Folin—Ciocalteu法检测菜籽多酚含量的优化研究

熊俐等

摘要：为了建立快速、准确地测定菜籽多酚含量的方法，以单宁酸为标准品，研究了Folin-Ciocalteu比色法测定菜籽多酚含量的适宜条件。结果表明，在显色试剂2.5 mL、饱和Na2CO3溶液4 mL、反应温度40 ℃、反应时间50 min、比色波长757 nm的条件下，菜籽多酚浓度在 2～20 mg/L 范围内与吸光度呈良好的线性关系；Folin-Ciocalteu法的稳定性试验、精密度试验、重现性试验、回收率试验的相对标准偏差（RSD）分别为0.419%、1.295%、2.30%、1.49%，表明该法能够快速、准确地测定菜籽多酚含量。

关键词：菜籽；多酚；Folin-Ciocalteu比色法；检测条件

中图分类号：TS201.2；O657.32 文献标志码：A 文章编号：1002-1302（2014）03-0255-03

多酚广泛存在于植物体中，是一类复杂的酚类次生代谢产物，具有多元酚结构，对活性氧等自由基有较强的捕捉能力，因此具有很强的抗氧化性和清除自由基的能力[1]。菜籽中含有1.5%～3%的多酚类物质，其多酚含量是其他油料种子中的10～30倍。研究证实，菜籽多酚具有抗肿瘤、降血糖、抑菌、抗氧化、清除自由基等生理功能和生物活性[2]，具有广阔的开发前景。测定多酚的常用方法有高锰酸钾滴定法[3]、香草醛法[4]、Folin-酚法[2]和铁氰化钾分光光度法[5]等。其中，高锰酸钾滴定法的滴定终点较难观察，测定灵敏度较低；香草醛法和铁氰化钾分光光度法对测定条件要求严格，稳定性较差，干扰因素较多，易出现沉淀；而Folin-酚比色法在测定多酚化合物时能在很大程度上克服以上缺点。Folin-酚法包括Folin-Denis法（F-D法）和Folin- Ciocalteu法（F-C法）。F-C法是F-D法的改进方法，它在F-D法显色剂中加入锂盐，克服了F-D法显色剂的不稳定性，较之更为灵敏[6]。郑仕宏等[7]、何志勇等[8]、刘丽香等[9]的研究结果表明，不同植物中Folin- Ciocalteu法比色条件的选择差异较大，适宜的显色剂、碱液含量及比例各不相同，显色时间和温度有很大差别，测定波长也不同。

国内常用F-D法测定菜籽及其加工品中的多酚含量，较少见用F-C法检测菜籽多酚含量的报道，更没有对其反应条件进行过探索。本试验采用Folin-Ciocalteu法测定菜籽多酚的含量，探讨最适显色条件和比色条件，同时对其稳定性、精密度、重现性、回收率等展开研究，以期建立起一种简便、快速、稳定、准确的检测菜籽多酚含量的方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 原料 菜籽购于四川省自贡市灯杆坝农贸市场，用面条压片机将其碾压破碎成片状，60 ℃干燥2～3 h，备用。

1.1.2 药品 乙醇、没食子酸标准品、单宁酸标准品、钨酸钠、钼酸钠、浓磷酸、浓盐酸、硫酸锂、碳酸钠等，均为分析纯。

1.1.3 仪器 UV1000型紫外-可见分光光度计，DK-98-11A型数显恒温水浴锅，AR1140型电子分析天平，MT-125C型面条压片机，DHG-9070B型鼓风干燥箱等。

1.2 试验方法

1.2.1 菜籽多酚提取液的制备 参考张晓丽等的研究[10]来制备菜籽多酚提取液。

1.2.2 Folin-Ciocalteu法显色剂的配制 在回流装置内加入50 g钨酸钠、12.5 g钼酸钠、350 mL蒸馏水、25 mL浓磷酸及50 mL浓盐酸，充分混匀，以小火回流10 h，再加入75 g硫酸锂、25 mL蒸馏水、数滴溴水，然后开口继续沸腾15 min，至溴水完全挥发为止，冷却后定容500 mL，过滤，滤液呈绿色，存于棕色瓶中。使用时加入1倍体积的蒸馏水，使酸的浓度为1 mol/L，置于冰箱中保存。

