大鼠干眼模型的建立及其角膜神经的改变△

刘会娟 黄悦 张琰 李斐 赵少贞

大鼠干眼模型的建立及其角膜神经的改变△

刘会娟 黄悦 张琰 李斐 赵少贞

干眼；动物模型；氢溴酸东莨菪碱；皮下注射；角膜神经

目的通过皮下注射氢溴酸东莨菪碱建立大鼠干眼模型，并对其眼表病理及角膜神经改变进行观察分析。方法6周龄Wistar健康雌性大鼠32只，随机分为高(H)、中(M)、低(L)剂量组和对照(C)组，每组各8只，H、M、L组皮下注射东莨菪碱，剂量分别为6 mg·mL-1、4 mg·mL-1、2 mg·mL-1，C组皮下注射生理盐水。用药后0 d、7 d、14 d、21 d、28 d对各组大鼠行泪液分泌试验(Schirmer I test，SIt)、泪膜破裂时间(break-up time，BUT)、角膜上皮荧光素钠染色及泪液蕨类试验分析。用药后28 d时，处死大鼠取整个眼球，石蜡切片后行HE及PAS染色；其余眼取角膜行Real-time PCR及神经氯化金染色。结果H组大鼠在用药后7 d即出现BUT缩短为(6.800±1.033)s，与C组(9.111±1.269)s比较差异有显著统计学意义(P<0.01)，H组较L组缩短(P<0.05)。14 d时，H、M、L组的BUT分别为(5.200±0.632)s、(7.200±0.789)s和(9.000±0.816)s，短于C组(10.222±1.302)s，差异均有统计学意义(均为P<0.05)；H、L、M组两两比较，差异均有显著统计学意义(均为P<0.05)。随着时间延长，H、M、L组的BUT进一步缩短。用药后21 d、28 d，除21 d时L组与C组、H组与M组差异无统计意义(均为P>0.05)外，余组间差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。用药后7 d， H组、M组出现少量角膜上皮细点状荧光素钠着色，并随实验进程角膜上皮染色分级逐渐加重。用药后14 d，H组、M组的泪液分泌开始减少，分别为(5.200±0.978)mm 、(6.350±1.528)mm，分别与C组(7.944±1.130)mm比较，差异均有统计学意义(均为P<0.05)；21 d，各组的泪液分泌量略有增加；用药后28 d，H组、M组的泪液分泌量分别为(4.900±1.075)mm、(5.650±0.747)mm，较C组(7.600±1.600)mm显著减少(均为P<0.01)。而L组的泪液分泌量在各时点均较C组无明显减少(均为P>0.05)。泪液蕨类试验显示，H、M、L组泪液蕨类物结晶数量减少，分支减少，形态不完整，其中H组改变最明显。HE染色显示，H、M、L组角膜上皮增生，层数增加，角膜表面凹凸不平，基底细胞水肿、排列紊乱。其中，H组病变最明显，且可见空泡样变。用药后28 d，结膜杯状细胞除L组与C组差异无统计学意义外，余组间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。角膜神经氯化金染色及Real-time PCR结果显示，各组的角膜神经纤维密度和走形及神经生长因子的表达水平均无显著变化。结论皮下注射氢溴酸东莨菪碱可显著抑制大鼠泪液分泌，降低泪膜稳定性，引起眼表损伤，成功建立泪液缺乏为主的干眼模型，且干眼的进展呈时间和剂量依赖性，为进行干眼发病机制研究和干预治疗探索提供依据。

[眼科新进展，2014，34(5)：422-427]

干眼是由于泪液的质和(或)量或流体动力学异常引起的泪膜不稳定和(或)眼表损害，从而导致眼部不适症状及视力障碍的一类疾病[1]。随着环境恶化以及人们生活习惯改变与眼部用药增加，干眼发病率日趋增高。流行病学调查发现全球15%～35%的人群均已出现了干眼相关的症状或体征[2-3]，严重影响了人们的视觉和生活质量。干眼动物模型是研究干眼发病、发展与转归的重要手段，根据临床上干眼不同的发病机制建立合适的动物模型是进行实验研究的基础。本研究拟通过皮下注射氢溴酸东莨菪碱建立泪液分泌不足型大鼠干眼模型[4]，对其病理生理学及角膜神经改变进行研究，分析该模型作为干眼研究动物模型的科学性、实用性，并为进一步的治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1实验动物6周龄Wistar健康雌性大鼠32只(64眼)，体质量为160～180 g(中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供)。

