液相色谱-串联质谱法测定草莓中二噻农残留

赫秀萍，毕瑞锋

[1.青岛科技大学化工学院，山东青岛 266042； 2.诺安检测服务(青岛)有限公司，山东青岛 266002]

液相色谱-串联质谱法测定草莓中二噻农残留

赫秀萍1，2，毕瑞锋2

[1.青岛科技大学化工学院，山东青岛 266042； 2.诺安检测服务(青岛)有限公司，山东青岛 266002]

采用盐酸酸化乙腈提取草莓中二噻农残留，提取溶液经无水硫酸钠和PSA净化后，利用安捷伦Poroshell 120 EC-C18色谱柱进行分离，以甲醇-水(体积比20∶80，含5 mmol／L乙酸铵溶液)作为流动相，ESI负离子模式下进行液相色谱-四极杆串联质谱分析。结果表明，在10～200 µg／L浓度范围内，线性关系良好，r2＞0.999 8，平均回收率为71.8%～78.3 %，相对标准偏差小于5% (n=6)，方法定量限为5 µg／kg。该方法简单快速，可满足新鲜草莓中二噻农残留检测工作的需要。

液相色谱-串联质谱法；二噻农；草莓

二噻农，又称二氰蒽醌，5,10-二氢-5,10-二氧萘并［2,3,6］-1，4-二噻-2,3-二硫代腈，是20世纪60年代由德国Merck公司开发的一种抑制孢子体萌发的保护性杀菌剂，具有广谱、低毒、使用安全的特点。

草莓以其味道鲜美且具有营养价值丰富的特点，备受消费者青睐，随着大棚种植技术的推广，草莓在我国种植面积逐年扩大，然而大棚草莓极易遭遇枯萎病的危害，从而造成减产。二噻农对草莓枯萎病菌具有良好的抑制效果，因此喷洒二噻农成为防治枯萎病的一种重要手段［1］,但草莓中的二噻农残留会对人体造成不良影响。为了保证消费者的身体健康，欧盟和日本针对草莓中的二噻农分别制定了限量标准，欧盟规定的最大残留限量为0.01 mg／kg，日本规定的最大残留限量为0.05 mg／kg。

目前国内食品中二噻农的检测方法主要采用高效液相色谱法［2，3］，国外最近有使用气相质谱法［4］和高效液相-串联质谱法［5］的报道，检测二噻农的食品包括苹果、葡萄、梨、辣椒等，没有针对草莓基质的方法研究。笔者在QuEChERs［6］方法的基础上进行了改进，结合高效液相色谱-串联质谱技术建立了草莓中二噻农残留的快速分析方法。该方法简单快速、灵敏度高，解决了检测二噻农时回收率低的问题。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱-四级杆串联质谱仪：1260／6460A型，美国Agilent公司；

顶盘天平：BSA2202S型，德国Sartorius公司；

均质器：Polytron PT3100D型，瑞士Kinematica公司；

高速离心机：上海菲恰尔分析仪器；

甲醇、乙腈：色谱纯，德国Merck公司；

二噻农固体标准品：纯度98.0%，德国Dr.Ehrenstorfer公司；

乙酸铵：HPLC级，美国Sigma公司；

PSA：N-丙基乙二胺，375μm (40目)，美国Agilent公司；

纯水：来自超纯水仪，电阻率大于等于18 MΩ·cm。

1.2 仪器工作条件

1.2.1 色谱条件

色谱柱：安捷伦Poroshell 120 EC-C18柱 (3.0 mm×100 mm，2.7 µm)；柱温：35℃；样品室温度：室温；进样量：2 µL；流量：0.5 mL／min；总运行时间：12 min。流动相A为5 mmol／L 乙酸铵甲醇-水(体积比20∶80)，溶液流动相B为5 mmol／L 乙酸铵甲醇溶液，梯度洗脱程序见表1。

表1 梯度洗脱程序

1.2.2 质谱条件

电离模式：ESI-模式；毛细管电压：3 000 V；喷嘴电压：500 V；干燥器温度：325℃；干燥气(氮气)流速：6 L／min；雾化气压力：276 kPa (40 Psi)；鞘气(氮气)温度：350℃；鞘气(氮气)流量：10 L／min；采集模式：多反应监测(MRM)模式。

表2 监测离子对

1.3 样品预处理

准确称取10.0 g混合均匀的新鲜草莓样品至50 mL塑料离心管中，依次加入5 mL水、1 mL 浓盐酸和10 mL乙腈溶液，剧烈混合1 min，然后加入5 g氯化钠，均质1 min，然后再以3 000 r／min离心10 min。移取3 mL上清液至15 mL塑料离心管中，加入1 g无水硫酸钠和20 mg PSA，混合后，以3 000 r／min离心5 min，取上清液过0.45 µm的尼龙滤膜后转入进样瓶中，上机分析。