1.2.3 标准品溶液的配制 分别称取25.0 mg没食子酸和单宁酸，用70%乙醇完全溶解，定容至25 mL容量瓶中，配制成浓度为1.0 mg/mL的没食子酸标液和单宁酸标液。

1.2.4 Folin-Ciocalteu法检测流程 精确吸取一定量的待测样品，放入25 mL容量瓶内，加10 mL 70%乙醇，摇匀，加入一定量的显色剂和一定量的饱和Na2CO3溶液，并用70%乙醇定容至25 mL，在一定温度下避光反应一定时间后，以70%乙醇为空白对照，在一定波长下测定吸光度。

1.2.5 Folin-Ciocalteu法检测条件研究

1.2.5.1 比色波长和标准品的研究 取没食子酸标液、单宁酸标液和菜籽提取液的稀释液各0.5 mL，分别与2 mL显色试剂和4.5 mL饱和Na2CO3溶液混合均匀，用70%乙醇定容，室温避光放置1 h，用紫外-可见分光光度计在200～900 nm波长范围内测定吸光度，得到没食子酸、单宁酸和菜籽提取液的吸收光谱，以此确定最适宜的标准物和比色波长。

1.2.5.2 显色时间的研究 取单宁酸标液0.5 mL，显色试剂与饱和碳酸钠溶液分别为2.0、4.5 mL，比色波长为 757 nm，35 ℃条件下研究反应时间（10、20、30、40、50、60、70、80 min）对吸光度的影响。

1.2.5.3 反应温度的研究 研究不同反应温度（20、25、30、35、40、45、50 ℃）对吸光度的影响，反应时间为50 min，其他条件同“1.2.5.2”节所述。

1.2.5.4 饱和Na2CO3溶液添加量的研究 研究饱和Na2CO3 溶液添加量（1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0 mL）对吸光度的影响，反应温度为40 ℃，其他条件同“1.2.5.3”节所述。

1.2.5.5 Folin-Ciocalteu显色剂用量的研究 研究显色剂用量（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL）对吸光度的影响，饱和Na2CO3溶液添加量为4 mL，其他条件同“1.2.5.4”节所述。endprint

1.2.6 标准曲线的绘制 精确吸取0、0.05、0.10、0.15、020、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50 mL单宁酸标准溶液，按照前期试验确定的适宜条件进行显色反应，检测吸光度。以吸光度为纵坐标（y）、单宁酸浓度（mg/L）为横坐标（x）绘制标准曲线。

1.2.7 Folin-Ciocalteu比色方法评价

1.2.7.1 稳定性试验 取菜籽提取液进行显色反应，反应完全（50 min）后在30 ℃下避光放置0、15、30、45、60、90、120 min 后测定吸光度，根据吸光度的变化评价该比色法在一段时间内的稳定性。

1.2.7.2 精密度试验 从同一份菜籽提取液中取6份样本进行Folin-Ciocalteu比色法检测，计算各样本中的多酚含量（mg/g），以分析结果的相对标准偏差评价该比色方法的精密度。

1.2.7.3 重现性试验 从同一份菜籽原料中取5份样品，分别进行多酚提取，然后利用Folin-Ciocalteu比色法检测各提取液的多酚含量（mg/g），并计算结果的相对标准偏差，以评价该比色方法的重现性。

1.2.7.4 加标回收试验 往菜籽提取液中加入不同量的单宁酸，分别测定其多酚含量，并计算其回收率和相对标准偏差，以评价该比色方法的准确度和可靠性。

2 结果与分析

2.1 Folin-Ciocalteu法检测条件研究

2.1.1 比色波长和标准品 由图1可知，没食子酸、单宁酸和菜籽提取液与Folin-Ciocalteu试剂反应显色后，均在 730～770 nm 范围内有一明显吸收峰。其中，没食子酸在 736 nm 处吸收最强，单宁酸在762 nm处吸收最强，菜籽提取液在757 nm处吸收最强。因此本试验以单宁酸为标准品，以 757 nm 为菜籽多酚比色测定的波长。

