“江边一碗水”总木脂素的抗肿瘤作用及一般毒性的研究

邓旭坤，蔡 爽，蒋 捷，陈旅翼，舒广文，林亲雄，梅之南，高康丽

(中南民族大学 药学院，武汉 430074)

“江边一碗水”为小檗科山荷叶属植物南方山荷叶DiphylleiasinensisLi.的干燥根茎，又名“窝儿七”、“山荷叶”、“金鞭七”等，被称为恩施土家族“四大神药”之一[1,2]，主要分布在湖北恩施的鹤峰、建始、咸丰等地[3].民间土家医习惯上把同科植物八角莲(Dysosmaversipellis)的根茎也称之为“江边一碗水”，因其根茎的茎残基和叶片均呈碗口状，药材大多生长在高山林地靠近水源的荫凉处而得名.它具有祛风除湿、破瘀散结、活血止痛、镇咳平喘、解毒等功效，主治风湿性关节疼痛、癌症、跌打损伤、痈肿疮疖、毒蛇咬伤、月经不调、小腹疼痛等病症；但毒性较大，因“江边一碗水”服用不当引起急、慢性中毒的病例屡见报道[2,4,5].“江边一碗水”主要含有木脂素类、黄酮类、皂苷、鞣质和多糖等成分，其中以鬼臼毒素(podophyllotoxin)和脱氧鬼臼毒素(deoxypodophyllotoxin)为代表的环木脂内酯型木脂素是“江边一碗水”的主要的活性成分和毒性成分[6,7].

目前关于“江边一碗水”总木脂素(total lignans ofDiphylleiasinensis, TLDS)对动物移植性肿瘤的抑瘤实验和毒性很少见于报道.本文通过建立移植性肝癌实体瘤H22小鼠模型，观察了TLDS对肿瘤的抑制作用及其对荷瘤小鼠的肝肾功能、免疫系统和造血系统的毒性，为寻找“江边一碗水”抗肿瘤药效物质基础和临床治疗肿瘤提供了实验依据.

1 材料与方法

1.1 药材、细胞和动物

“江边一碗水”药材采自恩施鹤峰地区，经中南民族大学药学院万定荣教授鉴定为小檗科山荷叶属植物南方山荷叶DiphylleiasinensisLi.的干燥根茎.5-氟尿嘧啶(上海晶纯试剂有限公司, 批号5402)，0.9 %氯化钠注射液(武汉滨湖双鹤药业有限公司, 批号130206)，其他为市售分析纯试剂.SPF级昆明种雄性小鼠(27～33 g,湖北省疾病预防控制中心, 42000400000361).H22肝癌细胞株(武汉大学中国典型培养物保藏中心)，本室传代保种.

1.2 总木脂素的制备

TLDS的提取：称取“江边一碗水”药材粉末500 g，分别用8倍量、6倍量、4倍量的75 %酸性乙醇回流提取3次每次1 h，所得滤液60 ℃减压浓缩，调节pH值至中性，再用乙醚溶解，经多次纯化后，60 ℃减压浓缩成膏状.

1.3 H22荷瘤小鼠模型的建立

参考文献[8-10]，取昆明种小鼠，常规饲养.另取传代保种7～8 d，生长旺盛无溃破的荷H22腹水瘤小鼠，颈椎脱臼处死，在超净工作台上从腹腔抽取乳白色瘤液，经台盼蓝染色确定细胞生长状态良好后，用无菌的0.9 %氯化钠注射液稀释为1×108/mL的细胞悬液，接种于小鼠右前肢腋下0.2 mL/只.

1.4 动物分组与给药

在接种24 h后，将小鼠随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组(NS, ig)，阳性对照组(5-FU,10 mg/kg, ip)，TLDS低、中、高剂量组(50, 100, 200 mg/kg, ig).按0.02 mL/g给药，每天1次，连续10 d，观察记录各组小鼠生存状况并称重.

1.5 指标检测

小鼠于末次给药后禁食不禁水12 h以上，次日脱颈椎处死，剥离瘤块、胸腺和脾脏，分别称重，根据下式计算抑瘤率和胸腺、脾脏指数.

抑瘤率(%)=(平均瘤重模型对照组-平均瘤重实验组)/平均瘤重模型对照组×100%，

器官指数=10×器官重量(mg)/实验后体重(g).

1.6 数据处理

2 结果与分析

2.1 TLDS对移植性H22荷瘤小鼠肿瘤抑制作用

TLDS对H22荷瘤小鼠抑制作用见表1.由表1可见， TLDS能够使瘤重明显减轻，对小鼠肿瘤具有明显的抑制作用，与模型对照组相比，50 ～ 200 mg/kg能显著抑制肿瘤的增殖(p<0.01)，呈剂量依赖性； 200 mg/kg TLDS抑瘤效果最好，抑瘤率可达到62.11 %.而阳性对照组抑瘤率达84.4%同样具有较好的抗肿瘤效果.

