高效液相色谱(HPLC)法测定硝酸芬替康唑阴道乳膏的含量

王华香，林爱和，黄柳，马明轩

（海南海力制药有限公司，海南海口570310

高效液相色谱(HPLC)法测定硝酸芬替康唑阴道乳膏的含量

王华香，林爱和，黄柳，马明轩

为建立高效液相色谱（HPLC）法测定硝酸芬替康唑阴道乳膏含量的方法，采用流动相为磷酸盐缓冲液（pH为6.5）体系，检测波长229 nm,柱温40℃，流速1.0 mL/min，理论板数按硝酸芬替康唑峰计算不低于2000，进样量为10 μL，结果发现，硝酸芬替康唑进样量在0.1~0.5 mg/mL范围内呈线性关系，平均回收率为99.58%（RSD=0.29%,n=9），最低检测限0.1 μg（S/N=3）.该法准确，可靠，重复性好，可作为控制硝酸芬替康唑阴道乳膏质量的测定方法.

HPLC法；硝酸芬替康唑；含量测定；阴道乳膏

硝酸芬替康唑（fenticonazole nitrate）化学名为1-[2-（2,4-二氯苯基）-2-[[（4-苯基硫苯基）-甲氧基]乙基]-咪唑硝酸盐，分子式C24H21CL2N3O4S，属咪唑类抗真菌药物，由意大利Recordati公司研制开发[1]，主要用于皮肤真菌病、体癣以及皮真菌、酵母菌和其它真菌引起的感染[2].硝酸芬替康唑在国外注册商品名为Lomexin，于1987年首次在意大利上市，尔后在英国、德国、澳大利亚、法国、韩国等国上市，剂型有阴道乳膏，溶液剂，气雾剂及软胶囊等.硝酸芬替康唑抗菌谱广，在低浓度时有抑菌作用，高浓度时有杀菌作用.

硝酸芬替康唑目前尚未收载于中国药典中，其相应制剂阴道乳膏中的含量测定方法也未见用高效液相色谱（HPLC）法，本文旨在建立阴道乳膏中的硝酸芬替康唑含量的高效液相色谱测定方法，为阴道乳膏中的硝酸芬替康唑含量质量控制提供科学依据.

1 仪器与药剂

SPD-20A高效液相色谱仪（日本岛津），Lcsolu⁃tion液相色谱工作站.乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为国产分析分析纯.硝酸芬替康唑对照品（批号：1.1，规格：50mg，含量为100%，Europe Phar⁃macopoeia Reference Standard提供）；硝酸芬替康唑阴道乳膏（本公司自制，批号：130601，130602，130603）.

2 方法与结果

2.1 色谱条件

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾3.4 g，加水溶解，并稀释至1000 mL）-三乙胺（62∶38∶1），用磷酸调pH 6.5；检测波长为229 nm，柱温为40℃，流速：1.0 mL/min，进样量为10 μL.在上述色谱条件下，硝酸芬替康唑主峰的保留时间为22.815 min，分离度大于1.5，理论板数按硝酸芬替康唑计算，不低于2000.

2.2 对照液的配置

精密称取硝酸芬替康唑对照品30 mg，置100 mL容量瓶中，加流动相适量使之溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照液.

2.3 供试液的制备

精密称取阴道乳膏适量（约相当于硝酸芬替康唑30 mg）置100 mL容量瓶中，加适量流动相超声使之溶解，放冷至室温，加流动相稀释到刻度，摇匀，滤过，续滤液作为供溶液.

2.4 样品测定

采用229 nm作为检测波长，以乙腈-磷酸盐缓冲液－三乙胺（pH 6.5）为流动相，分别精密量取三个批号的供试液和对照液各10 μL，分别注入液相色谱仪中，按外标法以峰面积计算硝酸芬替康唑含量，结果130601，130602，130603批次硝酸芬替康唑阴道乳膏的含量分别为99.95%，99.70%和100.09%.

3 方法学考察

3.1 干扰试验[4]

配制硝酸芬替康唑阴道乳膏中的空白辅料液，对照品溶液和供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，实验表明，供试品色谱与对照品色谱的相应位置上，显相同的色谱峰；空白辅料溶液在相应的位置上无干扰色谱峰，说明辅料对测定结果无干扰.实验结果见图1.

图1 高效液相色谱图Fig.1HPLC spectrums

3.2 线性关系考察

精密称取硝酸芬替康唑对照品适量，加流动相溶解制成1 mg/mL对照品储备液；分别精密量取对照品储备液适量，加流动相稀释制成浓度为0.1，0.24，0.30，0.36，0.5 mg/mL的系列对照品溶液.精密量取系列对照品溶液各10 μL注入液相色谱仪，照2.1项色谱条件，以浓度（mg/mL）为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归（见图2）.结果表明硝酸芬替康唑溶液在0.1~0.5 mg/mL的浓度范围内，其浓度与峰面积呈良好的线性关系，回归方程：y=2.95× 107X+2.44×105，r2=1.00.

图2 硝酸芬替康唑线性Fig.2Fenticonazole nitrate linearity

3.3 最低检测限度

精密称取硝酸芬替康唑对照品适量，加流动相溶解并逐步稀释制成一定浓度的溶液，摇匀；精密量取此溶液10 μL注入液相色谱仪，照上述色谱条件分析，信噪比约为3∶1时，计算硝酸芬替康唑的最低检测限.求得硝酸芬替康唑的最低最低检测限为0.1 μg/mL.