2.1.2 显色时间 由图2可知，10～40 min时，吸光度随反应时间的延长而快速增加，50 min后显色反应完全并趋于稳定，因此确定50 min为显色反应时间。

2.1.3 反应温度 由图3可知，反应温度在20～35 ℃时，吸光度快速增加，40 ℃时吸光度达到最高，为0.476，之后吸光度随温度升高而下降，因此确定显色反应温度为40 ℃。研究结果说明反应温度能影响比色效果，温度过低或过高均不利于多酚显色。

2.1.4 饱和Na2CO3 溶液添加量 由图4可知，饱和Na2CO3溶液添加量在1～4 mL时，随着添加量增加，吸光度逐渐增加，4 mL时达到最大值，为0.496，之后吸光度随Na2CO3溶液添加量的增加而降低，因此确定显色反应体系中加入饱和Na2CO3溶液的体积为4 mL。研究结果说明Folin-Ciocalteu显色剂与酚类化合物的反应必须在碱性条件下才可以显色，显色反应对Na2CO3用量有相当的依赖性。

2.1.5 Folin-Ciocalteu显色剂用量 由图5可知，当 Folin-Ciocalteu 试剂添加量在0.5～2.5 mL时，随着显色剂用量增加，吸光度逐渐增加至0.502，之后吸光度趋于稳定，因此确定Folin-Ciocalteu比色法显色剂用量为2.5 mL。

2.2 标准曲线的绘制

以单宁酸为标准品制作标准曲线（图6），回归方程为y=0.081 4x+0.031 1，x表示单宁酸浓度（mg/L），y表示吸光度，相关系数r2为0.997 9，表明单宁酸质量浓度在2～20 mg/L 范围内与其吸光度呈现良好的线性关系，符合朗伯比尔定律，该方程可用于多酚的定量测定。

2.3 Folin-Ciocalteu比色方法评价

2.3.1 稳定性试验 对Folin-Ciocalteu法测定菜籽多酚进行稳定性试验，显色反应体系水浴50 min后，避光放置0、15、30、45、60、90、120 min，测定的吸光度分别为0.495、0.495、0493、0.493、0.492、0.492、0.489。研究发现，随着时间延长，吸光度有下降趋势，但幅度不大，其相对偏差（RSD）为0419%，表明120 min内溶液稳定性良好。

2.3.2 精密度试验 从同一份菜籽提取液中取6份样本进行Folin-Ciocalteu比色法检测，计算各样本中的多酚含量分别为22.78、23.56、22.99、22.76、23.2、23.0 mg/g，其相对偏差（RSD）为1.295%，表明该方法具有较高的精密度，能满足样菜籽多酚样品分析的要求。

2.3.3 重现性试验 从同一份菜籽原料中取5份样品，分别提取其多酚，然后利用Folin-Ciocalteu比色法检测各提取液的多酚含量，分别为23.20、23.56、22.78、23.31、22.45 mg/g，其相对偏差（RSD）为2.30%，表明该方法重现性较好。

2.3.4 加标回收试验 由表1可知，6次加标回收试验的最低回收率为97.7%，最高回收率为102.1%，平均回收率为99.55%，回收率相对标准偏差（RSD）为1.49%，表明本研究所建立的Folin-Ciocalteu检测法准确可靠，完全可用于菜籽多酚含量的测定。

