血凝试验的影响因素分析

2014-08-08郑宏图

中国当代医药 2014年13期

[摘要] 近年来，随着检验医学的不断发展，各种先进的全自动血凝分析仪在各级医院普遍应用，使血浆凝血试验的检测更加趋于规范化、标准化，不同医院之间血凝试验结果的可比性日益提高，在出血与血栓性疾病的筛查、诊断及抗凝和溶栓治疗的药物监测方面发挥了重要作用。血浆凝血试验不同于其他检验项目，影响因素诸多，且具有特殊性，一旦凝血途径过程中的某些凝血因子被启动，就会发生一系列连锁反应，导致试验结果出现极大偏差，这些影响因素大多集中在检测分析前，因此对于实验室工作人员和临床医护人员来说应该掌握和了解这些影响因素，才能有效避免其对试验结果的干扰，保证检测结果的准确可靠。

[关键词] 血凝试验；标本；影响因素

[中图分类号] R446.11[文献标识码] B[文章编号] 1674-4721（2014）05（a）-0137-03

The influence factor analysis of hemagglutination test

ZHENG Hong-tu

Department of Laboratory,Central People′s Hospital of Siping City in Jilin Province,Siping 136000,China

[Abstract] Recent years,with the continuous development of laboratory medicine,all kinds of advanced full-automatic blood coagulation analyzer in levels of hospitals of general application,which is made the detection of plasma hemagglutination test more standardization,standardization,with the increasing in results comparable of blood hemagglutination test between different hospitals day by day,which is played an important role in hemorrhagic and thrombotic disease screening,diagnosis and anticoagulant therapy,drug monitoring in thrombolytic therapy.Plasma coagulation experiment of many influence factors and particularity,that is different from other inspection items,a series of chain reaction occurs once some clotting factors in the process of coagulation pathway was started,the reactions lead to a great deviation in test results,and these factors affecting mostly ocured before the analysis,so these factors should be grasped and understanded by the laboratory staff and clinical medical and nursing staff,in order to avoid the interference of these factors on the test results and to ensure the test results accurate and reliable.

[Key words] Hemagglutination test;Specimen;Influence factor

血凝试验是临床工作中常用的检测项目，血凝试验结果的准确性是指导临床正确治疗的保障。影响血凝试验的因素很多，这要求实验室工作人员必须了解和掌握与之相关的因素，从而有效避免其对试验结果的影响，现就主要相关因素进行探讨。

1 标本采集

正确采集标本是获得准确检验结果的前提，血凝试验的标本采集，必须按照规定的方法，保存凝血因子的全部特性，严格防止凝血因子和血小板在采血过程中被激活。

1.1 合理采用注射器和试管

采血时应用硅化或塑料注射器，试管用带盖的硅化玻璃试管或塑料试管，因为无盖会使血液二氧化碳丢失，pH值增高，使血浆凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血活酶时间（APTT）延长。试管不能用普通玻璃试管，普通玻璃能引起内源性凝血系统激活，影响最大的是Ⅷ因子的活性，可使其明显降低。

1.2 正确使用止血带

止血带在抽血时不要扎的太紧，采血时间不要太长[1]，如果采血不顺利，血流速度缓慢或多次穿刺采血困难，会激活凝血机制，使凝血因子活性增高，导致血浆凝固时间缩短，也可产生微小凝块，消耗凝血因子，导致血浆凝固时间延长。

1.3 采集血液要避开输液侧的肢体

不要在输液时采集血液[2]，输液时采集血液，血液被输注的液体大量稀释，造成凝血因子相对减少，导致试验结果的时间延长；更不能在静脉留置针内采血，因为静脉留置针内含有某种抗凝剂，会严重影响某项试验结果的时间延长。

