RP-HPLC 法测定蒙药尤宁-7 散中羟基红花黄色素A 的含量

2014-07-09靖彩霞

中国民族医药杂志 2014年8期

靖彩霞蒋蓉

( 包头市食品药品检验检测中心，内蒙古包头 014060)

尤宁-7 散由绿松石、石膏、红花、香青兰等7 味药组成的复方制剂，其主治目赤，胸闷，肝损伤，肝区疼痛，“宝日”等病。此方属于蒙药验方，至今尚无质量控制标准。为控制该制剂的质量，保证临床用药安全、有效，本文参照《中华人民共和国药典》2010 年版一部“红花”项下羟基红花黄色素A 的含量测定方法［1］，选择本品中红花的主要成分羟基红花黄色素A 作为检测指标，采用高效液相色谱法对本品中羟基红花黄色素A 进行定量分析，结果表明该方法简便、快速、准确、重现性好，可作为本制剂内在质量控制的有效方法。

1 仪器与试药

岛津LC -10ATvp 泵，SPD -10Avp 型检测器，N -2000 工作站，sartorious BP211D 型电子天平，岛津UV -2450 型紫外-可见分光光度计。羟基红花黄色素A 对照品(批号: 111637 -201207，供含量测定用): 中国食品药品检定研究院;乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。样品(批号: 303131，303051，303201)为包头市蒙中医院提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱: 色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用Apollo C18(150mm ×4.6mm，5μm);流动相: 甲醇-乙腈-0.7 磷酸溶液(26 ︰2 ︰72)为流动相，在该条件下，羟基红花黄色素A 具有较好的保留时间，与其他杂质分离完全，峰形好，阴性样品不干扰测定，理论板数较高，羟基红花黄色素A 的理论板数为3000 以上。柱温为室温。

检测波长的选择: 精密称取羟基红花黄色素A 对照品适量，用25%甲醇制成1mL 含0.1304mg 的溶液，在220 ～550nm 波长范围扫描。结果: 羟基红花黄色素A 在223.0 nm 和403.0 nm 有最大吸收，根据中国药典2010 年版一部“红花”项下羟基红花黄色素A 的含量测定采用的检测波长为403nm，故选择403nm 作为检测波长。

2.2 对照品溶液的制备: 精密称取羟基红花黄色素A 对照品适量，加25%甲醇制成每1mL 含40μg 的溶液，作为对照品溶液。取20μL 注入液相色谱仪测定。见图1。

图1 羟基红花黄色素A 对照品

图2 尤宁-7 散样品

图3 阴性对照

2.3 供试品溶液的制备: 取样品，研细，精密称取0.6g，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率300W，频率50kHz)40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液20μL 注入液相色谱仪测定。见图2。

2.4 阴性对照溶液的制备: 按处方配比取除红花外的其他处方量药材，按制备工艺方法制备阴性样品，按上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照液。取20μL 注入液相色谱仪测定。见图3。

2.5 线性关系考察: 精密称取羟基红花黄色素A 对照品约13mg，置100mL 量瓶中，加25%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用(相当于每1mL 含羟基红花黄色素A 对照品0.1304mg)。精密量取上述对照品溶液各0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，置10mL 量瓶中，用25%甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定，以峰面积对对照品的进样量进行回归分析，结果羟基红花黄色素A 在0.1304 ～1.304μg 范围内呈良好的线性关系，回归方程为: Y =5125.4027+1093457.496X，r=0.9999 标准曲线数值见表1。

表1 标准曲线数值

2.6 提取效率的考察: 取样品(批号: 303131)，研细，取4份，各0.6g，精密称定，按样品测定项处理，分别测定羟基红花黄色素A 的含量，结果见表2。从表中数据可见，超声提取40min 和60min 羟基红花黄色素A 的含量一致，故超声提取时间定为40min。

表2 提取效率结果

2.7 稳定性试验: 取同一份样品(批号: 303131)溶液，分别在0h、2h、4h、8h、12h 进行测定，结果见表3。从表中数据可见，，羟基红花黄色素A 在12h 内稳定。

表3 不同时间测定样品中羟基红花黄色素A 的峰面积积分值

2.8 重复性试验: 取同一批号(303051)供试品6 份，按样品测定项处理，分别测定羟基红花黄色素A 的含量，其RSD 为0.6%。结果表明，本方法重复性好，结果见表4。

表4 羟基红花黄色素A 含量测定重现性试验结果

2.9 加样回收率试验: 取供试品(样品批号: 303051，含量: 3.16 mg/g)9 份，各约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入用25%甲醇配制的羟基红花黄色素A 对照品溶液(羟基红花黄色素A 浓度为0. 1304mg/mL)4. 0mL、7. 0 mL、10.0 mL，加入25%甲醇至50 mL，称定重量，超声提取(功率300W，频率50kHz)40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取20μL 注入液相色谱仪测定，按外标法计算含量，结果见表5。结果表明本方法回收率良好。

表5 加样回收率试验结果

2.10 样品测定: 取3 批样品，每批各3 份，按样品测定项处理，分别取供试品溶液、对照品溶液各20μL 注入液相色谱仪测定。按外标法计算羟基红花黄色素A 含量，结果见表6。

表6 样品中羟基红花黄色素A 含量测定结果

2.11 药材的含量测定: 取药材粉末0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，按中华人民共和国药典一部“红花”项下羟基红花黄色素A 的含量测定方法处理，测定羟基红花黄色素A 的含量。按外标法计算含量。结果见表7。

表7 红花药材羟基红花黄色素A 含量测定结果

2.12 转移率测定: 实验中采用中国药典2010 年版一部“红花”项下含量测定方法对上述样品(批号: 303051)生产所用红花药材进行了含量测定量为1.5%，测定结果见表7。按理论值折算，本品每1g 其羟基红花黄色素A 的含量3.48mg。从供试品的实测结果来看，羟基红花黄色素A 的转移率为90.1%。按中国药典2010 年版一部规定: 红花中羟基红花黄色素A 的含量不得少于1.0%进行折算，乘以转移率再下浮10%。本品每克含红花以羟基红花黄色素A(C27H30O15)计，每克应不少于1.88mg。