3 结论

本研究采用Folin- Ciocalteu比色法测菜籽多酚含量，以单宁酸为标准品，确定最佳的显色条件为Folin- Ciocalteu显色剂2.5 mL、饱和Na2CO3溶液4 mL、反应温度40 ℃、反应时间50 min、比色测定波长757 nm。标准曲线的线性回归方程为y=0.081 4x+0.031 1，相关系数r2为0.997 9，且单宁酸质量浓度在2～20 mg/L范围内与其吸光度呈现良好的线性关系。该法的稳定性试验、精密度试验、重现性试验、回收率试验的相对标准偏差（RSD）分别为0.419%、1.295%、230%、1.49%，表明本研究建立起的Folin- Ciocalteu比色法能快速、准确地测定菜籽多酚含量。

参考文献：

[1]张清安，范学辉. 多酚类物质抗氧化活性评价方法研究进展[J]. 食品与发酵工业，2011，37（11）：169-172.

[2]陈 萌，杨 湄，刘昌盛，等. 菜籽多酚的制备、检测及其在加工过程中的变化研究进展[J]. 中国油料作物学报，2013，35（1）：102-103.

[3]王文杰. 高锰酸钾滴定法测定茶多酚有关用剂的特性研究[J]. 福建茶叶，2002（1）：15-17.

[4]李春阳，许时婴，王 璋. 低浓度香草醛-盐酸法测定葡萄籽、梗中原花青素含量的研究[J]. 食品工业科技，2004（6）：128-130.

[5]肖 纯，张凯农，阳长敏，等. 铁氰化钾分光光度法测定单宁的适用性[J]. 华北农学报，1996，11（2）：127-130.

[6]Singleton V L，Orthofer R，Lamuela-Raventos R M. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent[J]. Methods in Enzymology，1999，299：152-178.

[7]郑仕宏，张海德，何 双，等. Folin-Ciocalteus法测定槟榔中多酚含量的研究[J]. 中南林业科技大学学报，2009，29（6）：165-169.

[8]何志勇，夏文水. Folin-Ciocalteu比色法测定橄榄中多酚含量的研究[J]. 林产化学与工业，2006，26（4）：15-18.

[9]刘丽香，Tanguy L，梁兴飞，等. Folin-Ciocalteu比色法测定苦丁茶中多酚含量[J]. 茶叶科学，2008，28（2）：101-106.

[10]张晓丽，曾晓雄，李春阳. 菜籽多酚提取工艺的优化[J]. 食品与机械，2012，28（2）：142-146.endprint

1.2.6 标准曲线的绘制 精确吸取0、0.05、0.10、0.15、020、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50 mL单宁酸标准溶液，按照前期试验确定的适宜条件进行显色反应，检测吸光度。以吸光度为纵坐标（y）、单宁酸浓度（mg/L）为横坐标（x）绘制标准曲线。

1.2.7 Folin-Ciocalteu比色方法评价

1.2.7.1 稳定性试验 取菜籽提取液进行显色反应，反应完全（50 min）后在30 ℃下避光放置0、15、30、45、60、90、120 min 后测定吸光度，根据吸光度的变化评价该比色法在一段时间内的稳定性。

1.2.7.2 精密度试验 从同一份菜籽提取液中取6份样本进行Folin-Ciocalteu比色法检测，计算各样本中的多酚含量（mg/g），以分析结果的相对标准偏差评价该比色方法的精密度。

1.2.7.3 重现性试验 从同一份菜籽原料中取5份样品，分别进行多酚提取，然后利用Folin-Ciocalteu比色法检测各提取液的多酚含量（mg/g），并计算结果的相对标准偏差，以评价该比色方法的重现性。

1.2.7.4 加标回收试验 往菜籽提取液中加入不同量的单宁酸，分别测定其多酚含量，并计算其回收率和相对标准偏差，以评价该比色方法的准确度和可靠性。

2 结果与分析

2.1 Folin-Ciocalteu法检测条件研究

2.1.1 比色波长和标准品 由图1可知，没食子酸、单宁酸和菜籽提取液与Folin-Ciocalteu试剂反应显色后，均在 730～770 nm 范围内有一明显吸收峰。其中，没食子酸在 736 nm 处吸收最强，单宁酸在762 nm处吸收最强，菜籽提取液在757 nm处吸收最强。因此本试验以单宁酸为标准品，以 757 nm 为菜籽多酚比色测定的波长。

