雌激素受体和17β-羟类固醇脱氢酶1在子宫内膜息肉中的表达及其意义

肖 佩,张翠玲,孙 黎,王树鹤

雌激素受体和17β-羟类固醇脱氢酶1在子宫内膜息肉中的表达及其意义

肖 佩1,张翠玲2,孙 黎3,王树鹤4

目的研究雌激素受体(estrogen receptor，ER)和17β-羟类固醇脱氢酶1(17β-HSD1)在子宫内膜息肉( endometrial polyps，EPs)中的表达情况，进一步从分子水平阐明EPs的发病机制。方法选择EPs患者47例，其中，息肉组织作为病例组，同一患者宫腔内远离息肉组织的正常内膜作为对照1组，同时选择50例行宫腔镜检查的妇女的正常子宫内膜组织作为对照2组。采用免疫组织化学法检测ER和17β-HSD1在各组的表达情况并进行比较。结果ER在EPs中表达的阳性率是80.9%，17β-HSD1在EPs中表达的阳性率是76.6%，二者在EPs中表达均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。ER和17β-HSD1在EPs中的表达呈正相关(r=0.619，P<0.01)。结论ER和17β-HSD1在EPs中的过度表达可能是EPs发生、发展的原因。

子宫内膜息肉；雌激素受体；17β-羟类固醇脱氢酶1

子宫内膜息肉( endometrial polyps，EPs) 是突出于宫腔内的单发或多发的结节状肿物，它虽然是育龄妇女及绝经后妇女的常见疾病，但是目前EPs的发病机制尚不明确，多数临床医师对于EPs所导致的症状也仅局限在月经改变方面[1]。此外，EPs较易复发，尚无公认确切有效的预防措施，因此研究EPs的发病机制具有重要的临床意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 选择2011-07至2012-07在北京军区总医院妇科行EPs切除术的患者47例作为病例组，同时取该患者远离息肉的正常子宫内膜组织47例作为对照1组，同期选择在该院行宫腔镜检查子宫内膜组织正常的妇女50例作为对照2组。病例组与对照2组在年龄、孕次、产次方面构成比无统计学差别。所有标本均来自绝经前妇女，年龄23～48岁，平均(35.6±3.74)岁，所有患者均在月经来潮后第3～7天内行宫腔镜检查术和宫腔镜电切术。所有病例均在宫腔镜下取标本，然后通过显微镜来观察子宫内膜的形态，通过病理区别EPs和正常子宫内膜。所有的患者均无子宫肌瘤、子宫内膜异位症、子宫腺肌症、子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢肿瘤等合并症，无其他恶性疾病及严重并发症。

1.1.2 主要试剂 羊抗兔ER抗体、羊抗兔17β-HSD1抗体、DAB显色试剂盒、过氧化酶免疫组化染色试剂盒、辣根酶标记的链酶亲和素均购自北京博奥森生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 标本制备方法 切除的组织立即常规10%甲醛溶液固定，并送入病理科，再用不同梯度的乙醇对其脱水，二甲苯透明20 min，最后进行石蜡包埋，将标本制成石蜡包块。

1.2.2 免疫组化方法 常规石蜡切片HE染色，核实病理组织学诊断。ER和17β-HSD1蛋白的染色方法按S-P试剂盒说明书步骤进行，0.01 mol/L枸橼酸缓冲液(pH 6.0)微波18 min行抗原修复，羊抗兔ER抗体、羊抗兔17β-HSD1抗体4 ℃过夜。经DAB显色后，苏木精复染，中性树胶封片。阴性对照采用 0.01 mol/LPBS(pH=7.4)液体代替一抗，其他步骤不变。

1.2.3 染色结果判定方法 采用双盲法，由2名病理医师分别阅片。采用半定量法，ER和17β-HSD1在胞质和胞核均有表达，随机观察10个高倍镜视野，放大倍数100倍，胞核按每高倍镜视野阳性细胞数百分比记分:阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。胞质按着色强度记分：染色呈淡黄色者记为1分；呈黄色者记为2分；呈棕黄色者记为3分。上述两种记分的乘积即为阳性强度：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8 分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性 (+++)。

1.3 统计学处理 采用SPSS16.0统计软件,实验数据采用χ2检验及Spearman秩相关分析，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

ER和17β-HSD1在病例组中的表达呈阳性(图1A和图2A)，并且在细胞质和细胞核中均有表达，但是二者在对照1组和对照2组中的表达均呈阴性(图1B、C和图2B、C)。ER和17β-HSD1在病例组中的表达均明显高于对照组，差异有统计学意义(χ2ER=61.50，P<0.05；χ217β-HSD1=51.82，P<0.05，表1)，但是ER和17β-HSD1在两对照组中的表达并无差别(χ2ER=0.006，P>0.05,χ217β-HSD1=0.22，P>0.05)。ER和17β-HSD1在病例组中的表达均比对照组中高，经Spearman等级相关分析发现，ER和17β-HSD1在病例组中表达呈正相关(r=0.619，P<0.01)。

图1 ER在子宫内膜中的表达(HE，×100)

图2 17β-HSD1在子宫内膜中的表达(HE，×100)

表1 ER和17β-HSD1在子宫内膜组织中的表达情况

3 讨 论

EPs是最常见的子宫内膜良性病变之一，由腺体及间质组成，是子宫内膜基底层过度增生形成的一种瘤样病变，可发生在青春期后的任何年龄。近年来，随着阴道超声和宫腔镜的广泛应用，EPs发病率呈明显上升趋势，引起众多学者的关注。EPs的发病率为7.8%～41.0%[2]，好发于 35岁以上女性，随着年龄的增长其发病率呈增高趋势。EPs 多为良性病变，但亦可发生恶变。Costa-Paiva等[3]通过大样本统计发现，EPs 的恶变率约为 4.1%。虽然EPs是很常见的临床疾病，治疗相对简单，但易复发，发病机制及病因迄今尚未达成共识，因此目前尚无良好的预防措施。大部分学者研究认为，子宫内膜局部的雌激素水平及雌激素受体水平过高可能与EPs的形成有关系[4]。