1.2试剂与仪器东莨菪碱氢溴酸盐(美国Sigma公司)，泪液分泌酚红棉线(天津晶明新技术发展有限公司)，荧光素钠注射液(美国 Alcon Laboratories，Inc)，PAS试剂盒(北京中杉金桥有限公司)，SYBR Green 2×Master Mix、Trizol试剂盒和逆转录试剂盒(美国Thermo公司)，7900HT Fast Real-time PCR仪(爱普拜斯应用生物系统贸易上海有限公司)，点样毛细玻璃管(华西医科大学仪器厂)，光学显微镜(日本OLYMPUS)，裂隙灯显微镜(重庆康华公司)。

1.3实验方法

1.3.1大鼠干眼模型的建立选6周龄健康Wistar雌性大鼠32只，采用随机数字表法分为4组，分别为高(H)、中(M)、低(L)剂量组和C组(对照组)，每组各8只，H组、M组、L组后肢皮下注射氢溴酸东莨菪碱，H组、M组、L组剂量分别为6 mg·mL-1、4 mg·mL-1、2 mg·mL-1；C组皮下注射生理盐水。各组每天注射4次(9点、12点、15点、18点)，每次0.5 mL，左右两侧交替进行，连续28 d。用药后0 d、7 d、14 d、21 d、28 d对各组大鼠行泪液分泌试验(Schirmer I test，SIt)、泪膜破裂时间(break-up time，BUT)、角膜上皮荧光素钠染色及泪液蕨类试验分析。用药后28 d，颈椎脱臼法处死大鼠，取整个眼球，石蜡切片后行HE及PAS染色后光镜下观察。若用药后28 d，H组、M组、L组大鼠的各指标与C组比较差异均有统计学意义则为造模成功。造模成功后取大鼠角膜Real-time PCR测定角膜中神经生长因子(nerve growth factor，NGF)mRNA的水平，氯化金染色观察角膜神经形态。

1.3.2BUT测定将1 μL 10 g·L-1液态荧光素钠滴至结膜囊并闭合眼睑，裂隙灯显微镜钴蓝光下观察。3次瞬目后，以最后1次瞬目开始计时，至角膜出现第1个黑斑的时间即为BUT。

1.3.3角膜上皮荧光素钠染色及评分大鼠结膜囊内滴入1 μL 10 g·L-1液态荧光素钠90 s后，在裂隙灯显微镜钴蓝光下观察角膜上皮荧光素钠着色情况并评分。将角膜平均分为4个象限并分别评分，将所有分值相加即为最后得分。评分标准[5]：0分：无着色；1分：点状着色≤30个；2分：点状着色>30个但不弥散；3分：严重的弥散性着色但尚未形成斑块状；4分：有斑块状着色。

1.3.4SIt试验在用药后0 d、7 d、14 d、21 d、28 d的同一时间段使用酚红棉线进行SIt测试泪液分泌量。大鼠眼表不使用麻醉药物，用镊子夹持酚红棉线，将其置于大鼠下睑结膜囊中外1/3处，停留30 s取出。测量棉线湿润的长度并记录(读数精确到0.5 mm)。

1.3.5泪液蕨类试验大鼠眼部未使用表面麻醉药物，点样毛细玻璃管在下睑结膜囊泪阜处利用虹吸作用吸取泪液标本，尽量不接触眼表。将泪液标本涂至洁净载玻片上，25 ℃(空调控制温度)下干燥10～20 min后，置于光学显微镜下观察泪液蕨类物的形态并拍照。

1.3.6眼球石蜡切片HE及PAS染色颈椎脱臼法处死大鼠，迅速取下包括上下眼睑在内的整个眼球。100 g·L-1多聚甲醛固定，常温下由低浓度至高浓度梯度酒精脱水，二甲苯透明后浸蜡、包埋，平行于眼轴方向切片，厚度为3 μm。石蜡切片后参照试剂操作说明分别进行HE及PAS染色。HE染色后光学显微镜下观察角膜组织病理学改变。每眼取6张不同等分位置的切片进行PAS染色，以胞质染色深红者为结膜杯状细胞，分别计数并取其平均值为该眼结膜杯状细胞数量的代表值。

