μg/mL青霉素、100 μg/mL链霉素、10%胎牛血清的DMEM培养液;培养条件为5%的CO2,37 ℃;0.25%胰蛋白酶消化传代,将传代生长至80%融合状态时的内皮细胞用无血清的DMEM培养液饥饿16 h后同步用于实验。分为4组:①空白对照组:无血清培养基替代处理因素;②尼古丁组:100 nmol/L 尼古丁孵育内皮细胞24 h;③氟伐他汀组:10-5mol/L氟伐他汀孵育内皮细胞1 h后,100 nmol/L 尼古丁孵育内皮细胞24 h;④NF-κB抑制剂组:100 μmol/L PDTC和100 nmol/L 尼古丁孵育内皮细胞24 h,收集细胞标本及培养液。

1.3 IL-8蛋白的定量检测 收集的细胞培养液离心 2 000×g,10 min,除去悬浮的细胞和颗粒,收集上清,储存于-20 ℃待测IL-8水平。ELISA测定步骤按照试剂盒说明书进行。

1.4 细胞NF-κB的活性 收集细胞后按照TransAM(tm)NF-κBp50检测试剂盒说明书进行,检测细胞NF-κB的活性,以对照组的数值为1进行半定量分析。

2 结果

2.1 氟伐他汀对尼古丁诱导血管内皮细胞NF-κB活性的影响 尼古丁组NF-κB活性较空白对照组明显升高(P<0.05);氟伐他汀组NF-κB活性较尼古丁组显著下降(1.26±0.12 vs 2.95±0.17,n=3,P<0.05)。见图1。

图1 内皮细胞NF-κB活性的组间比较

2.2 氟伐他汀对尼古丁诱导血管内皮细胞IL-8表达的影响 NF-κB抑制剂组较尼古丁组IL-8的蛋白表达明显下降(1.01±0.12 vs 7.03±0.22,n=3,P<0.05),氟伐他汀组较尼古丁组IL-8的蛋白表达明显下降(1.45±0.11 vs 7.03±0.22,P<0.05),见图2。

图2 内皮细胞培养液中IL-8蛋白表达的组间比较

3 讨论

流行病学研究表明,吸烟是心脑血管疾病、癌症、慢性阻塞性肺疾病等多种疾病的独立危险因素[9-11],全球每年有500万人死于与吸烟有关的疾病,长期吸烟者的心血管疾病发病率比普通人群高2~3倍。香烟烟雾中对人体危害最大的物质之一是尼古丁,长期摄入尼古丁后肺癌、胃溃疡、冠心病、高血压等疾病的发病率增加,尤其是尼古丁与心脑血管系统疾病如高血压、高血脂、冠心病、脑卒中等疾病关系密切[12]。血管内皮细胞功能障碍是AS发生发展的始动环节。早期实验观察到,吸烟个体中出现血管内皮细胞肿胀、胞浆空泡形成、细胞连接疏松出现、线粒体水肿、内皮细胞下水肿等形态学变化。尼古丁可引起内皮细胞相同的形态学改变,并导致内皮细胞渗透性增加;亦可诱导内皮细胞粘附分子ICAM-1及VCAM-1 的表达[13-14]。

IL-8 属于CXC 类趋化因子,诱发单核细胞的聚集和粘附,在AS的发生发展中起重要作用。NF-κB属于NF-κB/Rel家族,主要是由p50/p65组成的异源二聚体,是一种多极性基因调控蛋白。与内皮细胞活化有关的各种刺激可通过活化NF-κB起作用。近年研究结果显示,尼古丁可使内毒素刺激下的人肺泡巨噬细胞MAPK磷酸化、IL-8表达增加;体内研究证实,尼古丁可通过N-乙酰胆碱能受体,刺激产生过氧化亚硝酸盐,继而活化NF-κB,从而升高中性粒细胞IL-8的表达,引起吸烟个体的白细胞增多症。本实验观察了尼古丁对人脐静脉内皮细胞IL-8表达的影响,结果显示,尼古丁组人脐静脉内皮细胞IL-8的表达较空白对照组明显升高,同时NF-κB活性升高,并且NF-κB特异性抑制剂可阻断尼古丁诱导的IL-8的表达。本研究结果表明,尼古丁可通过触发NF-κB的活化,从而诱导IL-8的表达,在AS的发生和发展中起重要作用。

