复方金钱草颗粒利胆及体外抗豚鼠胆囊平滑肌痉挛作用研究

温幼敏 ，何 飞 ，曾宪彪 ，苏 华 ，韦宝伟 ，马军花 ，韦桂宁

（1．广西万通制药有限公司，广西 南宁 530003； 2．广西中医药研究院，广西 南宁 530022）

复方金钱草颗粒由广金钱草、车前草、光石韦、玉米须等组 方，具有清热祛湿、利尿排石、消炎止痛之功效，用于泌尿系结石、尿路感染属湿热下注证者[1]。长期的临床实践发现，复方金钱草颗粒对胆结石患者具有良好的临床效果，但尚无相关文献报道。本研究中利用胆管引流法测定给复方金钱草颗粒前后大鼠胆汁的流量及成分，观察豚鼠胆囊肌条，探讨复方金钱草颗粒拮抗乙酰胆碱所致的胆囊收缩运动，旨在观察复方金钱草颗粒的利胆及抗胆囊痉挛的作用。

1 仪器、试药与动物

722型分光光度计（上海第三分析仪器厂）；分析天平（上海第二分析仪器厂）；ZH-Z离体器官测量系统（淮北正华生物仪器设备有限公司）；BL-420S型生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公司）；JZ301型微张力换能器（北京新航兴业科贸有限公司）。复方金钱草颗粒（广西万通制药有限公司，批号为101213）；肾石通颗粒（修正药业集团股份有限公司，批号为110126）；阿托品；总胆红素测试盒（南京建成生物工程研究所，批号为2011029）。Wistar大鼠，豚鼠、清洁级，均由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号为SCXK桂2009-0003。

2 方法与结果

2．1 对大鼠胆汁流量及胆汁中胆红素水平的影响[2]

取 Wistar大鼠 40只，雄性，250～300 g，均分为 4组，各 10只。试验前12 h禁食不禁水，试验时给大鼠腹腔注射乌拉坦麻醉后，仰位固定于固定板上，沿腹正中线切开约2 cm，打开腹腔，在十二指肠降部肠系膜中找到白色有韧性的胆管，在其下穿2根丝线，结扎乳头部，向肝脏方向作“V”形切口，插入直径为0．6 mm的塑料细管，可见有淡黄绿色胆汁流出，结扎固定塑料管，用1．5 mL的离心管收集胆汁。手术后用止血钳夹闭腹壁，以盐水纱布覆盖。待稳定20 min后，先收集30 min胆汁，选胆汁量为0．3～0．5 mL者进行利胆试验，各组分别由十二指肠给药，模型组给予金钱草颗粒高剂量（7．4 g ／kg）、低剂量（1．8 g ／kg），阳性对照组给予肾石通颗粒（3．3 g／kg），空白对照组给予等容量蒸馏水。给药后 2 h收集胆汁，记录胆汁流量，并测定胆汁总胆红素。结果见表1。

表1 对大鼠胆汁流量及胆红素水平的影响(±s，n＝10)

表1 对大鼠胆汁流量及胆红素水平的影响(±s，n＝10)

注：与对照组比较，t检验， P ＜0．05。

组别对照组阳性对照组高剂量模型组低剂量模型组给药剂量（g／kg）-3．3 7．4 1．8胆汁流量（mL）0．95 ± 0．26 1．34 ± 0．36 1．32 ± 0．40 1．15 ± 0．32胆汁总胆红素浓度（ mol／L）30．78 ± 7．82 38．69 ± 8．58 40．65 ± 9．11 34．82 ± 9．17