1.3.7氯化金染色沿角膜缘取下大鼠角膜，生理盐水冲洗2 次；放入未被过滤的新鲜柠檬汁中；15 min后将角膜取出吸干，再放入10 g·L-1氯化金溶液中，上皮细胞面朝上，染色45 min后将角膜移入酸化水(100 mL 蒸馏水中加入6 滴冰醋酸)中浸泡5 h。依次置体积分数为70%、90%、100%的乙醇中脱水2 min。自角膜周边部向中央做4 条放射状切口便于铺平，二甲苯透明2次，每次3 min，甘油封片。光学显微镜下观察角膜神经纤维形态并拍照。

1.3.8RNA提取和Real-timePCR检测收集角膜组织，液氮中低温研磨，按照Trizol试剂盒说明书提取总RNA。继而取250 ng总RNA，DNase I处理后，以Oligo dT为引物，按试剂盒说明书行逆转录反应，制备cDNA。然后用CYBER Green real-time PCR的方法检测NGF mRNA的表达，以GAPDH为内参照。根据Pubmed中大鼠NGF(NM_001277055.1)、GAPDH (NM_017008.4)的基因CDS序列获得目的基因片段，用Primer Express 3.0软件设计Real-time PCR引物序列。NGF上游引物：ACTTCAGCATTCCCTTGACACA；下游引物：ACGGGCAGCTATTGGTTCAG。GAPDH上游引物：TGTGTCCGTCGTGGATCTGA；下游引物：CCTGCTTCACCACCTTCTTGA。引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。Real-time PCR扩增参数为： 50 ℃孵育2 min，95 ℃变性10 min，然后进行40次循环：95 ℃变性15 s，60 ℃退火/延伸1 min；加入解离阶段：95 ℃变性15 s，60 ℃退火15 s，然后95 ℃反应15 s，以判定扩增产物的特异性。扩增后，以2-ΔΔCt法分析所得数据。即ΔCt=目的基因Ct-内参照Ct，ΔΔCt=目的基因ΔCt-参照因子ΔCt。

2 结果

2.1泪膜稳定性的变化0 d时(皮下注射东莨菪碱前)，各组大鼠的BUT差异无统计学意义(P>0.05，见表1)。H组大鼠在用药后7 d BUT，与C组比较差异有显著统计学意义(P<0.01)，H组较L组明显缩短(P<0.05)，其余各组间两两比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。14 d时，H、M、L组的BUT与C组比较，差异均有统计学意义(均为P<0.05)，H、M、L组两两比较，差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。随着实验进程，H、M、L组的BUT进一步缩短。21 d时，各组两两比较，除L组与C组、H组与M组比较差异无统计学意义(均为P>0.05)外，其余组间比较差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)。28 d时，各组之间两两比较，差异均有显著统计学意义(均为P<0.01，见表1)。

表1 各组大鼠在不同时间的BUTTable 1 BUT of rats at different time points of each group(±s,t/s)

2.2角膜荧光素钠染色0 d时，各组均无明显的角膜上皮着色。用药后7 d时， H、M组出现少量角膜上皮细点状荧光素钠着色；14 d时，角膜荧光素钠染色评分H组、M组与C组比较，差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)，H组、M组与L组比较，差异也均有显著统计学意义(均为P<0.01)； 21 d、28 d时， H、M、L组角膜荧光素钠染色评分随时间延长逐渐加重，出现粗点状及小片状角膜上皮着色，其中H组部分角膜可见上皮弥漫性点片状着色，各组两两比较，除28 d时，H与M组之间差异无统计学意义(P>0.05)外，21 d、28 d时其余各组之间两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05，见图1和表2)。

表2 不同时间点各组大鼠角膜荧光素钠染色评分Table 2 Fluorescein staining score of rats at different time points of each group(±s,Score)

Figure 1 Images of corneal fluorescein staining on day 28.A:Group C;B:Group H;C:Group M;D:Group L 28 d时角膜荧光素钠染色图片。A：C组；B:H组；C:M组；D:L组