1.4 掌握血液注入试管内的顺序

采血完毕后，血液向试管内注入的顺序对血凝试验结果有一定的影响[3]。当用注射器采血时，请将后一管血液用于凝血项目的检查；当用一次性采血针采血时，请将第一管血液用于凝血项目的检查。原因是当用注射器采血时，采血完毕后向试管内注入血液的过程中，后一管血液是在抽血时先进入注射器的部分；当用一次性采血针采血时，血液直接注入试管，第一管血液是先采出的部分。采血过程中静脉穿刺皮肤受损，组织因子会释放激活外源性凝血系统，止血带压迫时间长也会激活凝血系统，影响试验结果，这样做能够保证先采出的血液用于凝血项目的检查所受的影响相对减少。

1.5 防止气泡产生

血液向试管内注入过程中，沿试管壁缓慢注入，避免产生气泡，因为泡沫的产生会使某些因子变性，从而影响试验结果。

1.6 保证正确的抗凝比例

严格按照抗凝剂的比例要求采血量，浓度为109 mmol/L，3.8%枸橼酸钠抗凝剂0.2 ml，采血量1.8 ml，抗凝剂︰血液=1︰9。采血量过多，抗凝剂相对减少，引起血液抗凝不充分，血液产生微小的凝集，消耗凝血因子，导致测定结果时间延长；采血量过少，抗凝剂相对增多，过剩的抗凝剂一方面会中和试剂中的钙离子，另一方面也会稀释血液，导致测定结果的时间延长。由于抗凝剂是针对血浆的量抗凝，所以当血细胞比容＞55%或＜20%时，应用下述公式校正抗凝剂的用量[4]，抗凝剂的用量（ml）=0.00185×采血量（ml）×（100－患者血细胞比容）。

1.7 恰当的混匀方式

血液注入试管，要立即颠倒混匀，混匀不完全，会产生微小凝块，消耗凝血因子，导致错误的试验结果；混匀时避免用力震荡而破坏凝血蛋白或导致溶血发生，以致影响试验结果。

1.8 试管专用

抽血完毕，血液一定要注入正确的试管，否则会引起错误的试验结果，对于任何试验项目都不允许从其他试管移除血液到另一支试管，不同试验项目用途的试管内所含物质不同，会对另一个试验项目的结果产生严重影响，甚至是错误的试验结果。

2 标本分离

做血凝试验，对血浆分离的这一环节至关重要，不正确的离心力和离心时间会对试验结果产生影响。

2.1 正确使用离心机

血浆分离时，要求的离心力是1500× g，离心时间15 min，以获得乏血小板血浆[5]。不同的离心机，离心机的有效半径不尽相同。测得离心机的有效半径，根据公式RCF（g）=1.119×105×R×（r/s）2换算出所使用离心机的转速，其中RCF代表离心力，r/s代表每秒钟离心机的转速，g代表重力加速度9.8 m/s2，R代表离心的有效半径（m）。

2.2 获得乏血小板血浆

乏血小板血浆指血小板的量＜10×109/L，如果样本的离心速度不够，时间不够，则血浆中血小板的含量较高，会对血凝试验产生影响，因为血小板的磷脂膜参与凝血过程，血小板含有大量的磷脂，可以中和血浆中的狼疮抗凝物，导致狼疮抗凝物阴性。血小板中含有血小板因子（PF4），能中和标本中的肝素。20%的因子Ⅴ来自血小板，可导致因子Ⅴ增高。鉴于上述原因，采取正确的离心速度和离心时间，对获取正确的血凝试验结果至关重要。

3 标本存放

常规血凝试验在标本采集完成后，应尽快在最短时间，最好在1 h内完成试验，如不能做到也应在2 h内检测完毕，否则会对检测结果造成明显影响，随着标本存放时间延长，凝血因子会不断降解，不同的凝血试验项目，标本放置时间对试验结果的影响也不尽相同。PT和凝血酶时间（TT）检测结果在4 h内是稳定的，APTT检测结果在1 h内是稳定的，纤维蛋白原检测结果在2 h内是稳定的[6]。如果标本不能在规定时间内完成，应分离血浆，使用塑料试管。密封后快速冷冻，储存于－20℃或－70℃，冷冻保存的样本只能复融1次，要求在37℃水浴轻轻摇动，迅速融化。