2 结果与讨论

2.1 样品预处理方法优化

QuEChERS方法［6］是一种蔬菜水果样品中农药残留快速提取方法，利用吸附剂填料(无水硫酸镁、PSA、C18、石墨化炭黑)与基质中的杂质相互作用，吸附杂质从而达到除杂净化的目的。然而在提取过程中无水硫酸镁吸水的同时放热，虽然有助于农药的提取［7］，但可能会导致二噻农回收率不高［4］。金铨［4］的研究证明，二噻农在酸性和中性的乙腈中均非常稳定，而在碱性的乙腈-水(体积比30∶70)溶液中极不稳定。盐酸是提取二噻农良好的pH调节剂［8］，因此本实验选择乙腈作为提取溶剂，用氯化钠-盐酸进行酸度调节。

PSA作为分散SPE的吸附剂，可有效去除乙腈提取液中的脂肪酸、糖类、酚类等酸性成分以及极性色素［9］，由于PSA对二噻农有一定的吸附作用，所以对PSA的用量进行了考察。结果发现，每毫升提取液加入20 mg PSA 既能有效去除干扰，又不会明显影响二噻农的提取效果。

2.2 色谱条件的选择

Poroshell色谱柱是一种核壳结构的色谱柱，相对于同样规格的普通C18色谱柱，该色谱柱具有更小的系统背景压力和更高的柱效，有利于化合物的快速分析，因此被选为二噻农的分析柱。甲醇-水体系为液相色谱-质谱联用常用的流动相，实验证明在甲醇-水中添加5 mmol／L挥发性缓冲盐乙酸铵，比直接采用甲醇-水作为流动相目标物的响应更好；由于乙酸铵水溶液在室温环境下极易生长细菌，因此在弱洗脱相A相中添加20%的甲醇，在表1的梯度条件下，二噻农在4.39 min出峰，12 min内完成运行。

2.3 质谱条件的选择

配制质量浓度为5 mg／L的二噻农标准品用于质谱参数优化。首先在MS2 scan下进行母离子扫描，得到其准分子离子，在MS2 SIM下优化准分子离子对应的fragmentor值；通过子离子扫描Product Ion获得响应最高且最稳定的子离子，然后再利用多反应监测MRM模式优化得到子离子最大响应时的CE值，优化后的参数见表2。

对鞘气温度、鞘气流速、喷嘴电压进行了反复测试和优化，最终确定鞘气温度为350℃，鞘气流速为10 L／min，喷嘴电压为500 V，在该条件下目标物的响应值最高。

2.4 标准曲线方程和定量限

按1.3方法对草莓基质空白样品进行预处理，用提取的基质溶液准确配制质量浓度为5，10，50，100，200 µg／L的二噻农基质匹配校正标准溶液，在1.2仪器工作条件下进行测定。以质量浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程为Y=8.25X-5.06，相关系数r2＞0.999 8。图1为10 µg／L校正标准溶液的色谱图。

图1 二噻农溶剂标准品色谱图

根据10倍信噪比的添加浓度水平，确定该方法的定量限为5 µg／kg，低于欧盟和日本的限量水平。

2.5 回收率和精密度试验

向草莓基质空白样品中加入10，50，100 µg／kg 3个浓度水平的二噻农标准品进行回收试验，每个水平重复6次,检测结果见表3。由表3可知，平均回收率为71.8%～78.3%，相对标准偏差小于5% (n=6)，满足GB／T 27404-2008［10］对痕量分析的要求。

表3 回收率和精密度试验结果(n=6)

2.6 方法应用

从市场随机采购20个新鲜草莓样品，按1.3方法对样品进行处理后，用本法进行二噻农分析，均未发现阳性检出。用该方法对3个辣椒样品进行分析，未发现阳性结果，回收率良好，由此证明该方法对其它种类的基质具有通用性，但需要进一步实验确认。

3 结语

建立了液相色谱-串联质谱联用仪检测新鲜草莓中二噻农的定量分析方法，该方法具有样品处理简单快速，测定周期短，灵敏度、准确度高等优点，为食品安全监管提供了新的检测手段。

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［10］GB／T 27404-2008 实验室质量控制规范食品理化检测［S］.

Determination of Dithianon Residue in Strawberry by Liquid Chromatography-TandemMass Spectrometry

He Xiuping1，2， Bi Ruifeng2
［1. College of Chemical Engineering， Qingdao University of Science and Technology， Qingdao 266042， China； 2. Sino Analytica (Qingdao) Co. Ltd.， Qingdao 266002， China］

Dithianon residue was extracted with acidic acetonitrile，the extract was purified by anhydrous sodium sulfate and PSA powder，and separated by Agilent Poroshell 120 EC-C18column with methanol-water (volum ratio was 20∶80，containing 5 mmol／L ammonium acetate) as the mobile phase，and then determined by using liquid chromatography-tandem mass spectrometry under ESI negative ion mode. The linear relationship was fine in the range of 10-200 µg／L for dithianon, the relative coefficients r2＜0.999 8. The recovery was 71.8%-78.3 % with the relative standard deviations (RSDs) less than 5% (n=6)，and the quantification limit was 5 µg／kg. The developed method is simple，fast and can meet the requirements of determining dithianon in fresh strawberry.

liquid chromatography-tandem mass spectrometry; dithianon; strawberry

O657.7

A

1008-6145(2014)04-0048-03

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.04.014

联系人：赫秀萍；E-mail: 13969879875@163.com

2014-03-27