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紫外可见分光光度法测定藏药藏边大黄中游离蒽醌和结合蒽醌含量△

2014-07-30顿珠次仁严志宏

中国民族医药杂志 2014年3期
关键词:三氯甲烷蒽醌黄素

顿珠次仁 多 吉 严志宏 刘 青 达 瓦 罗 珍

(西藏藏医学院实验标本中心,西藏 拉萨 850000)

藏边大黄系蓼科大黄属波叶组植物Rheum emodi Wall的根与根茎,主要分布在西藏、青海、四川及云南等省,多为野生,西藏部分地区有种植。其根及根茎的藏名叫曲扎,藏医、蒙医用于治疗胃肠炎、肾炎,外用止血、治疮、消炎、愈伤口等;大黄供应紧张时,也曾调往各省区作大黄使用。《藏药志》载:藏边大黄,味酸,苦,性寒,能排出毒家、腑热和培根病。藏边大黄含有丰富的蒽醌类化合物,如大黄素、大黄素甲醚和大黄酚等[1],其具有明显的抗菌消炎、免疫调节、抗衰老以及抗肿瘤等作用[2]。蒽醌类化合物在藏边大黄药材中以结合态和游离态两种形式存在。本文采用紫外分光光度法,以醋酸镁的甲醇溶液为显色剂,通过比色测定藏边大黄中蒽醌类成分的含量[3-4],为进一步开发藏边大黄资源提供参考,也可为制订其质量指标提供方法依据。

1 仪器及试药

UV-2100紫外可见分光光度计(郑州南北仪器设备有限公司);CPA224S电子分析天平(赛多利斯);醋酸镁(Mg(Ac)2)、乙醇、乙醚、三氯甲烷、甲醇为分析纯(廊坊鹏彩精细化工有限公司),大黄素标准品购自中国生物制品检定所;藏边大黄于2013年7月采于西藏拉萨市堆龙德庆县楚布河上游山坡(海拔4300米),经西藏藏医学院实验标本中心多吉教授鉴定为Rheum emodi Wall。

2 样品的制备和测定方法

2.1 对照品溶液的制备:取大黄素对照品精密称量,加0.5%醋酸镁甲醇溶液定容配制成 6.132、8.063、9.988、12.036、13.993、16.077、18.12μg·mL-1的对照品溶液。

2.2 样品溶液的制备:①号供试品溶液,精密称量约0.5g样品(过60目)粉末,用索氏提取器三氯甲烷回流提取至提取液无色,浓缩提取液并转移至50mL容量瓶中,加三氯甲烷至刻度,备用。②号供试品溶液,精密称量约0.5g样品(过60目)粉末,用索氏提取器95%乙醇回流提取至提取液无色,浓缩提取液并转移至100mL容量瓶中,加95%乙醇至刻度。准确量取10mL溶液置100mL圆底烧瓶中.加热挥去乙醇,加入30mL硫酸溶液(2.5moL·L-1)加热回流1.5h,待冷却后加三氯甲烷20mL,加热回流2h,待冷却后置分液漏斗中,用三氯甲烷清洗圆底烧瓶,并入分液漏斗,分离油层和水层,水层继续用少量三氯甲烷洗涤4次并人油层,然后用少量蒸馏水洗涤数次至水层为中性为止,油层置50mL容量瓶中,加三氯甲烷稀释置刻度,摇匀,备用。

2.3 测定方法:从①号和②号供试品溶液中分别量取等量的2mL至10mL容量瓶中,自然挥去三氯甲烷,各加入0.5%Mg(Ac)2甲醇溶液并稀释至刻度,用紫外可见分光光度计以甲醇为空白,在最大吸收波长处分别测定吸光度A1和 A2(0.5%Mg(Ac)2,),依标准曲线计算 C1和 C2。(C1为游离蒽醌含量,C2为总蒽醌含量,结合蒽醌含量=总蒽醌含量一游离蒽醌含量)

2.4 最大吸收波长选择:取对照品大黄素标准溶液(9.988μg·mL-1),在200~800nm波长范围内测定其吸光度,可知溶液的最大吸收波长为512nm,与文献报道相吻合。

2.5 线性关系考察:取对照品溶液适量,加0.5%Mg(Ac)2 制成浓度分别为 6.132、8.063、9.988、12.036、13.993、16.077、18.12μg·mL-1的对照品溶液。以 0.5%Mg(Ac)2为空白,测定各溶液在512nm波长处的吸光度A,并以浓度C(μg·mL-1)为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线。回归方程为:Y=35.8X+0.0272(r=0.9994)。结果表明,大黄素的醋酸镁络合物在 6.2-18.1μg·mL-1范围内有良好的线性关系,标准曲线见图1。

图1 对照品标准曲线

2.6 精密度试验:取大黄素加醋酸镁甲醇对照品溶液(16.077μg·mL-1),在 512nm 波长处测定吸光度,RSD=0.21%(n=5)。结果证明此方法精密度很好。

2.7 稳定性试验:取大黄素加醋酸镁甲醇对照品溶液(16.077μg·mL-1),分别于 0、2、4、6、8、10、12、14h 测定512nm吸光度,RSD=0.34010,证明此方法稳定性较好。

2.8 重复性试验:取藏边大黄药材的样品12份(每份约0.5g),按“2.2”方法制备并测定供试品溶液。结果,游离蒽醌平均含量为0.652%(RSD=1.52%,n=6),总蒽醌平均含量为 5.38%(RSD=2.83%,n=6)。

2.9 总蒽醌加样回收率试验:精密称取3份总蒽醌含量已知的藏边大黄药材(总蒽醌含量为5.43%),每份约0.3g,另精密称定对照品大黄素 0.84mg、11.38mg 和 15.69mg,将此3份对照品分别加入3份样品中,按“2.2”项下②号供试品溶液制备方法制备并测定。计算加样回收率。结果显示,平均加样回收率为 99.8%(RSD=2.94%)。

3 样品测定

取藏边大黄药材粉末(过60目)4份(每份约0.5g),按照“2.2”项下方法制备供试品溶液,两份测定游离蒽醌,两份测定总蒽醌,测定吸光度,根据标准曲线计算样品中蒽醌含量,结果见表1。平均结合蒽醌含量=平均总蒽醌含量一平均游离蒽醌含量=4.732%)。

表1 藏边大黄样品当中游离蒽醌和总蒽醌的测定结果表

4 讨论紫外可见分光光度法测定蒽醌含量常用两种方法,分别是碱液法和醋酸镁法,碱液法蒽醌一般在0.5h吸光度最大,th后出现缓慢衰减;醋酸镁法在1.5h内吸光度比较稳定,同时醋酸镁法较碱液法简便、稳定性高、重复性好。

[1]刘兵,杨静,王署.藏边大黄的化学成分研究[J].华西药学杂志,2007,22(1):033-035.

[2]李军林,王志斌,李家实,藏边大黄降血糖作用的研究[J].中药材,1997,20(5):249-250.

[3]姚桂根,孙小萍,马星航,等.用醋酸镁一甲醇比色法测定何首乌及其制剂中蒽醌类成分的含量[J].中草药,1983,14(6):15-18.

[4]高言明,陈海云,吴小宇.醋酸镁一甲醇分光光度法测定何首乌中蒽醌类化合物的含量[J].微量元素与健康研究,20104,(2):41-42.0

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