2.1.2 显色时间 由图2可知，10～40 min时，吸光度随反应时间的延长而快速增加，50 min后显色反应完全并趋于稳定，因此确定50 min为显色反应时间。

2.1.3 反应温度 由图3可知，反应温度在20～35 ℃时，吸光度快速增加，40 ℃时吸光度达到最高，为0.476，之后吸光度随温度升高而下降，因此确定显色反应温度为40 ℃。研究结果说明反应温度能影响比色效果，温度过低或过高均不利于多酚显色。

2.1.4 饱和Na2CO3 溶液添加量 由图4可知，饱和Na2CO3溶液添加量在1～4 mL时，随着添加量增加，吸光度逐渐增加，4 mL时达到最大值，为0.496，之后吸光度随Na2CO3溶液添加量的增加而降低，因此确定显色反应体系中加入饱和Na2CO3溶液的体积为4 mL。研究结果说明Folin-Ciocalteu显色剂与酚类化合物的反应必须在碱性条件下才可以显色，显色反应对Na2CO3用量有相当的依赖性。

2.1.5 Folin-Ciocalteu显色剂用量 由图5可知，当 Folin-Ciocalteu 试剂添加量在0.5～2.5 mL时，随着显色剂用量增加，吸光度逐渐增加至0.502，之后吸光度趋于稳定，因此确定Folin-Ciocalteu比色法显色剂用量为2.5 mL。

2.2 标准曲线的绘制

以单宁酸为标准品制作标准曲线（图6），回归方程为y=0.081 4x+0.031 1，x表示单宁酸浓度（mg/L），y表示吸光度，相关系数r2为0.997 9，表明单宁酸质量浓度在2～20 mg/L 范围内与其吸光度呈现良好的线性关系，符合朗伯比尔定律，该方程可用于多酚的定量测定。

2.3 Folin-Ciocalteu比色方法评价

2.3.1 稳定性试验 对Folin-Ciocalteu法测定菜籽多酚进行稳定性试验，显色反应体系水浴50 min后，避光放置0、15、30、45、60、90、120 min，测定的吸光度分别为0.495、0.495、0493、0.493、0.492、0.492、0.489。研究发现，随着时间延长，吸光度有下降趋势，但幅度不大，其相对偏差（RSD）为0419%，表明120 min内溶液稳定性良好。

2.3.2 精密度试验 从同一份菜籽提取液中取6份样本进行Folin-Ciocalteu比色法检测，计算各样本中的多酚含量分别为22.78、23.56、22.99、22.76、23.2、23.0 mg/g，其相对偏差（RSD）为1.295%，表明该方法具有较高的精密度，能满足样菜籽多酚样品分析的要求。

2.3.3 重现性试验 从同一份菜籽原料中取5份样品，分别提取其多酚，然后利用Folin-Ciocalteu比色法检测各提取液的多酚含量，分别为23.20、23.56、22.78、23.31、22.45 mg/g，其相对偏差（RSD）为2.30%，表明该方法重现性较好。

2.3.4 加标回收试验 由表1可知，6次加标回收试验的最低回收率为97.7%，最高回收率为102.1%，平均回收率为99.55%，回收率相对标准偏差（RSD）为1.49%，表明本研究所建立的Folin-Ciocalteu检测法准确可靠，完全可用于菜籽多酚含量的测定。

3 结论

本研究采用Folin- Ciocalteu比色法测菜籽多酚含量，以单宁酸为标准品，确定最佳的显色条件为Folin- Ciocalteu显色剂2.5 mL、饱和Na2CO3溶液4 mL、反应温度40 ℃、反应时间50 min、比色测定波长757 nm。标准曲线的线性回归方程为y=0.081 4x+0.031 1，相关系数r2为0.997 9，且单宁酸质量浓度在2～20 mg/L范围内与其吸光度呈现良好的线性关系。该法的稳定性试验、精密度试验、重现性试验、回收率试验的相对标准偏差（RSD）分别为0.419%、1.295%、230%、1.49%，表明本研究建立起的Folin- Ciocalteu比色法能快速、准确地测定菜籽多酚含量。

参考文献：

[1]张清安，范学辉. 多酚类物质抗氧化活性评价方法研究进展[J]. 食品与发酵工业，2011，37（11）：169-172.