4 血浆性状

标本分离后血浆的性状也会对血凝试验的结果产生某些影响，如溶血、乳糜血、黄疸等这些性状要引起检验人员的注意，标本溶血后，红细胞内容物的释出、红细胞膜表面的磷脂会对血凝试验产生影响[7]。含有乳糜颗粒的血浆，对应用免疫比浊法的项目，如D-二聚体产生严重干扰，鉴于标本本身的因素对试验结果的影响，检验人员要与临床医生进行沟通，阐明这些影响因素对试验的干扰，提示检验结果的可靠程度，供临床医生参考，必要时重新采血进行测定。

5 异常结果的处理

最常见的是反应混合物不凝集或显示结果失败，处理方法首先要排除仪器或标本本身的原因，包括标本是否合格、是否溶血、是否乳糜血等，与临床医生进行沟通，与临床症状是否相符，是否应用某些药物引起。某些药物本身就具有影响凝血机制的功能或是有协同抗凝作用[8]，如水合氯醛、阿司匹林、保泰松、氯贝丁酯、吲哚美辛等可使口服抗凝药物在血液中浓度明显增高。有资料表明，大剂量使用青霉素，当血浆青霉素浓度达5000 U/ml时，PT、APTT明显延长，且随药物浓度的增加而时间延长[9]；头孢哌酮具有甲硫甲唑环的侧链与前凝血酶原相仿；羧酶可错误地与抗生素结合而导致凝血酶原的形成减少，干扰肝脏中维生素K的代谢，导致低凝血酶血症[10]。肝素、华法林、双香豆素、低分子右旋糖酐等可抑制凝血酶，从而妨碍纤维蛋白原变为纤维蛋白，阻止血小板的黏附和聚集，使血浆中抗凝物质含量增多，影响凝血试验，使凝固时间延长，有以上病史或药物史的患者都有可能影响血凝检测结果。

6 正确使用仪器，精心维护、保养仪器是获取准确检验结果的保障

严格按照仪器的操作规程使用仪器，按照使用说明定期对仪器进行维护、保养和校准，使用仪器配套试剂，保证试剂上机的稳定性，更换试剂的批号要重新定标，保持室内质控的连续性，均是获取准确检验结果所必需的。

综上所述，血凝试验结果受多因素影响，以上是在进行血凝试验过程中及在参加相关培训学习过程中，对影响试验结果的因素所进行的归纳总结和一些粗浅体会，对于从事临床检验的工作者来说，应引起重视。在日常工作中只有规避这些影响因素，才能提供准确可靠的血凝试验结果，用于临床疾病的诊断和治疗。

[参考文献]

[1]刘颖燕，徐彩萍.样本采集对血凝检测结果的影响[J].检验医学，2008，23（2）：202-203.

[2]申子瑜，李萍.临床实验室管理学[M].北京：人民卫生出版社，2003：30-31.

[3]肖秀林，陈宏宇，王昌富，等.PT和APTT样本采集顺序和保存温度的探讨[J].上海医学检验杂志，2001，16（2）：104.

[4]从玉隆，王淑娟.今日临床检验学[M].北京：中国科学技术出版社，1997：10.

[5]张金莲.标本离心条件和放置时间对凝血酶原时间和活化部分凝血活酶时间的影响[J].郑州大学学报·医学版，2004，39（4）：675.

[6]汤荔，冯忠盈，曹文俊，等.样本存放时间对凝血指标影响的实验评估[J].检验医学，2010，25（1）：8-12.

[7]欧阳良良.血凝功能异常筛查试验影响因素分析[J].北方药学，2012，9（11）：74.

[8]彭春花，王秀华，陈元媛.血凝试验检验结果的影响因素分析[J].检验医学与临床，2010，7（16）：1733-1735.