氟伐他汀钠可降低LDL-C水平,改善内皮细胞功能,防止AS的进展[15]。本实验结果显示,氟伐他汀组NF-κB的活性较尼古丁组明显抑制;本实验结果已经证实,尼古丁可通过激活人脐静脉内皮细胞NF-κB的活性,从而诱导IL-8的表达;氟伐他汀可拮抗尼古丁诱发的NF-κB的活化,抑制尼古丁诱导的IL-8的表达,提示氟伐他汀可能通过抑制尼古丁诱导的NF-κB活化,从而抑制尼古丁诱导的IL-8的表达。本实验证实,氟伐他汀可通过抑制尼古丁诱导的NF-κB的活化,抑制尼古丁诱导的趋化因子的表达,为氟伐他汀改善吸烟患者内皮细胞功能提供新的理论依据。

参考文献:

[1] 马娟,陈吉丽.184例心血管疾病患者吸烟及戒烟现状调查分析[J].昆明医科大学学报,2013,(12):60-64.

[2] Hu CZ,Cao YL,Huo HY.Inhibitory effect of ghrelin on nicotine-induced VCAM-1 expression in human umbilical vein endothelial cells[J].J Cardiovasc Pharmacol,2009,53(3):241-245.

[3] 王君平.步长脑心通联合氟伐他汀钠治疗老年冠心病伴高血脂症的临床研究[J].实用药物与临床,2014,16(7):627-628.

[4] 祁风,崔香丽,余科,等.他汀类药物对脑梗死合并大脑中动脉狭窄患者转归的影响[J].实用医学杂志,2014,30(11):1806-1808.

[5] 游琼,吴铿,李腾,等.他汀类药物对冠心病罪犯血管内斑块的作用:一项5交叉研究[J].中国医药,2013,8(5):583-585.

[6] 董梅.他汀类药物临床应用的多效性[J].实用医学杂志,2013,29(19):3262-3264.

[7] 谢向荣,陈绍良,张厚军,等.降脂治疗逆转冠状动脉粥样硬化[J].中国介入心脏病学杂志,2010,18(5):271-276.

[8] 王法斌,李京波.他汀类药物对血管形成的作用及分子机制[J].实用医学杂志,2012,28(23):4018-4020.

[9] 张永辉,王以新,杨敏京.社区脑卒中高危人群颈动脉粥样硬化危险因素筛查[J].中国全科医学,2013,16(9):3101-3104.

[10]于司源,杨淑贤,艾咏梅.肺癌危险因素及早期发现的调查[J].中国伤残医学,2013(11):436-437.

[11]冉丕鑫.慢性阻塞性肺疾病的危险因素与社区综合防治[J].实用医学杂志,2014,30(1):4-6.

[12]骆景光,杨明,韩凌,等.吸烟对高血压患者血压变异性的影响[J].中华高血压杂志,2013,21(2):178-180.

[13]Wang Z,Wu W,Tang M.NF-κB pathway mediates vascular smooth muscle response to nicotine[J].Int J Biochem Cell Biol,2013,45(2):375-383.

[14]Breen LT,McHugh PE,Murphy BP.HUVEC ICAM-1 and VCAM-1 synthesis in response to potentially athero-prone and athero-protective mechanical and nicotine chemical stimuli[J].Ann Biomed Eng,2010,38(5):1880-1892.

[15]季连杰.氟伐他汀治疗颈动脉粥样硬化的疗效观察[J].实用心脑肺血管病杂志,2012,20(8):1314-1315.

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