高效液相色谱法测定水氯甲痤疮凝胶剂中3组分含量

李 容，舒德忠，徐道英，王柏桉，郑维国

（重庆市涪陵中心医院药剂科，重庆 408000）

水氯甲痤疮凝胶剂是由水杨酸、氯霉素和甲硝唑3组分为主药，以新型的高分子药用辅料卡波姆－940等为辅料制成的凝胶剂，是由我院曾使用的痤疮Ⅰ号改进而来。痤疮Ⅰ号是由2%水杨酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑以75%乙醇为溶剂溶解配制而成的溶液剂，用于青少年痤疮，临床疗效确切，不良反应少，深受广大痤疮患者的喜爱，并产生了很大的经济效益。但其在皮肤表面滞留时间较短，药物迅速从皮肤中清除，生物利用度低，对皮肤有刺激性，且溶液剂不便于使用和携带。卡波姆系水溶性凝胶，易于清除、清洗，是制备外用凝胶的理想辅料。为此，以2%水杨酸、1%氯霉素和0.5%甲硝唑为主药，以卡波姆、甘油、薄荷脑、三乙醇胺、丙二醇和乙醇等为辅料制成凝胶剂。该产品均匀细腻，稠度适宜，易于涂展，对皮肤无刺激性，工艺简单，质量可控。为确保该制剂的疗效和质量，采用高效液相色谱法不经分离同时测定水氯甲痤疮凝胶剂中主药水杨酸、氯霉素和甲硝唑的含量[1－2]，现报道如下。

1 仪器与试药

UV－2401型紫外分光光度计（日本岛津）；LC－20AT型高效液相色谱仪（日本岛津），包括SPD－M20A型光电二极管阵列检测器、CBM－20ALite系统控制器、CTO－10ASVP型柱温箱；TG328B型电光分析天平（上海天平仪器厂）；电热恒温鼓风干燥箱（上海一恒科技有限公司）。水杨酸对照品（批号为100106），氯霉素对照品（含量 99.5%，批号为 130555），甲硝唑对照品（批号100191），均来自中国药品生物制品检定所；水杨酸原料药（镇江前进化工有限公司，批号为120201）；氯霉素原料药（南京白敬宇制药有限责任公司，批号为CH111032）；甲硝唑原料药（广西河池化工医药股份有限公司，批号为101106）；甲醇（色谱醇，成都市科龙化工试剂厂，批号为20120728），水为注射用水（四川科伦药业股份有限公司，批号为M12070708），其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 凝胶剂制备

按处方量称取甘油和卡波姆，将卡波姆均匀撒于甘油表面，用玻棒轻轻搅拌浸润，加适量纯化水，搅匀，放置过夜，溶胀即得基质。将水杨酸、氯霉素和薄荷脑溶于处方量的乙醇和丙二醇中，将甲硝唑溶于80℃纯化水中，把上述两溶液分别加入溶胀好的卡波姆基质中，搅拌均匀，加三乙醇胺调节pH至6～7，再加纯化水使成100 g，搅拌均匀呈稠状，即得水氯甲痤疮凝胶剂。

2.2 溶液配制

精密称取水杨酸对照品30 mg，置25 mL容量瓶中，用少量乙醇溶解，加纯化水至25 mL，摇匀作水杨酸对照品贮备液；精密量取水杨酸对照品储备液1.5 mL，置10 mL容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，即得含水杨酸180 μg／mL的对照品溶液。精密称取氯霉素对照品15 mg，置25 mL容量瓶中，用少量乙醇溶解，加纯化水至25 mL摇匀作氯霉素对照品贮备液；精密量取氯霉素对照品贮备液1.5 mL，置10 mL容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，即得含氯霉素 90 μg／mL的对照品溶液。精密称取甲硝唑对照品7.5 mg，置25 mL容量瓶中，用少量热水溶解，加纯化水至 25 mL摇匀作甲硝唑对照品贮备液。精密量取甲硝唑对照品贮备液1.5 mL，置10 mL量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，即得含甲硝唑45 μg／mL的对照品溶液。取水氯甲痤疮凝胶剂1 g，精密称定，用纯化水溶解，过滤至100 mL容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。按照水氯甲痤疮凝胶剂处方制备不含水杨酸、氯霉素和甲硝唑的空白凝胶，按供试品溶液的制备方法操作，即得阴性对照品溶液。

