二氢杨梅素分散片制备工艺及质量控制

刘 颢，郁建平

(贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025)

二氢杨梅素(dihydromyricetin，DMY)是藤茶(Ampelopsis grossedentata)中的主要成分之一，又名双氢杨梅树皮素、双氢杨梅素、蛇葡萄素。经药理研究证明，二氢杨梅素具有抗炎、抑菌［1］、抗氧化［2］、抗癌［3－4］、解酒［5］和降低血压血脂等作用，广泛应用于治疗呼吸道感染、酒精中毒的中成药制剂并已在制备抗白血病及鼻咽癌药物的应用领域取得了发明专利。目前主要作为医药原料药并作为一类新药准备进入临床试验。二氢杨梅素［(2R，3R)－3，5，7－三羟基 －2－(3，4，5－三羟基苯基)苯并二氢吡喃 －4－酮］在25℃水中溶解度为4%，热水中溶解度更大;林淑英［6］等对二氢杨梅素稳定性和影响因素进行了考察，证实二氢杨梅素溶液易发生氧化，稳定性较差，在不超过100℃，加热时间不超过30 min以及酸性和中性条件可保持其化学结构稳定，而金属离子 Al3+，Fe3+，Cu2+等对二氢杨梅素的氧化起诱导催化作用。

分散片是指在水中能迅速崩解并均匀分散的片剂，分散片可以解决难溶性药物不易溶出以及吸收利用度低等问题［7］，二氢杨梅素的口服利用度不高［8］，将二氢杨梅素制成分散片，可以有效提高二氢杨梅素的溶出度，本文对二氢杨梅素分散片的制备和质量标准进行了研究。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

TDP－6A单冲压片机(南通市华宇制药机械有限公司)，78X－3C型片剂多用测定仪(上海黄海药检仪器有限公司)，RCZ－6B3型药物溶出仪(上海海药检仪器有限公司)，YPD－300C型智能片剂硬度测定仪(上海黄海药检仪器有限公司)，TU－1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)。二氢杨梅素对照品(上海源叶生物科技有限公司，含量≥98%)，藤茶二氢杨梅素提取物(中国玉缘生物制品有限公司，经HPLC测定含量为70.36%)，交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP，上海金穗生物科技有限公司)，微晶纤维素(MCC，湖州展望化学药业有限公司)，羧甲基淀粉纳(CMC－Na，湖州展望化学药业有限公司)，低取代羟丙基纤维素(L－HPC，湖州展望化学药业有限公司)，预胶化淀粉(PS，湖州展望化学药业有限公司)，其它试剂均为分析纯，实验用水为重蒸水。

1.2 制备工艺

将原、辅料充分干燥，采用粉碎机打碎，分别过100目筛，按处方比例混匀后加50%乙醇制软材，24目筛制粒，置于40℃干燥，整粒后加入润滑剂及外加崩解剂压片。片重约为230 mg(每片约含二氢杨梅素50 mg)。硬度平均为5.82 kgf。

2 结果与分析

2.1 处方优化

2.1.1 填充剂的选择 按处方量加入10%崩解剂(其中PVPP 2.5%，CMS－Na 5%，L－HPC 2.5%)，25%主药，2%硬脂酸镁和60%填充剂，按1.2方法制备分散片，选用微晶纤维素、硫酸钙、糊精和预胶化淀粉三种组合作为填充剂，实验结果见表1。

表1 填充剂的选择Tab.1 Choice of filler

由表1可知，选用MCC和预胶化淀粉作为崩解剂崩解时间最短，为最优组合。

2.1.2 崩解剂的选择 按1.2方法制备分散片，以MCC和预胶化淀粉为填充剂，分别选用PVPP、CMS－Na和L－HPC 3种崩解剂作为考察因素，采用正交表L9(34)设计实验，以崩解时间作为考察指标，确定最佳崩解剂用量和配比。其因素水平安排见表2。实验方案及实验结果见表3。

表2 正交试验因素水平表Tab.2 Factors and levels of orthogonal experiment

表3 正交试验设计及结果分析Tab.3 Results of the orthogonal experiment

根据上述正交实验，采用SPSS 13.0软件进行方差综合分析，结果见表4。结果分析:由直观分析可知，对崩解度的影响因素主次为A＞C＞B，但是各因素对崩解度没有显著影响(P＞0.05)，处方比例下没有统计学差异。由于B因素对崩解度的影响较小，根据实际生产情况及正交实验的结果，确定最优处方为A3C2，即加入5%PVPP和2.5%L－HPC的崩解剂组合。