[2]陈 萌，杨 湄，刘昌盛，等. 菜籽多酚的制备、检测及其在加工过程中的变化研究进展[J]. 中国油料作物学报，2013，35（1）：102-103.

[3]王文杰. 高锰酸钾滴定法测定茶多酚有关用剂的特性研究[J]. 福建茶叶，2002（1）：15-17.

[4]李春阳，许时婴，王 璋. 低浓度香草醛-盐酸法测定葡萄籽、梗中原花青素含量的研究[J]. 食品工业科技，2004（6）：128-130.

[5]肖 纯，张凯农，阳长敏，等. 铁氰化钾分光光度法测定单宁的适用性[J]. 华北农学报，1996，11（2）：127-130.

[6]Singleton V L，Orthofer R，Lamuela-Raventos R M. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent[J]. Methods in Enzymology，1999，299：152-178.

[7]郑仕宏，张海德，何 双，等. Folin-Ciocalteus法测定槟榔中多酚含量的研究[J]. 中南林业科技大学学报，2009，29（6）：165-169.

[8]何志勇，夏文水. Folin-Ciocalteu比色法测定橄榄中多酚含量的研究[J]. 林产化学与工业，2006，26（4）：15-18.

[9]刘丽香，Tanguy L，梁兴飞，等. Folin-Ciocalteu比色法测定苦丁茶中多酚含量[J]. 茶叶科学，2008，28（2）：101-106.

[10]张晓丽，曾晓雄，李春阳. 菜籽多酚提取工艺的优化[J]. 食品与机械，2012，28（2）：142-146.endprint

1.2.6 标准曲线的绘制 精确吸取0、0.05、0.10、0.15、020、0.25、0.30、0.35、0.40、0.45、0.50 mL单宁酸标准溶液，按照前期试验确定的适宜条件进行显色反应，检测吸光度。以吸光度为纵坐标（y）、单宁酸浓度（mg/L）为横坐标（x）绘制标准曲线。

1.2.7 Folin-Ciocalteu比色方法评价

1.2.7.1 稳定性试验 取菜籽提取液进行显色反应，反应完全（50 min）后在30 ℃下避光放置0、15、30、45、60、90、120 min 后测定吸光度，根据吸光度的变化评价该比色法在一段时间内的稳定性。

1.2.7.2 精密度试验 从同一份菜籽提取液中取6份样本进行Folin-Ciocalteu比色法检测，计算各样本中的多酚含量（mg/g），以分析结果的相对标准偏差评价该比色方法的精密度。

1.2.7.3 重现性试验 从同一份菜籽原料中取5份样品，分别进行多酚提取，然后利用Folin-Ciocalteu比色法检测各提取液的多酚含量（mg/g），并计算结果的相对标准偏差，以评价该比色方法的重现性。

1.2.7.4 加标回收试验 往菜籽提取液中加入不同量的单宁酸，分别测定其多酚含量，并计算其回收率和相对标准偏差，以评价该比色方法的准确度和可靠性。

2 结果与分析

2.1 Folin-Ciocalteu法检测条件研究

2.1.1 比色波长和标准品 由图1可知，没食子酸、单宁酸和菜籽提取液与Folin-Ciocalteu试剂反应显色后，均在 730～770 nm 范围内有一明显吸收峰。其中，没食子酸在 736 nm 处吸收最强，单宁酸在762 nm处吸收最强，菜籽提取液在757 nm处吸收最强。因此本试验以单宁酸为标准品，以 757 nm 为菜籽多酚比色测定的波长。

2.1.2 显色时间 由图2可知，10～40 min时，吸光度随反应时间的延长而快速增加，50 min后显色反应完全并趋于稳定，因此确定50 min为显色反应时间。