表1 TLDS对H22荷瘤小鼠肿瘤生长抑制作用(n=10)Tab.1 The inhibitory effect of TLDS on the growth of H22 mice (n=10)

与模型对照组比较,**p<0.01

2.2 TLDS对移植性H22荷瘤小鼠体重的影响

为观察TLDS对H22荷瘤小鼠的毒性，测定了实验前后小鼠的体重，结果见表2.表2中实验后TLDS各剂量组同实验前小鼠体重相比无明显变化(p>0.05)，而实验后阳性组同模型组相比体重显著降低(p<0.05).

表2 TLDS对H22荷瘤小鼠体重的影响(n=10)Tab.2 The effect of TLDS on the weight of H22 mice(n=10)

与模型对照组比较,*p<0.05

2.3 TLDS对H22荷瘤小鼠免疫器官重量和指数的影响

TLDS对H22荷瘤小鼠免疫系统影响结果见表3.由表3可见，TLDS低、中、高剂量组均能显著地提高H22荷瘤小鼠的胸腺的重量及其指数(p<0.05或p<0.01)；TLDS高剂量组较模型组有提高脾重及脾指数的作用(p<0.05)，而阳性组较模型对照组相比则有抑制脾指数的作用.

表3 TLDS对H22荷瘤小鼠免疫器官重量和免疫器官指数量影响(n=10)

与模型对照组比较,*p<0.05，**p<0.01

2.4 TLDS对H22荷瘤小鼠血常规指数的影响

白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血小板(PLT)的数量与血红蛋白(HGB)含量等血常规指数是评价动物造血系统状态和功能的重要参数. TLDS对H22荷瘤小鼠血常规指数的影响结果见表4.由表4可见，阳性组小鼠的白细胞数量显著性地低于模型组(p<0.01)，说明5-FU对H22荷瘤小鼠的造血系统有明显的抑制作用.而TLDS各剂量组小鼠的白细胞、红细胞、血小板的数量与血红蛋白含量与模型组相比无显著性差异(p>0.05)，说明TLDS对H22荷瘤小鼠的造血系统(血常规指数)无不良影响.

表4 TLDS对H22荷瘤小鼠血常规指数的影响(n=10)

与模型对照组比较,**p<0.01

2.5 TLDS对H22荷瘤小鼠肾功能的影响

血清中尿酸(UA)和肌肝(CRE)值是衡量肾功能非常重要的两个指标.当肾功能减退时常伴有血清尿酸(UA)和血肌酐值(CRE)增高，多数意味着肾脏受损. TLDS对H22荷瘤小鼠肾功能的影响结果见表5.由表5可见，TLDS各剂量组尿酸与模型组相比含量均显著性降低(p<0.05)，而TLDS各剂量组血清肌肝含量较模型组无显著性差别(p>0.05)，说明TLDS对H22荷瘤小鼠肾功能无不良影响.

表5 TLDS对H22荷瘤小鼠肾功能指数的影响(n=10)Tab.5 The effect of TLDS on renal function index of H22 mice(n=10)

与模型对照组比较,*p<0.05，**p<0.01

2.6 TLDS对H22荷瘤小鼠转氨酶的影响

谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)水平是衡量肝功能非常重要的两个指标.对当动物血液中的AST和ALT水平异常升高时，说明动物的肝脏受到一定程度的伤害. TLDS对H22荷瘤小鼠转氨酶的影响结果见表6.由表6可见，TLDS各剂量组与模型组相比谷草转氨酶和谷丙转氨酶的含量均无明显变化(p>0.05)，说明TLDS对H22荷瘤小鼠的肝功能(转氨酶水平)无不良影响.

表6 TLDS对H22荷瘤小鼠肝功能指标(转氨酶)的影响(n=10)Tab.6 The effect of TLDS on liver function index (Transaminase) of H22 mice(n=10)

3 讨论

“江边一碗水”含有多种化学成分，其主要活性成分为鬼臼毒素类木脂素.鬼臼毒素类木脂素具有显著抗肿瘤作用长期备受关注[11,12]，本文建立了体内动物移植瘤实验，不仅研究了“江边一碗水”中总木脂素部位(TLDS)对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用，还考察了TLDS对H22小鼠的造血系统、免疫系统和肝、肾功能等各方面的影响.结果表明：TLDS能够显著地抑制H22荷瘤小鼠肿瘤的增殖；在毒性方面，TLDS对H22荷瘤小鼠的体重无明显抑制作用； TLDS对荷瘤小鼠的造血系统和肝、肾功能指数的影响也不甚显著；还在一定程度上有提高H22荷瘤小鼠免疫器官指数的趋势.

总之，TLDS对H22荷瘤小鼠表现出良好的抗肿瘤和较低的毒性，说明TLDS可能是“江边一碗水”的抗肿瘤药效物质基础，提示改善荷瘤小鼠的免疫系统状态和机能是“江边一碗水”总木脂素抗肿瘤作用的机理之一，还有待于深入研究去证实.

参 考 文 献

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