三颗针有效成分盐酸小檗碱精制工艺的优化

2014-07-16朱兰寸李俊平聂立勇王林玲何雪君廖伊茜马廷升

中国药业 2014年7期

朱兰寸，李俊平，聂立勇，王林玲，何雪君，廖伊茜，马廷升

（怀化医学高等专科学校药学系，湖南怀化 418000）

三颗针为小檗科植物三棵针 Berberis pruinosa Fr．的干燥根茎，因其茎常生三叉状针刺而得名，含小檗碱、小檗红碱、小檗胺、药根碱等化学成分，具有抗菌、降压和抗癌等多种生理活性，其主要成分小檗碱具有清热燥湿、泻火解毒作用，用于治疗细菌性痢疾、胃肠炎、副伤寒、支气管肺炎等，疗效确切[1]。在药物生产中，原料药盐酸小檗碱的纯度是关键，是药物制剂的质量保证。目前相关报道多为三棵针有效成分小檗碱提取、分离条件的优化，得到小檗碱粗品[2-4]，但尚未见有关小檗碱粗品精制为盐酸小檗碱工艺优化的报道。笔者应用 L9（34）正交试验设计优化三棵针提取的小檗碱粗品精制为盐酸小檗碱的工艺条件，以提高产品的收率。现报道如下。

1 仪器与试药

PHS-25型数字酸度计（上海伟业仪器厂）；UV-754型分光光度计（上海分析仪器公司）；FA1004B型电子分析天平（上海平轩科学仪器有限公司）。三颗针（购自湖南怀化大药房，经怀化医学高等专科学校杨宏健教授鉴定为正品三颗针的干燥根）；粗制小檗碱（按酸水提取法自制，经薄层色谱定性符合规定）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号713-9204）；其他所用试剂均为市售分析纯。

2 方法与结果

2．1 制备工艺

将粗制小檗碱（勿需干燥）置烧杯中，加入约50倍纯化水，水浴上回流煮沸30 min，迅速抽滤，不溶物可加纯化水30～40 mL再煮1次，滤过，合并滤液，加浓盐酸调pH为1～2，放冷，即可析出盐酸小檗碱精制品，减压过滤，并用少量70%乙醇洗涤结晶，于80℃以下干燥，称重，计算提取率。

2．2 正交试验设计

采用 L9（34）正交表进行试验设计，以纯化水用量（因素A）、回流时间（因素 B）、溶液 pH（因素 C）、乙醇体积分数（因素 D）作为考察因素，分别设计3个水平，见表1；以盐酸小檗碱提取率为评价指标，以盐酸小檗碱含量为参考，正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。由表2可知，影响三颗针盐酸小檗碱精制提取率的因素顺序为C＞B＞D＞A，即主要因素为溶液pH，其次为回流时间、乙醇体积分数、纯化水用量。试验号A2B3C1D2为最佳工艺条件，即纯化水用量为50倍样品、回流时间为30 min、溶液pH为1～2、乙醇体积分数为70%。由方差分析可知，以提取率为考察指标，4个因素中溶液pH对其有显著影响（P＜0．05），是关键因素。故方差分析与直观分析结果一致。

表1 正交试验因素水平表

表2 正交设计表及结果

表3 提取率方差分析表

2．3 盐酸小檗碱含量测定[5-6]

2．3．1 标准曲线制备

精密称取盐酸小檗对照品5 mg，置50 mL容量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度。精密量取对照品溶液 1．0，2．0，3．0，4．0，5．0 mL，分别置50 mL容量瓶中，加乙醇定容，摇匀，以乙醇为空白对照，在348 nm波长处测定吸光度。以质量浓度（C）对吸收度（A）进行线性回归，得回归方程 A＝0．051 82 C ＋0．008 15，r＝0．999 6(n ＝5)。结果表明，盐酸小檗碱质量浓度在 2．0 ～10．0 μg／mL 范围内与吸收度呈良好线性关系。

2．3．2 样品含量测定

精密称取盐酸小檗碱精制品50 mg，置100 mL容量瓶中，加乙醇定容，精密量取1．0 mL，置50 mL容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀。精密吸取1 mL，加入已处理好的中性氧化铝柱上，照2010年版《中国药典（二部）》中方法，用35 mL乙醇分次洗脱，至洗脱液无色，加乙醇稀释至50 mL，摇匀。在348 nm波长处测定吸光度。按回归方程计算，含量测定结果见表2。结果表明：按精制工艺所得到的盐酸小檗碱含量相差不大，按试验号A2B3C1D2最佳工艺条件，盐酸小檗碱含量为97．6%，符合中国药典标准规定（≥97．0% ）。

2．4 工艺验证试验

称取一定量粗制小檗碱 5份，每份 2．0 g，按 L9（34）试验筛选的最佳工艺条件制备盐酸小檗碱精制品，提取率平均值为75．7% ， RSD 为 2．65% （n＝5），盐酸小檗碱含量平均值为97．5% ，RSD 为 1．72%（n＝5）。结果表明，正交试验筛选的制备工艺条件(A2B3D1D2)是可靠的。