板桥党参多糖抗肿瘤活性实验研究

杨 瑾,董兴高,袁德培,熊茂来

1.湖北民族学院中医药学院(湖北 恩施 445000)2.湖北民族学院医学院(湖北 恩施 445000)

板桥党参多糖抗肿瘤活性实验研究

杨 瑾1,董兴高2,袁德培1,熊茂来2

1.湖北民族学院中医药学院(湖北 恩施 445000)2.湖北民族学院医学院(湖北 恩施 445000)

目的 初步研究板桥党参多糖的抗肿瘤活性。方法 MTT法检测板桥党参多糖体外抗肿瘤活性。对S180荷瘤小鼠灌胃板桥党参多糖，观察肿瘤的生长抑制情况。以最大给药量法对小鼠进行灌胃给药测定板桥党参多糖的急性毒性。结果 板党多糖对MCF-7细胞具有显著抑制增殖作用；荷瘤小鼠小、中、大剂量组肿瘤质量明显小于模型对照组(P<0.05)，小鼠以最大剂量灌胃给药后全部存活。结论 板党多糖具有抑制肿瘤生长的作用。

板桥党参；多糖；抗肿瘤活性；MCF-7；S180

道地板桥党参(简称“板党”)是桔梗科多年生草质藤本植物川党参(CodonopsistangshenOliv.)的干燥根，主产于湖北省恩施土家族苗族自治州恩施市板桥镇，多糖是其有效成分之一[1]。板党具有补气血、养脾胃、润肺生津、滋阴壮阳等功效，是传统的补中益气要药。本研究参照有关文献[2]，采用超声波水提—醇沉法提取板党多糖，采用MTT法检测体外抗肿瘤活性，观察板党多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用，以及对板党多糖进行安全性评价。

1 材料与方法

1.1 仪器、材料与试剂 Sartorius分析天平(BSA 124S)；SY-180超声清洗器(上海宁商超声仪器有限公司)；UV1600紫外分光光度计(浙江福立分析仪器有限公司)；MCO-18AIC(UV) CO2培养箱(日本SANYO公司)；Multiskan Spectrum酶标仪(美国Thermo Scientific公司)。板党采收于湖北省恩施市板桥党参GAP药材基地，经湖北民族学院中医药学院刘杰书教授鉴定为川党参(CodonopsistangshenOliv.)；小牛血清(四季青)；DMEM培养基(美国GIBCO公司)；胰蛋白酶(美国GIBCO公司)；SPF级昆明小鼠，4周龄，18～20 g，雌雄各半，购自湖北省实验动物研究中心[生产许可证号：SCXK(鄂)2008-0005]；MCF-7细胞株、S180细胞株由武汉大学药学院肖玉玲副教授提供。

1.2 实验方法

1.2.1 板党多糖的提取与精制 板党干燥品50 g，粉碎过60目筛，置250 mL圆底烧瓶中加入石油醚150 mL，60～80℃回流提取0.5 h，过滤，回收石油醚。滤渣挥干石油醚，加入80%乙醇125 mL，静置过夜后60～80℃回流提取0.5 h，过滤。滤渣挥干乙醇，在提取温度60℃、板党∶蒸馏水为1∶12(g∶mL)、超声波功率为70%、提取时间为1.0 h的条件下提取2次。合并2次滤液，减压浓缩、冷冻干燥后，得到板党粗多糖。将板党粗多糖用氯仿多次萃取，加入活性炭脱色，过滤，滤液加入95%乙醇，静置过夜后过滤，滤渣依次用无水乙醇、乙醚、丙酮多次洗涤，60℃烘干，得到精制板党多糖[3]。

1.2.2 急性毒性实验 取SPF级昆明小鼠，禁食不禁水12 h，分为正常对照组和实验组，每组12只。实验组以0.5 g/mL(20 g/kg)的板党多糖每日3次灌胃给药，给药4 h后喂饲基础饲料；正常对照组喂饲基础饲料，连续观察7 d，记录期间小鼠死亡数[4]。

1.2.3 板党多糖对MCF-7癌细胞体外增殖的影响

取对数生长期的MCF-7细胞，接种于96孔板，每孔100 μL，培养24 h后加药，给药组剂量分别为1 000、500、100、10 μg/mL，同时设正常对照组，加入正常培养液，每组6个复孔。培养72 h后，以MTT法检测，按以下公式计算抑制率。

