高效液相色谱－蒸发光散射检测法测定脑络通胶囊中黄芪甲苷含量

岳 莉

（安徽省淮北市食品药品检验所，安徽 淮北 235000）

脑络通胶囊是由丹参浸膏、盐酸托哌酮、川芎浸膏、甲基橙皮 苷、黄芪浸膏、维生素B6制成的胶囊剂，具有扩张血管、增加脑血流量作用，主要用于脑血栓、脑动脉硬化、中风后遗症等。本制剂收载于国家食品药品监督管理局标准YBZ00702009、药典业发（2000）第 319号、国家食品药品监督管理局标准（试行）YBZ11852004[1]。该制剂执行标准多，但均未对黄芪的主成分黄芪甲苷进行含量测定。为更好控制该产品质量，采用高效液相色谱－蒸发光散射检测(ELSD－HPLC)法测定脑络通胶囊中黄芪甲苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters e2695 HPLC色谱系统；Empower Waters工作站；Waters 2424蒸发光散射检测器；超声波处理器（济宁奥波超声电气有限公司，批号为 JAC－300）；Mettler AE－240型电子分析天平（0.1 mg，0.01 mg）；YP202N 型电子分析天平（0.01 g）。黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110781－200613，供含量测定用）；脑络通胶囊（广东罗定制药有限公司，批号分别为110404，110502；四川泰华堂制药有限公司，批号为120104；烟台益生堂药业有限公司，批号为111002）；乙腈为色谱纯，正丁醇、氨水、乙醇为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Hypersil ODS2柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 － 水（30 ∶70）[2]；流速：1.0 mL ／min；柱温：25 ℃ ；进样量：20 μL。检测器条件：漂移管温度 50℃，检测器的增益为 135，喷雾器加热功率设置为60%。在此条件下，色谱图见图1。

2.2 溶液制备

精密称取黄芪甲苷对照品16.67 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得每1 mL中含0.666 8 mg的黄芪甲苷对照品溶液，作为对照品贮备液[3]。取装量差异项下内容物，混匀，精密称定 5 g，加甲醇 100 mL，置水浴上加热回流1 h，滤过，滤液蒸干[4]，残渣加水10 mL使溶解，用水饱和的正丁醇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇蒸干，残渣加水10 mL使溶解，用D101型大孔吸附树脂柱（内径 1.5 cm，长 12 cm）以水 50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按胶囊处方，称取除黄芪处的其他药材粉末5 g，按供试品制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：取2.2项下3种溶液，按拟订的色谱条件进样。在供试品溶液色谱中，与对照品溶液色谱相应的位置上有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间无色谱峰出现，表明没有其他成分干扰峰（见图1）。

线性关系考察：分别精密量取对照品贮备液 1.0，2.0，3.0，5.0，7.0 mL，置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，按上述色谱条件，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积的自然对数为纵坐标[5]，以黄芪甲苷对照品质量溶液浓度自然对数为横坐标（g／L），进行线性回归分析，得回归方程 lnY＝1.437 9 lnX＋18.347 2，r＝0.999 9(n＝5)。结果表明，黄芪甲苷质量浓度在0.066 7～0.466 8 g／L范围内与峰面积具有良好线性关系。

精密度试验：精密量取20 μL对照品溶液，连续进样5次。结果黄芪甲苷对照品峰面积的自然对数分别为16.706 4，16.790 5，16.7510，16.8052，16.7268，RSD 为 0.25%，表明仪器精密度良好。

图1 高效液相色谱图

稳定性试验：取同一供试品溶液（批号为 110404），于 2，4，8，22，24 h时分别进样测试，记录色谱图。结果黄芪甲苷峰面积自然对数的 RSD为0.44%，表明供试品溶液在24 h时内稳定性良好。

重复性试验：取同一批号的样品（批号为110404）6份，各测定2次，照样品测定项下方法测定，计算含量。结果黄芪甲苷的平均含量为0.496 3 mg／g，RSD为 1.73%，表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的样品（批号为110404）9份，分别精密加入对照品，按2.2项下制备方法得加样回收率试验溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪，依法测定。结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验结果(n＝9)

2.4 样品含量测定

取本品 3批，各取2份，称取细粉 5 g，按2.2项下制备方法得样品溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，用回归方程计算含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

ELSD是近几年应用在色谱方面的新型检测器，为质量通用型检测器，其响应值取决于被测物质颗粒的数量和大小，特别是对无紫外吸收或紫外末端吸收物质具有较高的检测灵敏度，已成为中药分离分析的重要有效方法。

在色谱条件选择的过程中，经试验，乙腈 －水（30∶70）为流动相时分离效果好，峰形对称，保留时间适宜，杂质峰达到基线分离，阴性无干扰。

对样品提取时正丁醇用量进行了考察，分别比较了用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次50 mL，每次40 mL，每次30 mL，结果提取4次、每次40 mL的提取效果最高。

[1]YBZ11852004，国家食品药品监督管理局标准（试行）[S].

[2]唐丽香.ELSD－HPLC法测定前列通胶囊中黄芪甲苷的含量[J].海峡药学，2010，22（8）：105 －106.

[3]涂兴明，李赐恩，吴康郁.高效液相色谱－蒸发光检测法测定伤骨健胶囊中黄芪甲苷的含量[J].中药材，2010，33（6）：999 －1 000.

[4]刘浩文，刘嘉仪，杨妙荣等.黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的两种方法的比较研究[J].中药新药与临床药理，2011，22（6）：659 －662.

[5]朱晓威，姜启娟.高效液相色谱法测定复方三七口服液中黄芪甲苷含量[J].中国药业，2009，18（2）：28.