有研究发现，EPs患者多合并有不孕症、PCOS、子宫内膜异位症及子宫腺肌症等，故认为 EP 与上述疾病的发病机制相似，均为雌激素依赖性疾病[5,6]。本实验正是以此为出发点，探讨EPs是否与子宫内膜局部高水平的雌激素有关，但是直接测定子宫内膜组织中的雌激素浓度难度很大，因此，本实验选择影响局部雌激素代谢及功能的两个相关因素，即ER和17β-HSD1。

ER的配体是雌激素，当子宫内膜局部表达过多的ER与雌激素结合后，会导致子宫内膜细胞内不同基因转录，表达过多的导致子宫内膜细胞增殖的产物[7]，比如细胞周期素D1、c-MYC、血管内皮生长因子等，最终结果是子宫内膜细胞过度增殖。另外，还有研究提示，雌激素受体还可以调节启动子序列中富含GC的基因的表达[8]。由此分析，子宫内膜局部有高水平的雌激素受体，导致子宫内膜细胞内的基因转录发生变化，促进细胞增生的蛋白、因子等产物增加，从而会出现子宫内膜细胞的过度增生，进而就有可能会发展为EPs。

17β-HSD1是17β-HSDs的成员之一，它催化雌酮C17位置上的酮基转化为醇基，使低生物活性的雌酮转化为高生物活性的雌二醇，是一个催化还原反应的酶。该酶是雌二醇合成最后步骤的关键酶，也是直接调节雌二醇在局部组织中的受体前水平的重要的酶。17β-HSD1在雌激素的转化中起着非常重要的作用，由它催化的底物包括：雌二醇 (E2)、雌酮、去氢表雄酮(DHEA)、二氢睾酮(DHT)和雄甾烯二酮(androstenedione，4-dione)等。而17β-HSD1的催化雌酮活化的效率最高。17β-HSD1基因的启动子含有典型的GC丰富区[9]，因此雌激素受体阳性的细胞中17β-HSD1的表达可能会增加。17β-HSD1主要分布在卵巢组织、胎盘组织和乳腺组织中，其表达率在 60%的恶性组织中增加显著，而且其与细胞凋亡直接相关。国外学者在研究乳腺癌细胞 MCF-7和T47D的实验中证实，用siRNA抑制17β-HSD1的表达之后，活化的雌激素明显减少，细胞增殖下降[10]，表明17β-HSD1参与了雌激素依赖性疾病的发生。另有研究发现，孕激素可提高17β-HSD1活性和促使mRNA的表达升高[11]。

本研究发现，ER和17β-HSD1在EPs中表达阳性率明显高于对照组，且二者在对照组中的表达并无差异。进一步经Spearman秩相关分析发现，ER和17β-HSD1在EPs中表达呈正相关。这可能由于EPs的发病机制受雌、孕激素受体调节，雌激素是ER的配体，二者结合后不但调控子宫内膜局部的基因表达，还调节启动子序列中富含GC的17β-HSD1基因的表达，从而生成更多的高活性的雌激素，在二者的共同作用下，局部的子宫内膜细胞增生，逐渐形成息肉。因此ER和17β-HSD1可能在EPs的发生、发展中起到较为重要的作用。

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(2013-09-03收稿 2013-10-18修回)

(责任编辑 武建虎)

Expressionandsignificanceofestrogenreceptorand17beta-hydroxysteroiddehydrogenase1inendometrialpolyps

XIAO Pei1, ZHANG Cuiling2，SUN Li3, and WANG Shuhe4.
1. Clinical School of Anhui Medical University，Hefei 230000，China; 2．Department of Obstetrics and Gynecology，Chinese Medicine Hospital of Linyi City, Linyi 276003, China; 3．Department of Gynecology and Obstetrics, Hefei Municipal First People’s Hospital, Hefei 230000, China; 4. Department of Gynecology and Obstetrics, Beijing Military Command General Hospital, Beijing 100700, China

ObjectiveTo study the expressions of ER and 17β-HSD1in endometrial polyps, and to clarify the pathogenesis of endometrial polyps in molecular level.MethodsEndometrial polyps from 47 patients were taken as the study group; at the same time, normal endometrial tissue far from endometrial polyps were taken from the same 47 patients as the control group 1 and normal endometria from 50 subjects were taken as the control group 2 who underwent hysteroscopy. Immunohistochemical examination was conducted to detect ER and 17β-HSD1expressions which were compared between the groups.ResultsThe positive expression rate of ER in polyps group was 80.9%, which was 76.6% for 17β-HSD1. The rates were higher than those of the control group(P<0.01). The expressions of ER and 17β-HSD1were related to the risk of endometrial polyps(r=0.619，P<0.01).ConclusionsExcessive expressions of ER and 17β-HSD1in premenopausal endometrial polyps may be the cause of occurrence and development of endometrial polyps.

endometrial polyps；estrogen receptor; 17 beta-hydroxysteroid dehydrogenase 1

肖 佩，硕士研究生，E-mail: xiaopei150520@163.com

1. 230000合肥,安徽医科大学北京军区总医院临床学院；2. 276003，山东省临沂市中医医院妇产科；3. 230000，安徽省合肥市第一人民医院妇产科； 4. 100700，北京军区总医院妇产科

王树鹤，E-mail：haotongzhi8@sina.com

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