2.3大鼠泪液分泌量用药后0 d和7 d，H组、M组和C组间的泪液分泌量差异均无统计学意义(均为P>0.05，见表3)。14 d时，各组的泪液分泌量两两比较，仅H组、M组和C组比较差异有统计学意义(均为P<0.05)。21 d时，H、M、L组的泪液分泌量较14 d略有增加，但H组、M组和C组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。28 d时，H组、M组的泪液分泌量均显著减少，与C组比较，差异均有统计学意义(均为P<0.01)。L组各个时间点的泪液分泌较C组均无明显减少(均为P>0.05)。H、M、L组两两比较，14 d时H组较L组泪液分泌量减少，差异有统计学意义(P<0.01)；21 d时H组的泪液分泌量比M组、L组减少，差异均有显著统计学意义(均为P<0.01)；28 d时与L组比较，H组、M组的泪液分泌较少，差异有统计学意义(P<0.01、P<0.05)。余时间点其他组间比较差异均无统计学意义(均为P>0.05，见表3)。

表3 各组大鼠在不同时间的泪液分泌量Table 3 Tear volume of rats at different time points of each group(±s,l/mm)

2.4泪液蕨类实验C组大鼠泪液蕨类物形态良好；H组泪液蕨类物明显减少，仅见小的蕨类物形成；M组蕨类物及其分支明显减少；L组泪液蕨类结晶图像显示蕨类物的数量及形态与C组大致相同，无明显变化(图2)。

2.5眼表组织病理学改变HE染色显示C组大鼠角膜上皮由4～6层整齐排列的上皮细胞组成，其中基底为一单层柱状上皮细胞，排列整齐紧密。H、M、L组大鼠角膜上皮较C组明显增厚，细胞层数增加至10～12层，基底细胞层水肿、排列紊乱，角膜表面欠光滑， H组改变最为显著，且可见空泡样改变(图3)。

Figure 2 Images of tear ferns on day 21 under light microscope (×200).A:Group C;B:Group H;C:Group M;D:Group L 光镜下观察用药后21 d时泪液蕨类物代表性图片(×200)。A：C组；B:H组；C:M组；D:L组

2.6结膜杯状细胞计数用药后28 d，H、M、L、C组的结膜杯状细胞的数量分别为(63.2±5.3)个、(74.6±9.0)个、(109.0±10.4)个、(117.0±6.7)个，两两比较，除L组与C组之间差异无统计学意义(P>0.05)外，其他组间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。

2.7角膜神经氯化金染色及Real-timePCR检测角膜神经氯化金染色结果见图4。C组角膜缘粗大神经主干由角膜实质层进入，放射状向角膜中央走行，逐渐发出分支，构成上皮下神经丛，上皮下神经穿过上皮基底膜，发出垂直和水平分支。垂直分支走向角膜表面，构成神经末梢终末，水平分支构成基底束。H、M、L组与C组间角膜神经纤维的形态和密度无明显差异。Real-time PCR检测显示各组大鼠角膜的NGF mRNA的表达水平均未见显著变化(图5)。

Figure 3 Images of corneal HE staining (×200).A:Group C;B:Group H;C:Group M;D:Group L 用药后28 d时角膜HE染色图片(×200)。A：C组；B:H组；C:M组；D:L组

Figure 4 Images of rat corneal nerves stained by gold chloride (×200).A:Group C;B:Group H;C:Group M;D:Group L 光镜下观察大鼠角膜神经氯化金染色(×200)。A：C组；B：H组；C：M组；D：L组

Figure 5 NGF mRNA expression in cornea of each group on day 28 用药后28 d时各组大鼠角膜中NGF mRNA的表达

3 讨论

干眼是由各种原因引起的一种常见眼表疾病，其发病率逐年升高，但其发病机制迄今尚未完全明确。动物模型是现代生物医学中进行基础与临床研究的重要载体。依据干眼的发病原因制作不同的干眼动物模型，是研究其发病机制和治疗方法的基础。大鼠来源充足，价格便宜，体型相对较小，易于饲养和检测，成为干眼研究理想的实验对象。目前，国际上尚无统一的干眼分类标准。目前主要将干眼分为泪液生成不足型和蒸发过强型。而临床上所见干眼主要是由于泪液分泌不足造成的。签于此，我们使用东莨菪碱，通过药物作用抑制泪液分泌，从而建立泪液生成不足型干眼动物模型。