抑制率=(正常对照组A570-给药组A570)/正常对照组A570

1.2.4 肿瘤抑制率的测定 选用生长良好的7～10 d的S180瘤株，生理盐水调整细胞密度5.0×106/mL，以每只0.2 mL的量接种于小鼠右前腋下，建立荷瘤小鼠模型。每组12只，随机分为5组，模型对照组(生理盐水)、环磷酰胺组(40 mg/kg)、板党多糖组剂量为(50 mg/kg、100 mg/kg、200 mg/kg)[5]。次日开始给药，板党多糖各组、模型对照组每天灌胃1次，环磷酰胺组隔日灌胃1次，连续给药10 d。末次给药24 h后，称取小鼠体质量，取瘤块称质量，计算抑瘤率。

抑瘤率=(模型对照组平均瘤质量-给药组平均瘤质量)/模型对照组平均瘤质量

2 结果

2.1 板党多糖的含量 超声波水提-醇沉法提取板党多糖，得到粗多糖6.41 g，提取率达12.82%；纯化后得到精制板党多糖2.57 g，提取率达5.14%。

2.2 板党多糖的安全性评价 小鼠全部存活，其毛色、活动、饮食、粪便色泽与质地均正常。

2.3 板党多糖的体外抗肿瘤活性 板党多糖在10 μg/mL对MCF-7细胞的抑制作用不明显，在100、500、1000 μg/mL对MCF-7细胞的抑制率随质量浓度增加而升高，呈现良好的质量浓度依赖性。见图1，图2。

图1 板党多糖对MCF-7细胞的增殖抑制作用注：与正常对照组比较，aP<0.05。

图2 板党多糖对MCF-7细胞形态的影响

2.4 板党多糖的体内抗肿瘤活性 板党多糖可以剂量依赖性抑制S180瘤株的生长，且低、中、高剂量与模型组相比差异均有显著性(P<0.01)。见表1。

3 讨论

研究已证实，多糖和皂苷是板党的主要活性成分，板党多糖的抗肿瘤活性国内外报道甚少。本研究对板党多糖干预昆明小鼠的抑瘤率、安全性评价以及体外增殖抑制等综合考察，结果表明板党多糖能够直接抑制肿瘤细胞活性，在临床抗肿瘤方面具有潜在价值，虽然，环磷酰胺也能抑制S180移植瘤的生长(P<0.05)，但考虑到临床上化疗药物的毒副作用，以及对肿瘤患者术后给药等因素，板党多糖具有潜在的临床抗肿瘤价值，但其药效作用的确切结构还有待于经过进一步精制后确定。板党多糖对细胞周期、细胞迁移相关蛋白表达、细胞凋亡相关蛋白表达、细胞免疫水平等机制的影响，值得采用免疫组化、体外细胞实验等方法研究。

表1 板党多糖对移植肿瘤生长的影响

注：与模型对照组比较，*P<0.05，﹡﹡P<0.01。

[1] 杨瑾,袁德培,陈龙全,等.党参多糖类成分抗肿瘤活性的研究进展[J].湖北民族学院学报·医学版,2011,28(3):67-68.

[2] 孙婉娟,徐斯凡,胡华刚,等.现代提取工艺在党参中的应用[J].中央民族大学学报·自然科学版,2013,22(1):65-68.

[3] 王桂红,张骏,周松迪,等.板桥党参多糖的含量测定[J].数理医药学杂志,2011,24(6):709-711.

[4] 陈奇.中药药理研究方法学[M].第3版.北京:人民卫生出版社,2011:1 019-1 020.

[5] 杨丰榕,李卓敏,高建平.党参多糖分离鉴定及体外抗肿瘤活性的研究[J].时珍国医国药,2011,22(12):2 876-2 878.

Experimental Studies on Antitumor Activity of Polysaccharides fromCodonopsisTangshen

YANG Jin1,DONG Xing-gao2,YUAN De-pei1,etal.

(1.SchoolofTraditionalChineseMedicine,HubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China；2.SchoolofMedicine,HubeiUniversityforNationalities,Enshi445000,China)

Objective To investigate the antitumor activity of Polysaccharides fromCodonopsistangshen.Methods Detection of anti-tumor activity in vitro was based on MTT assay, and the analysis in vivo was based on S180 tumor-bearing mice fed on Polysaccharides fromCodonopsistangshen. Acute toxicity was observed on mice with maximum dose. Results Polysaccharides fromCodonopsistangshensignificantly inhibited the proliferation of MCF-7 cells, tumor mass from tumor-bearing mice with small, medium, large doses was significantly smaller than that of the model group (P<0.05).Acute toxicity test mice survived.Conclusion Polysaccharides fromCodonopsistangshensignificantly inhibited tumor growth.

CodonopsistangshenOliv.; polysaccharides; antitumor;MCF-7;S180

湖北省卫生厅青年科技人才项目(QJX2010-26)；湖北民族学院博士启动基金项目(MY2010B003)。

杨瑾(1981- )，女，湖北恩施人，副教授，博士，研究方向：民族医药学。

R285.5

A

1008-8164(2014)01-0006-03

2013-11-20]