表4 方差分析表Tab.4 Analysis of variance

2.1.3 崩解剂加入方法的选择 按1.2方法制备分散片，采用崩解剂内加、外加和内外加相结合的方法，操作方法及实验结果见表5。

由表5可知，组合6崩解时间最短，为最优的崩解剂内外加方法，即采用内加1%PVPP、2%L－HPC和外加4%PVPP、0.5%L－HPC的方法加入崩解剂。

表5 崩解剂内外加方法的选择Tab.5 Selection of adding methods of disintegrators

2.1.4 验证试验 采用最佳处方和工艺制备三批二氢杨梅素分散片(批号分别为:201211121，201211122，201211123)，对其外观，硬度，片重差异，崩解时间进行考察。结果表明，片剂外观光洁，无缺损，硬度平均为5.82 kgf，片剂平均重量为0.25 g，片重差异＜±5%符合规定，三批分散片崩解时间平均为 69 s、70 s、65 s，符合规定。

2.2 二氢杨梅素分散片质量控制

2.2.1 薄层鉴别 精密称取二氢杨梅素对照品10.50 mg，置10 mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀得浓度为1.05 mg/mL的对照品溶液。取分散片20片，研细，称取0.25 g溶于50 mL容量瓶，加甲醇定容。取1 mL该溶液定容于10 mL容量瓶，即得样品溶液。将样品溶液稀释10倍得样品稀释溶液。按中国药典2010版二部附录ⅤB薄层色谱法，分别吸取上述对照品溶液、样品溶液和样品稀释溶液10μL，点于硅胶G板上(以0.5%羧甲基纤维素钠做粘合剂)，以氯仿－乙酸乙酯－甲酸(5∶5∶0.5)为展开剂，5%FeCl3乙醇溶液为显色剂，得到图谱如图1所示，得到比移值Rf分别为0.37、0.38和0.37。图1中2号斑点比1号斑点颜色更深，3号斑点与1号斑点颜色相当可能是由于点样量不准确所致。

2.2.2 含量测定

(1)标准曲线的制备

精密称取二氢杨梅素对照品10.50 mg，置10 mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀得浓度为1.05 mg/mL的对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液 0.00 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.15 mL、0.20 mL分别置10mL容量瓶，加入3 mL 5%AlCl3，用甲醇定容。于314 nm波长处分别测定吸光度值。以二氢杨梅素浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标得标准曲线为:A=0.104 9C+0.0234，R2=0.999 2。结果表明，二氢杨梅素在5.25～21μg/mL范围内具有良好的线性关系。

图1 二氢杨梅素分散片与对照品薄层色谱图Fig.1 TLC chromatogram of dihydromyricetin dispersible tablets and their control

(2)检测波长的选择和辅料干扰实验

取分散片粉末和辅料粉末适量，溶于甲醇和AlCl3溶液中并定容。于200～400 nm波长范围内扫描，以甲醇和AlCl3溶液为空白溶液，结果测得分散片溶液在314 nm处有最大吸收，而辅料溶液在314 nm处没有吸收峰，见图2。确定以314 nm为检测波长。

图2 紫外光谱图Fig.2 UV spectrum

(3)精密度试验

取上述对照品溶液1 mL置于50 mL容量瓶中，加5%AlCl3、甲醇溶液定容。于314 nm波长处连续测定吸光度6次，RSD为0.32%。表明本方法精密度良好。

(4)重现性试验

取同一批次二氢杨梅素分散片样品5份，分别溶于50 mL甲醇，再分别取1 mL样品溶液定容至100 mL容量瓶，按3.2.3方法测定吸光度值，RSD为0.79%。表明方法重现性良好。

(5)稳定性试验

精密量取对照品溶液1 mL置于50 mL容量瓶中，加 5%AlCl3、甲醇溶液定容。分别在 0、30、60、90、120、180 min测定吸光度。RSD为0.62%。表明样品在3h内稳定性良好。

(6)加样回收率试验

取同一批次分散片样品9份，每份约0.25 g，精密称定，分别加甲醇定容于100 mL容量瓶，再分别取100μL该溶液，定容于50 mL容量瓶中，分别加入1 μg/mL 对照品溶液 5 mL、10 mL、15 mL，按3.2.3方法测定吸光度。计算回收率，结果平均回收率为96.35%，RSD为1.84%。表明本方法的加样回收率实验符合要求，说明该方法作为含量测定方法可行。