干眼的致病因素之间的关系尚未完全明了，至今尚无一种动物模型可以准确地再现该病频繁发生、逐渐恶化、进展缓慢、机制复杂的特点。目前已有多种建立干眼动物模型的方法，如通过改变营养或环境因素、毒性物质或药物作用、性激素分泌，去除泪腺或眼表的神经支配，诱导泪腺产生自身免疫反应，手术摘除泪腺及封闭睑板腺开口等均可制作出相应的干眼模型[5]，但均存在不同的局限性或全身并发症。东莨菪碱是从莨菪类植物中提取的具有抗胆碱活性的生物碱，能通过阻断毒蕈碱型乙酰胆碱受体(M受体)抑制乙酰胆碱介导的泪腺分泌[6-7]，与阿托品(1 mg·kg-1)肌肉注射[8]或局部滴眼[9-10]所致干眼相比，东莨菪碱对分泌腺的抑制作用更强，但对心脏、小肠、支气管平滑肌作用较弱，故可进行皮下注射，操作简单，既避免了全身或局部用药引起的毒副作用，又克服了眼表用药穿透性的限制，使药物作用更强更持久。

本研究中，皮下注射东莨菪碱建立干眼动物模型，能够引起泪液分泌明显减少及成分异常，BUT显著缩短，结膜杯状细胞减少，角膜荧光素钠染色增加，且呈现出明显的时间及剂量依赖性。同时眼表组织病理学改变提示随用药剂量增加，大鼠角膜表面欠光滑，上皮细胞层次增多、紊乱，失去整齐紧密的排列结构，降低稳定泪膜的作用。Viau等[11]亦发现通过皮下给予东莨菪碱可引起干眼的角膜上皮荧光素钠着色、黏蛋白分泌减少及角结膜组织病理学改变。此外，我们的实验还研究了泪液分泌和结膜杯状细胞这两项干眼关键指标。杯状细胞是高度分化的上皮细胞，位于结膜表面，能够合成、储存和分泌黏蛋白，构成泪膜的黏液层。其密度是衡量眼表黏蛋白分泌和眼表健康状况的重要指标，在干眼的研究中处于非常重要的地位[12]。既往研究也表明干眼可造成结膜杯状细胞减少[13]。值得注意的是，在我们的实验过程中，用药后21 d泪液分泌出现一个小的反跳，之后持续下降。这可能是大鼠机体本身对药物的一种代偿过程，而当药物对泪腺分泌的抑制作用持续存在时，可导致代偿机制逐步衰竭，进而致眼表受损，出现病理性改变。肖启国等[9]认为这种情况很可能与药物阻断胆碱能受体后泪腺中乙酰胆碱浓度代偿性增加有关。

此外，本研究中我们首次探讨了角膜神经与干眼的关系。眼表、主泪腺及其相互联系的神经共同组成泪腺功能单位。其任何一个环节结构或功能异常均可导致眼球表面受损，引起免疫炎症反应导致泪腺和神经功能障碍，进而发生干眼[14]。角膜神经是泪腺功能单位的重要结构，其形态和功能与眼表生理病理密切相关，对维持眼表的正常结构和功能起着重要作用。干眼患者往往出现角膜知觉异常，共聚焦显微镜扫描结果发现角膜神经呈现异常形态改变，在干燥综合征中更明显[15-16]。眼表高度表达NGF及其受体TrkA和p75，其在包括干眼在内的数种眼表疾病中发挥着重要作用[17-18]。本实验中角膜神经的大体形态及因子水平均未出现明显的变化，这可能和该模型所造成的干眼病变轻、观察时间短以及检测手段不够敏感有关。

既往研究表明，东莨菪碱皮下注射可能通过多种途径造成干眼[19]。一方面药物直接抑制泪腺及杯状细胞的分泌，另一方面泪液分泌的神经传导通路和眼表知觉异常引起反射性泪液分泌减少[20]。本研究结果也证实了东莨菪碱可抑制泪腺及结膜杯状细胞的分泌导致干眼。因此，皮下注射氢溴酸东莨菪碱可显著抑制大鼠泪液分泌，降低泪膜稳定性，引起眼表损伤，成功建立泪液缺乏为主的干眼模型，且干眼的进展呈时间和剂量依赖性，为进行干眼发病机制研究和干预治疗探索提供理想的实验平台。