2.3 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：VP － ODS C18柱（150 mm ×4.6 mm，4.6 μm）；流动相：甲醇 － 水 － 冰醋酸（50 ∶50 ∶1.2）；流速：1.0 mL ／min；检测波长：280 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μL。试验过程空调控温在 25 ℃。在上述色谱条件下，将水杨酸、氯霉素和甲硝唑对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液分别进样20 μL，记录色谱图，见图1。供试品和对照品溶液的色谱图在相同的保留时间有一相同的色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间处无干扰。

图1 高效液相色谱图

2.4 方法学考察

线性关系考察：精密吸取水杨酸、氯霉素、甲硝唑对照品贮备液各 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，置 10 mL 容量瓶中，用纯化水稀释至刻度，摇匀。分别取上述各溶液平行进样3次，记录峰面积。以峰面积对质量浓度进行线性回归，得标准曲线方程。结果见表1。

表1 线性关系考察结果

精密度试验：取线性关系考察项下水杨酸、氯霉素和甲硝唑各1个质量浓度的对照品溶液，分别在不同时间测定5次。结果的 RSD分别为2.70%，2.50%，1.13%，表明该方法精密度较好。

重复性试验：分别精密称取同一批样品适量，共6份，依法制备供试品溶液，进样测定含量。结果水杨酸、氯霉素和甲硝唑平均含量占标示量的 102.44%，101.49%和 101.63%，RSD分别为0.95% ，0.79% 和 0.78% ，表明方法重现性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h 时测定。结果水杨酸、氯霉素和甲硝唑的 RSD分别为1.23%，0.95%和0.87%（n＝5），表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。

加样回收试验：按处方比例精密称定水杨酸对照品20.02 mg、氯霉素对照品9.86 mg、甲硝唑对照品5.03 mg，置 50 mL容量瓶中，加少许乙醇至完全溶解，再加纯化水至刻度，摇匀。分别取上清液 4，4，5，5，6，6 mL，置 10 mL 容量瓶中，加纯化水至刻度摇匀，进样测定，结果见表2。

表2 回收率试验结果（n＝6）

2.5 样品含量测定

取水氯甲痤疮凝胶剂1 g，精密称定，用纯化水溶解，过滤至100 mL容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，进样 20 μL测定。结果见表3。

表3 样品含量测定结果（n＝3）

3 讨论

水杨酸、氯霉素和甲硝唑的最大紫外吸收波长分别为296，280和316 nm，由于处方中氯霉素的含量居中，故选择280 nm作为测定波长，既保证氯霉素有最大吸收，同时也保证水杨酸和甲硝唑在此测定波长处有较大吸收。

根据文献，考察了甲醇－水按不同的比例作流动相系统[1－2]，结果发现氯霉素和甲硝唑峰形较好，但水杨酸峰有拖尾现象，且分离度不好。经过调整，用甲醇 －水 －冰醋酸（50∶50∶1.2）作流动相系统，水杨酸几乎无拖尾现象，氯霉素和甲硝唑峰形无改变，辅料也无干扰。故选择甲醇－水－冰醋酸（50∶50∶1.2）作流动相系统，水杨酸、氯霉素和甲硝唑的保留时间分别为 2.40，4.60，6.70 min，分离度好。方法学考察结果表明，该方法重复性好，且操作简便，可作为水氯甲痤疮凝胶剂的含量测定方法。

[1]赵建颖.高效液相色谱法同时测定复方甲硝唑搽剂中甲硝唑和氯霉素含量[J].中国药业，2012，21（20）：40 －42.

[2]左惠芳，张金成，赵 静.HPLC法测定氯柳酊中氯霉素和水杨酸的含量[J].中国药师，2008，11（7）：869.