维药神香草总黄酮抗炎、止咳、祛痰及平喘作用研究

麦合苏木·艾克木， 努尔江·肉孜， 阿不都热依木·玉苏甫

(新疆医科大学维吾尔医学院， 乌鲁木齐 830011)

维药神香草(HyssopusofficinalisL.)为唇形科(Labiatae)多年生草本植物，在新疆北部有野生分布。《维吾尔药志》中记载道:药用全草主要含黄酮、挥发油、生物碱等化学成分，常用于镇咳平喘、清热利湿。维吾尔医用于治疗气管炎的咳嗽、气喘、感冒发烧和风湿等病证[1-2]。近年在新疆人工种植神香草获得成功，为开发和利用神香草的食用价值和药用价值提供了充足的物质资源。本课题组对神香草抗哮喘药效物质及其作用机制进行系统研究，发现神香草水提物、醇提物、乙酸乙酯萃取物具有显著的抗炎、止咳、平喘作用，尤其是其乙酸乙酯萃取部位作用更显著；对神香草乙酸乙酯萃取部位抗炎作用机制的研究中，发现乙酸乙酯萃取部位通过抑制IL-2、IL-6、ET-1、TNF-ɑ、Ly、Eos、Neu分泌等途径减轻哮喘的炎症反应[3-4]; 进一步对神香草乙酸乙酯萃取部位进行化学成分分析，发现神香草乙酸乙酯萃取部位总黄酮含量达到46.5%，并通过AB-8大孔树脂分离纯化后可以使总黄酮含量达到66.7%[5]。但至今尚未发现有关神香草总黄酮的抗炎、止咳、祛痰、平喘作用等方面的研究报道。 因此本研究通过抗炎、止咳、祛痰以及平喘实验，探讨神香草总黄酮的抗炎、止咳、祛痰及平喘作用，从而为其临床应用及其治疗物质基础提供科学依据。

1 材料与方法

1.1药品与试剂神香草全草由新疆维吾尔自治区维吾尔医院药房提供，经新疆维吾尔自治区维吾尔医院制剂中心质检部鉴定为唇形科植物硬尖神香草(HyssopusofficinalisL.)的干燥地上部分(批号：20110416)。神香草总黄酮粉末由课题组发明的中华人民共和国发明专利 《一种神香草总黄酮提取物及其制备方法和用途》(专利申请号：201210399112.X )中的方法制备，含量为66.7%。二甲苯(天津市福晨化学试剂厂，批号:100909),酚红(天津市福晨化学试剂厂，批号:110908)，浓氨水(天津市福晨化学试剂厂，批号:110905),三氯化铝(天津市福晨化学试剂厂，批号:110406),氯化乙酰胆碱(上海三思试剂有限公司生产，批号030527),磷酸组织胺(上海丽珠东风生物技术有限公司生产，批号1200915),氨茶碱(0.1 g/片，四川锡成药业有限公司，批号：11070223)，急支糖浆(太极集团重庆涪陵制药厂有限公司，批号：20111201 ),无水乙醇、氯化钠、无水硫酸钠均为分析纯。

1.2仪器EYELAN-1000旋转蒸发仪(日本EYELA公司)，DK-S24数显电热恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂)，RE-52 旋转蒸发仪(上海生化仪器厂)，BL1500电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，UV-240 型分光光度计(日本岛津公司)，SK8210HP型超声波清洗器(上海科导公司)。

1.3实验动物昆明种小鼠50只，体质量18～22 g，豚鼠60只，体质量160～200 g，均为雌雄兼用，由新疆医科大学实验动物中心提供[生产许可证：SCXK(新)2011-0004]。