2．2 对豚鼠胆囊平滑肌痉挛的影响[2]477-478

取豚鼠，体重300～350 g，雌雄不限。禁食24 h后击头致毙。迅速取出胆囊，去除附着物。放在37℃充氧的Kerbs液中，洗净其内容物，制成2个平滑肌条，将肌条固定于ZH-Z离体器官测量系统装置上，给予应力1．0 g。待其稳定20 min，稳定后描记基线，加乙酰胆碱溶液（反应体系质量浓度为0．01 g／L），平滑肌收缩稳定后，分别加入复方金钱草颗粒(模型组)及阳性药阿托品(阳性对照组)。观察各样品对乙酰胆碱引起胆囊平滑肌收缩的影响，结果见表2。张力变化值＝给乙酰胆碱后张力-给药后张力，基础张力变化率＝给药后张力变化值／给乙酰胆碱后张力变化值×100%。

表2 对由乙酰胆碱所致豚鼠胆囊痉挛的影响(±s，n＝10)

表2 对由乙酰胆碱所致豚鼠胆囊痉挛的影响(±s，n＝10)

注：与对照组比较，t检验， P ＜0．05， P ＜0．01。

给药后张力变化率（%）组别 剂量 给乙酰胆碱后张力变化值(g)对照组阳性对照组模型组-1mg 62 g／L 31 g／L 6．89 ± 2．96 8．56 ± 2．36 8．07 ± 2．52 7．81 ± 2．09 5 min 18．48 ± 10．18 31．50 ± 11．50 36．65 ± 12．00 28．72 ± 12．06 10 min 17．89 ±9．84 30．93 ±11．35 38．53 ±11．42 27．65 ±9．03

3 讨论

胆囊结石是由在胆囊内形成的结石所引起的疾病。按照结石的化学成分可分为胆固醇结石、胆色素结石和混合结石3类，大多数胆囊结石都是以胆固醇结石为主的混合型结石。胆囊结石的具体形成原因至今尚未完全清楚，目前考虑与脂类代谢、胆固醇过饱和、成核过程异常、胆囊功能异常、细菌和基因片段等多种因素密切相关[3-8]。在胆结石移动过程中，引起胆囊、胆管或奥狄氏括约肌发生痉挛性收缩，或因胆结石突然阻塞了胆囊管或胆总管，造成胆囊或胆管的扩张或腔内压力升高，引起胆绞痛[9]。

本研究结果表明，该复方金钱草颗粒具有利胆和缓解乙酰胆碱引起胆囊痉挛的作用，但其作用的物质基础及分子机制，尚待进一步研究。

[1]周 军，韦桂宁，吴超伟，等．复方金钱草颗粒对肾结石的影响及其利尿、解痉、抗炎作用[J]．中国实验方剂学杂志，2011，17(18)：206-209．

[2]李仪奎．中药药理实验方法学[M]．第2版．上海：上海科学技术出版社，2006：472-473．

[3]Han T，Zhang D，Fu Z，et al．Retinol-binding protein 4 as a risk factor for cholesterol gallstone formation[J]．Mol Cell Biochem，2013，377(1-2)：219-227．

[4]Renner O，Lütjohann D，Richter D，et al．Role of the ABCG8 19H risk allele in cholesterol absorption and gallstone disease[J]．BMC Gastroenterol，2013，13（13）:30．

[5]Shih SC，Yang HW，Chang TY，et al．Gender-specific association of the interleukin 18 gene with symptomatic gallstone disease[J]．J Gastroenterol Hepatol，2013，28(4)：744-749．

[6]Fracanzani AL，Valenti L，Russello M．Gallstone disease is associated with more severe liver damage in patients with non-alcoholic fatty liver disease[J]．PLoS One，2012，7(7):e41 183．

[7]Chuang SC，Hsi E，Lee KT．Mucin genes in gallstone disease[J]．Clin Chim Acta，2012，413(19-20):1 466-1 471．

[8]Cui Y，Li Z，Zhao E，et al．Risk factors in patients with hereditary gallstones in Chinese pedigrees[J]．Med Princ Pract，2012，21(5):467-471．

[9]Lavoie B，Nausch B，Zane EA，et al．Disruption of gallbladder smooth muscle function is an early feature in the development of cholesterol gallstone disease[J] ．Neurogastroenterol Motil，2012，24(7):e313-e324．