(-)表没食子儿茶素没食子酸酯对自然衰老大鼠模型学习记忆障碍的改善作用

邢晓东

(辽宁工业大学医院，辽宁 锦州121001)

阿尔茨海默病(AD)是一个渐进性神经系统退行性疾病，已成为继心血管疾病、癌症、中风之后的第四大死亡原因。其最典型的病理性改变是的神经细胞间出现大量以β-淀粉样肽为核心的老年斑、神经元的胞体中出现神经原纤维缠结及神经元丢失和胶质增生等。AD的发病机制目前尚未完全阐明，但自由基损伤学说和细胞凋亡学说备受人们的关注。自由基形成和氧化应激增强，进一步引起神经细胞凋亡，是导致AD的功能退化和神经变性的基础。AD模型鼠脑中MDA水平较对照组显著升高，高水平的MDA表达经常与神经元纤维缠结及老年斑相伴随出现。并且临床研究表明，阿尔茨海默病患者血清中SOD和GSH-Px活性明显降低，而这两种酶是人体内在抗氧化方面有着重要作用。(-)表没食子儿茶素没食子酸酯是绿茶的一种主要多酚成分，许多研究已经揭示了EGCG的生物活性与其抗氧化特性紧密相关。为探讨观察绿茶提取物(-)表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对自然衰老大鼠模型学习记忆障碍的改善作用，并初步探讨其作用机制，本实验选用22～24月龄SD大鼠，应用自然衰老大鼠筛选法制作AD模型，以EGCG灌胃给药进行治疗，利用行为学实验及化学比色法观察EGCG对衰老AD鼠的治疗作用，并进一步探讨其抗氧化的作用的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器设备

TU-1810紫外可见分光光度计为北京普析通用仪器有限责任公司产品；Morris水迷宫装置购自北京硕林苑生物科技有限公司；生物研究显微镜购自日本尼康科技有限公司。

1.1.2 主要试剂

EGCG，纯度＞95%，购自 Sigma公司；超敏 SP浓缩(鼠/兔)试剂盒，产品编号KIT-0310，购自北京中杉金桥有限公司；辣根酶标记山羊抗兔IgG(H+L)，产品编号ZB-2301，购自北京中杉金桥有限公司；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）、丙二醛（MDA）含量测定试剂盒均购自南京建成生物试剂有限公司。

1.1.3 实验动物模型的分组及给药

将造模成功的AD大鼠按各鼠平均逃避潜伏期的长短排序，根据随机数字表随机分为：模型组、EGCG治疗组，每组11只，共2组；将5～6个月青年大鼠根据随机数字表随机抽取11只，作为对照组。水迷宫测试结束后即开始对入组动物进行灌胃给药，EGCE治疗组按照2mg/Kg.d的剂量灌胃给予EGCG；模型组和对照组给予等量蒸馏水灌胃。各组每天给药1次，连续给药30天

1.2 行为学观察

水迷宫试验：

参照Morris方法进行。从灌胃第24天进行水迷宫实验，实验训练阶段连续进行2天，每天训练2次。第24天开始记录数据，标记为数据表中的第1天，共4天。

1.3 海马内SOD、GSH-Px酶活性及MDA含量的测定

行为学实验结束后，将各组大鼠每组取6只，断头处死，冰上快速取海马，入液氮及-80℃中冻存。检测时将海马加入预冷的生理盐水制成10%的脑匀浆，2000rpm/min离心10min，取上清。脑组织SOD、GSH-PX活性及MDA含量的测定，具体操作均按试剂盒说明进行。

1.4 统计学处理

应用spss16.0版本软件包统计软件，进行数据统计分析。数据以均值加减标准差（）表示。组间比较采用方差分析采用ANOVA、Mauchy's Test of Sphercity、LSD's post hoc test进行统计学分析，以P<0.05表示有显著性差异。

2 结果分析

在定位巡航试验中，模型组大鼠的寻找平台的潜伏期较对照组大鼠明显延长(P<0.01)，而EGCG组大鼠的寻找潜伏期与模型组大鼠比明显缩短(P<0.01)；在空间探索实验中，模型组大鼠的寻找原平台的潜伏期较对照组大鼠明显延长(P<0.05)，而EGCG组大鼠的寻找潜伏期与模型组大鼠比明显缩短(P<0.01)，而在目的象限的停留时间这一指标上，模型组大鼠在平台所在象限的的时间较对照组大鼠明显缩短(P<0.01)，而EGCG组大鼠在目的象限的时间与模型组大鼠比明显延长(P<0.05)；就在目的象限逗留的百分率而言，模型组大鼠在目的象限逗留的百分率较空白对照组大鼠明显缩短(P<0.05)，而EGCG组大鼠在目的象限逗留的时间百分率与模型组大鼠比明显延长(P<0.01)。表明模型组大鼠的学习记忆及判断能力下降，而EGCG改善了AD衰老模型鼠的学习记忆障碍。

3 讨论

理想的动物模型的建立是研究AD的基础。迄今为止，建立AD动物模型的方法很多，其中AD自然衰老模型鼠国外一些实验室广泛用于衰老和AD发病机制及药物开发的研究。AD是一种年龄相关疾病，衰老因素在AD发病过程中扮演着重要角色，衰老所特有的病理生理变化及其它病变的影响，是用年轻动物制作的动物模型所不能替代的，选择带有认知和记忆严重缺失的个体，其病理行为表现与老年人和AD患者的认知损害相类似，同时还可出现某些相应的脑组织病理改变。该模型的特点是自然衰老，其神经系统的损害亦属自然发生。由于AD的发病机制未明，目前所用的药物造模和基因敲除造模方法制造的AD模型不能完全代表AD疾病的所有特点，而自然衰老的大鼠是通过一定标准的筛选制造的模型，就如同自然发病的AD患者，能够较全面的代表AD疾病的特点。而且AD本身是一种老年疾病，目前药物造模或基因敲除的老鼠多为青壮年，在神经系统、行为认知方面也许可以模拟AD的特点，但是从总体研究的角度来说，不如自然衰老模型的大鼠更具有代表性。总之，AD衰老模型鼠模型成功的模拟了AD的行为学及病理学改变，可用于AD的药物治疗研究。

(-)表没食子儿茶素没食子酸酯是绿茶的一种主要多酚成分，研究证实绿茶有效的铁螯和、抗氧化、抗炎、抗癌及神经保护等作用的发挥主要依赖于EGCG通过研究人大鼠成纤维细胞瘤PC12细胞，发现EGCG使产生非淀粉样变性的可溶性APP(sAPP)的表达水平提高，延缓衰老大鼠自由基氧化损伤。由此提示了EGCG对神经细胞具有一定的保护作用。本实验证实了EGCG对AD衰老模型大鼠氧化应激损伤的保护作用。

本研究结果表明，EGCG能够明显改善自然衰老大鼠的认知功能，提高大脑内的SOD、GSH-Px活性和减少了MDA的含量，证实EGCG主要的神经保护作用机制与其抗氧化作用有关，至于其他相关的作用机制，仍有待于作进一步的研究探讨。