1.4神香草总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(抗炎作用)[6]取昆明种小鼠50只，体质量(20±2)g，雌雄各半，随机分成5组：空白对照组(0.9%生理盐水)、阳性对照组(急支糖浆5.0 g/kg)、神香草总黄酮高剂量组(0.8 g/kg)、神香草总黄酮中剂量组(0.4 g/kg)、神香草总黄酮低剂量组(0.2 g/kg)；灌胃给药1次/d，连续7 d，灌胃体积均为 0.2 mL/10 g，末次给药后30 min，各组小鼠均在小鼠右耳前、后面均匀涂二甲苯20 μL致炎，1 h后颈椎脱臼处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，用直径9 mm打孔器分别在两耳的同一部位打下圆耳片，精密称重，以左、右耳重量差为肿胀度，以此判断神香草总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响；耳肿胀度(mg)=右耳片重-左耳片重；肿胀抑制率(%)=[(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白对照组平均肿胀度]×100%。

1.5神香草总黄酮对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响(止咳作用)[7]取昆明种小鼠50只，体质量(20±2)g，雌雄各半，随机分成5组:空白对照组(0.9%生理盐水)、阳性对照组(急支糖浆5.0 g/kg)、神香草总黄酮高剂量组(0.8 g/kg)、神香草总黄酮中剂量组(0.4 g/kg)、神香草总黄酮低剂量组(0.2 g/kg)；灌胃给药1次/d，连续7 d，灌胃体积均为 0.2 mL/10 g，末次给药后l h，将小鼠逐一放入4 L密闭干燥容器内，恒压喷入25%浓氨水气雾，喷雾5 s引咳，观察其咳嗽潜伏期及2 min内咳嗽次数。

1.6神香草总黄酮对小鼠气管段酚红排泌量的影响(祛痰作用)[8-9]取昆明种小鼠50只，体质量(20±2)g，雌雄各半，随机分成5组：空白对照组(0.9%生理盐水)、阳性对照组(急支糖浆5.0 g/kg)、神香草总黄酮高剂量组(0.8 g/kg)、神香草总黄酮中剂量组(0.4 g/kg)、神香草总黄酮低剂量组(0.2 g/kg)；灌胃给药1次/d，连续7 d，灌胃体积均为 0.2 mL/10 g，末次给药后30 min，每只小鼠腹腔注射5%酚红生理盐水溶液0.2 mL/20 g体质量，30 min后处死小鼠，仰位固定，颈部拉直，解剖分离出气管，将各气管段放入预先盛有1.5 mL 5% NaHCO3溶液的试管中，超声波清洗，使气管段中的酚红完全释放，清洗液离心，取上清液于分光光度计546 nm处比色，测定OD值，与酚红标准曲线比较，折算成酚红含量，根据酚红含量和动物体质量计算出校正酚红含量。

1.7神香草总黄酮对豚鼠乙酰胆碱组胺引喘的影响(平喘作用)[10]取60只豚鼠，体质量160～200 g，雌雄兼用，先将豚鼠逐一放在密闭的玻璃钟罩内，待安静后，启动超生雾化器，以恒压喷雾2%氯化乙酰胆碱与0.1%组胺1∶1混合液15 s引喘，喷雾停止后，立即观察6 min内豚鼠出现喘息性抽搐的潜伏期(从喷雾开始到哮喘发作、呼吸极度困难直至抽搐跌倒的时间)，选择潜伏期小于150 s 的豚鼠用于正式实验, 并以此潜伏期作为给药前潜伏期；挑选合格动物，按体质量、性别随机分为5组：空白对照组(0.9 %生理盐水)、阳性对照组(氨茶碱0.15 g/kg)、神香草总黄酮高剂量组(0.5 g/kg)、神香草总黄酮中剂量组(0.25 g/kg)、神香草总黄酮低剂量组(0.125 g/kg)；灌胃给药1次/d，连续7 d，灌胃体积均为 0.2 mL/10 g，末次给药1 h后，以同样条件引喘，观察引喘潜伏期，大于360 s不跌倒者按360 s计算，对各实验组豚鼠的引喘潜伏期进行比较。

2 结果

2.1神香草总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(抗炎作用) 致炎后各组小鼠右耳立刻出现高度红肿现象，阳性对照组和3个不同剂量神香草总黄酮对二甲苯所致的小鼠耳肿胀均有明显抑制作用(P<0.05)，3个不同剂量的神香草总黄酮给药组肿胀抑制率呈明显的剂量依赖关系，抑制作用随剂量的增加而增加(P<0.05)，见表1。