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date：Sep 27，2013

The Fund of Tianjin Medical University Eye Hospital(No：20120404)From theTianjinMedicalUniversityEyeHospital，Tianjin300384，China

Establishment of rat dry eye model and changes of corneal nerve

LIU Hui-Juan，HUANG Yue，ZHANG Yan，LI Fei，ZHAO Shao-Zhen

dry eye;rat model;scopolamine hydrobromide;subcutaneous injection;corneal nerve

Objective To evaluate the pathology and corneal nerve changes of rat dry eye model induced by subcutaneous injection of scopolamine hydrobromide.Methods Thirty-two female Wistar rats about six weeks old were randomly divided into high (H)，medium (M)，low (L) dose group and control group (C)，8 cases in each group.Group H，M，and L were respectively injected with different concentrations of scopolamine hydrobromide (6 mg·mL-1，4 mg·mL-1and 2 mg·mL-1)，and normal sodium was injected in group C.The clinical signs of dry eye such as tear volume (Schirmer I test)，tear break-up time (BUT)，corneal epithelial fluorescein staining and tear ferns experiment were evaluated on day 0，7，14，21，and 28.On the 28th day，five eyes in each group were enucleated and processed for paraffin sections for HE and PAS staining;And the corneas of the other eyes were used for Real-time PCR and nervous gold chloride staining.Results BUT of group C and group H on day 7 were (9.111±1.269)s and (6.800±1.033)s，respectively，there was significant difference (P<0.01)，and group H was shorter than group L (P<0.05).On day 14，BUT of group H，M，L and C were (5.200±0.632)s，(7.200±0.789)s，(9.000±0.816)s and (10.222±1.302)s，respectively，group H，M，L was shorter than group C (allP<0.05)，there were statistical differences among group H，L and M (allP<0.05).There were statistical differences in BUT on day 28 between group L and C，group H and M (allP<0.01)，but no statistical difference on day 21 (allP>0.05).Group H and M showed a small amount of fine punctate corneal epithelial fluorescein staining on day 7，and the score of corneal epithelial staining gradually increased with the time prolong.The tear volume of group H and M decreased on day 14，which were (5.200±0.978)mm and (6.350±1.528)mm，respectively，compared with group C (7.944±1.130)mm，there were statistical differences (allP<0.05);The tear volume of group H and M on day 28 were (4.900±1.075)mm and (5.650±0.747)mm，respectively，compared with group C (7.600±1.600)mm，there were statistical differences (allP<0.01)，there was no statistical difference between group L and C at different time points (allP>0.05).Tear ferns test showed crystallization of the graphics and branches of the experimental group reduced，especially in group H.HE staining showed corneal epithelial hyperplasia，increased levels，surface uneven，basal cell edema and disarrangement in experimental group.Group H changed more obviously with vacuolations.There was no statistical difference in conjunctival goblet cells between group L and group C (P>0.05)，but there were statistical differences among other groups (allP<0.05).Nerve gold chloride staining and Real-time PCR results showed no change in corneal nerve fiber and nerve growth factor mRNA.Conclusion Subcutaneous injection of scopolamine hydrobromide can significantly inhibit lacrimal secretion，reduce tear film stability and cause damage to ocular surface，successfully establishing a rat dry eye model in a time-and dose-dependent manner to provide an ideal experimental platform for the research of pathogenesis of dry eye and clinical treatment.

刘会娟，女，1986年5月出生，河南安阳人，硕士。研究方向：眼表疾病与屈光。联系电话：13512058663;E-mail:liuhuijuan1228@163.com

AboutLIUHui-Juan：Female，born in May，1986.Postgraduate student.Tel:13512058663;E-mail:liuhuijuan1228@163.com

2013-09-27

天津医科大学眼科医院院内基金(编号：20120404)

300384 天津市，天津医科大学眼科医院

赵少贞，E-mail：zhaosz1997@sina.com

刘会娟,黄悦,张琰,李斐,赵少贞.大鼠干眼模型的建立及其角膜神经的改变[J].眼科新进展,2014,34(5):422-427.

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10.13389/j.cnki.rao.2014.0116

修回日期：2014-01-03

本文编辑：付中静

Accepteddate:Jan 3，2014

Responsibleauthor:ZHAO Shao-Zhen，E-mail：zhaosz1997@sina.com

[RecAdvOphthalmol，2014，34(5)：422-427]