(7)样品含量测定

分别取三批样品 20片，研细。精密称取0.25 g，定容于50 mL容量瓶，取1 mL该溶液，定容于100 mL容量瓶，按上述方法测定吸光度，计算的二氢杨梅素分散片平均含量为46.25 mg/片。

2.2.3 分散均匀性考察 取二氢杨梅素分散片6片，置于(20±1)℃的100 mL水中，振摇3 min，分散片完全崩解并通过2号筛。

2.2.4 崩解时限测定 取二氢杨梅素分散片6片，按《中国药典》2010年版二部附录ⅹA崩解时限检查法，置于(37±1)℃水中测定崩解时限，结果片剂在60 s内完全崩解。

2.2.5 溶出度测定 取二氢杨梅素分散片6片，按《中国药典》2010年版二部附录ⅹC溶出度测定第二法，以900 mL蒸馏水，在(37±1)℃，转速75 rpm 条件下，分别于 1、5、10、15、30、60 min 取样 5 mL，样品液过0.45μm微孔滤膜，同时补加同温等体积溶出介质。取滤液2 mL置于10 mL容量瓶中，加AlCl3、甲醇溶液定容，测定紫外吸光度，计算各个时间点的累积溶出度，如图3所示。

结果表明，二氢杨梅素分散片在15 min时溶出度已超过85%，能达到速释的要求。

图3 二氢杨梅素分散片的溶出曲线Fig.3 Dissolution curve of dihydromyricetin dispersible tablets

3 讨论

藤茶中的主要成分是二氢杨梅素，文献报道其具有抗炎、解酒、抗癌、降血糖等多种作用;我国的二氢杨梅素资源丰富，来源广泛，具有很好的应用前景。本文对二氢杨梅素分散片进行了制备。分散片的特征是遇水可迅速崩解形成均匀的混悬液，综合了片剂和液体制剂的优点。实验中采用了微晶纤维素、预交化淀粉等优良辅料作为填充剂，不仅具有良好的可压性，使片剂具有光洁表面;还具有一定的崩解作用。另外，为提高分散片溶出度，在压片前，分别对主药和辅料粉末进行微粉化处理，从而增加分散片溶出度，提高其生物利用度。

实验中曾用滑石粉代替硬脂酸镁作为润滑剂，实验结果表明，分散片的崩解度、溶出度等指标并无明显提高;而从片剂的外观来看，采用硬脂酸镁作为润滑剂制备的分散片表面更加光滑，平整。综合考虑，采用硬脂酸镁作为润滑剂。

在溶出度测定中，还分别考察了以pH 1.2盐酸溶液、pH 4乙酸缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液、0.1%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液和0.3%SDS溶液为溶出介质的溶出度。实验结果表明，分散片在pH 1.2盐酸溶液、pH 4乙酸缓冲液、pH 6.8磷酸盐缓冲液这三种溶出介质中的溶出度较以蒸馏水为溶出介质的溶出度更低，而以SDS溶液为溶出介质的溶出度只是略有提高。

［1］ 陈 帅，郁建平.藤茶总黄酮抗炎及抑菌作用的实验研究［J］.贵阳中医学院学报，2013，35(1):1－3.

［2］L Benguo，D Jiquan，Z Jie，et al.Characterization and antioxidant activity of dihydromyricetin － lecithin complex［J］.Eur Food Res Technol，2009，230:325 －331.

［3］ 周防震，黄 敏，张晓元，等.二氢杨梅素对乳腺癌荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用［J］.华南理工大学学报，2011，39(9):147－151.

［4］ 高倩倩，杨秀芳，欧 敏.藤茶总黄酮和二氢杨梅素含药血清对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响［J］.中国中药杂志，2011，36(4):500 －503.

［5］ 潘人琦，郁建平.二氢杨梅素解酒作用的研究［J］.山地农业生物学报，2012，31(2):247－249.

［6］ 林淑英，高建华，郭清泉，等.二氢杨梅素的稳定性及影响因素［J］.无锡轻工大学学报，2004，23(2):17－20.

［7］ 叶 虹，郑 超，张 勇.分散片的处方设计［J］.齐鲁药事，2005，24(3):176－177.

［8］ 李瑛琦.瑶族藤茶质量标准及主要活性成分药物动力学研究［D］.辽宁:沈阳药科大学，2003.