表1 神香草总黄酮对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与神香草总黄酮低剂量组比较，△P<0.05。

2.2神香草总黄酮对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响(止咳作用) 阳性对照组和3个不同剂量的神香草总黄酮对浓氨水致小鼠咳嗽反应有明显的抑制作用，能延长小鼠咳嗽反应的潜伏期(P<0.05)，并减少咳嗽次数(P<0.05)，3个不同剂量的神香草总黄酮给药组止咳作用呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)，见表2。

2.3神香草总黄酮对小鼠气管段酚红排泌量的影响(祛痰作用) 阳性对照组和3个不同剂量的神香草总黄酮能明显提高小鼠呼吸道酚红排泌量(P<0.05)，3个不同剂量的神香草总黄酮给药组祛痰作用呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)，见表3。

表2 神香草总黄酮对浓氨水致小鼠咳嗽反应的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05； 与神香草总黄酮低剂量组比较，△P<0.05。

表3 神香草总黄酮对小鼠气管段酚红排泄量的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与神香草总黄酮低剂量组比较，△P<0.05。

2.4神香草总黄酮对豚鼠乙酰胆碱组胺引喘的影响(平喘作用) 阳性对照组和3个不同剂量的神香草总黄酮给药组能明显延长豚鼠引喘潜伏期(P<0.05)；3个不同剂量的神香草总黄酮给药组引喘潜伏期呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)，见表4。

表4 神香草总黄酮对组胺引起哮喘反应的影响

注：与空白对照组比较，*P<0.05；与给药前比较，△P<0.05；与神香草总黄酮低剂量组比较，▲P<0.05。

3 讨论

神香草的维吾尔名祖帕奇尼(祖帕)，维吾尔医常用用药材，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准，维吾尔药分册》、《维吾尔药志》、《维吾尔药志》中:药用全草，含挥发油、黄酮、生物碱、多糖等化学成分，维吾尔医常用于镇咳平喘、清热利湿。维吾尔医用于治疗气管炎的咳嗽、气喘、感冒发烧和风湿等病证。

前期，本课题组对神香草不同活性部位的抗炎、平喘作用研究中发现，神香草水提物、醇提物、乙酸乙酯萃取物均具有抗炎、止咳、平喘作用，其中其乙酸乙酯萃取部位抗炎、平喘作用更显著，其通过抑制炎症细胞和细胞因子的分泌等途径减轻哮喘炎症反应。并通过AB-8大孔树脂分离纯化神香草总黄酮，使其含量达到66.7%，并发明一项中华人民共和国发明专利《一种神香草总黄酮提取物及其制备方法和用途》(专利申请号：201210399112.X )。因此，本研究对神香草总黄酮抗炎、止咳、祛痰以及平喘作用进行实验，旨在探讨其抗炎、止咳、祛痰及平喘作用。本研究结果表明，在以血管通透性增加为主要改变的急性炎症模型实验中，神香草总黄酮能显著抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀炎症反应(P<0.05)，并且这种作用呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)，说明神香草总黄酮具有抗炎作用。同样剂量的神香草总黄酮能显著抑制浓氨水喷雾引起的小鼠咳嗽反应及延长咳嗽潜伏期(P<0.05)，提示神香草总黄酮作用于有关化学感受器, 抑制支气管黏膜对刺激的反应性而表现出镇咳作用。另外，神香草总黄酮能显著促进小鼠气管段酚红排泄量(P<0.05)，能显著延长乙酰胆碱组胺引起的哮喘潜伏期(P<0.05)，此作用均呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)，提示神香草总黄酮具有明显的祛痰、平喘作用。

慢性支气管炎等临床呼吸系统常见病及多发病，主要表现为咳、痰、喘症状，对其治疗应达到镇咳祛痰、解痉平喘的目的。神香草总黄酮的抗炎、止咳、祛痰及平喘作用，不仅为维药神香草的临床应用及其治疗物质基础提供了理论依据，而且具有较好的开发价值，至于其有效成分以及药理作用的确定有待今后进一步研究。

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