2.1.3 反应温度 由图3可知，反应温度在20～35 ℃时，吸光度快速增加，40 ℃时吸光度达到最高，为0.476，之后吸光度随温度升高而下降，因此确定显色反应温度为40 ℃。研究结果说明反应温度能影响比色效果，温度过低或过高均不利于多酚显色。

2.1.4 饱和Na2CO3 溶液添加量 由图4可知，饱和Na2CO3溶液添加量在1～4 mL时，随着添加量增加，吸光度逐渐增加，4 mL时达到最大值，为0.496，之后吸光度随Na2CO3溶液添加量的增加而降低，因此确定显色反应体系中加入饱和Na2CO3溶液的体积为4 mL。研究结果说明Folin-Ciocalteu显色剂与酚类化合物的反应必须在碱性条件下才可以显色，显色反应对Na2CO3用量有相当的依赖性。

2.1.5 Folin-Ciocalteu显色剂用量 由图5可知，当 Folin-Ciocalteu 试剂添加量在0.5～2.5 mL时，随着显色剂用量增加，吸光度逐渐增加至0.502，之后吸光度趋于稳定，因此确定Folin-Ciocalteu比色法显色剂用量为2.5 mL。

2.2 标准曲线的绘制

以单宁酸为标准品制作标准曲线（图6），回归方程为y=0.081 4x+0.031 1，x表示单宁酸浓度（mg/L），y表示吸光度，相关系数r2为0.997 9，表明单宁酸质量浓度在2～20 mg/L 范围内与其吸光度呈现良好的线性关系，符合朗伯比尔定律，该方程可用于多酚的定量测定。

2.3 Folin-Ciocalteu比色方法评价

2.3.1 稳定性试验 对Folin-Ciocalteu法测定菜籽多酚进行稳定性试验，显色反应体系水浴50 min后，避光放置0、15、30、45、60、90、120 min，测定的吸光度分别为0.495、0.495、0493、0.493、0.492、0.492、0.489。研究发现，随着时间延长，吸光度有下降趋势，但幅度不大，其相对偏差（RSD）为0419%，表明120 min内溶液稳定性良好。

2.3.2 精密度试验 从同一份菜籽提取液中取6份样本进行Folin-Ciocalteu比色法检测，计算各样本中的多酚含量分别为22.78、23.56、22.99、22.76、23.2、23.0 mg/g，其相对偏差（RSD）为1.295%，表明该方法具有较高的精密度，能满足样菜籽多酚样品分析的要求。

2.3.3 重现性试验 从同一份菜籽原料中取5份样品，分别提取其多酚，然后利用Folin-Ciocalteu比色法检测各提取液的多酚含量，分别为23.20、23.56、22.78、23.31、22.45 mg/g，其相对偏差（RSD）为2.30%，表明该方法重现性较好。

2.3.4 加标回收试验 由表1可知，6次加标回收试验的最低回收率为97.7%，最高回收率为102.1%，平均回收率为99.55%，回收率相对标准偏差（RSD）为1.49%，表明本研究所建立的Folin-Ciocalteu检测法准确可靠，完全可用于菜籽多酚含量的测定。

3 结论

本研究采用Folin- Ciocalteu比色法测菜籽多酚含量，以单宁酸为标准品，确定最佳的显色条件为Folin- Ciocalteu显色剂2.5 mL、饱和Na2CO3溶液4 mL、反应温度40 ℃、反应时间50 min、比色测定波长757 nm。标准曲线的线性回归方程为y=0.081 4x+0.031 1，相关系数r2为0.997 9，且单宁酸质量浓度在2～20 mg/L范围内与其吸光度呈现良好的线性关系。该法的稳定性试验、精密度试验、重现性试验、回收率试验的相对标准偏差（RSD）分别为0.419%、1.295%、230%、1.49%，表明本研究建立起的Folin- Ciocalteu比色法能快速、准确地测定菜籽多酚含量。

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