3.4 重复性试验

称取130601批硝酸芬替康唑阴道乳膏样品6份适量（约相当于硝酸芬替康唑30 mg）置100 mL容量瓶中，分别加流动相超声溶解并稀释到刻度摇匀，滤过作为供试液，精密量取对照液与供试液各10 μL注入液相色谱仪，在2.1项色谱条件，按外标法以峰面积计算，平均含量为99.85%，RSD为0.62%，结果表明该方法重复性良好.

3.5 回收率试验

按供试液浓度的80%，100%，120%，精密称取硝酸芬替康唑对照品各三份适量，分别置100 mL量瓶中，再分别加入相当于硝酸芬替康唑阴道乳膏处方量的辅料，加流动相适量溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液分别作为供试，各精密量取对照液，供试液10uL注入液相色谱仪，记录色谱峰面积计算回收率（%）和RSD值，结果见表1.

表1 回收率测定结果Tab.1Determination result of refine rate

3.6 溶液稳定性试验

取供试品溶液置于室温保存，分别在0，2，4，6，8 h时精密量取供试液10 μL注入液相色谱仪进行分析，记录色谱峰面积，计算RSD.结果表明硝酸芬替康唑阴道乳膏供试液在室温保存8 h稳定，测定结果的RSD为0.51%.

3.7 检测波长的选择

取硝酸芬替康唑对照品适量，加入乙醇溶解，并稀释至每1 mL含硝酸芬替康唑0.02 mg，照紫外-可见分光光度法（中国药典2010年版二部附录IV A）测定，在200~800 nm波长范围内进行扫描.结果显示，硝酸芬替康唑在229 nm处均有最大吸收，故在本实验中采用229 nm作为检测波长.

3.8 流动相的选择

硝酸芬替康唑原料《英国药典》（BP2013）标准流动相：乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾3.4 g，加水溶解并稀释至900 mL，用磷酸调节pH值为3.0，再加水稀释至1000 mL）（70∶30）.

精密称取原料适量置100 mL量瓶中，加流动相溶解，并稀释制成每1 mL含硝酸芬替康唑1mg，摇匀作为供试液；精密量取供试液10 μL，分别在以上述流动相系统下进样.记录色谱图，并分别对主峰的保留时间，面积百分比[A（%）]，理论板数，拖尾因子，分离度，峰形进行考察.根据试验结果，分离度不理想，故对《英国药典》（BP2013）标准流动相进行配比及pH值调整，使其达到较好的分离效果.经试验确定流动相调整为：乙腈-磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾3.4 g，加水溶解，加水稀释至1000 mL）－三乙胺（62∶38∶1）,用磷酸调pH 6.5.

4 结论

实验表明，本实验建立的硝酸芬替康唑阴道乳膏的含量测定方法专属性好，结果准确，操作简便，快速，为本品乳膏制剂的质量控制提供了一种可靠的方法.

[1]崔家华,邹巧根,冯振斌,等.RP-HPLC法测定硝酸芬替康唑含量及有关物质[J].药学进展,2010,34(4):174-176.

[2]胡汉昆,颜锵,刘萍,等.抗真菌药硝酸芬替康哇研究概述[J].中国药师,2010,1(11):1663-1664.

[3]胡汉昆,颜锵.硝酸芬替康唑阴道泡腾片的制备与质量控制[J].中国药房,2010,21(33):3118-3120.

[4]邹巧根,崔家华,冯振斌,等.手性高效液相色谱法拆分硝酸芬替康唑对映异构体[J].中国药科大学学报,2011,42(6): 534-537.

[5]麻静,陈宝泉,卢学磊,等.抗真菌药硝酸芬替康唑合成工艺改进[J].天津理工大学学报,2010,26(5):50-52.

[6]王海梅,邵卿,梅胜尧,等.硝酸芬替康唑凝胶阴道刺激性研究[J].中外医疗,2014(15):61-62.

[7]陈宝泉,雷英杰,李彩文,等.相转移催化法合成硝酸芬替康唑[J].中国药物化学杂志,2007,17(1):52-53.

责任编辑：毕和平

Determination of Fenticonazole Nitrate Vaginal Cream by HPLC

WANG Huaxiang，LIN Aihe，HUANG Liu，MA Mingxuan
（Hainan HaiLi Pharmaceutical Co.，Ltd，Haikou 570310，China）

A method for the determination of fenticonazole nitrate vaginal cream was established by HPLC.Taking phos⁃phate buffer solution（pH=6.5）as the mobile phase,the detection wavelength was 229 nm,the column temperature was 40℃,the flow rate was 1.0 ml/min,the number of theoretical plates by Fenticonazole Nitrate should not be less than 2000, the injection volume was 10 μL,and the results showed that the linear range of fenticonazole nitrate was 0.1-0.5 mg/ml（r2= 1.00,n=5）,the mean refine rate of fenticonazole nitrate was 99.58%（RSD=0.29%,n=9）and the detection limitation was 0.1μg（S/N=3）.This experimental method is accurate,reliable,as well as stable and reproducible,which can be used for de⁃termination of fenticonazole nitratevaginal cream.

HPLC；fenticonazole nitrate；content determination；Vaginal Cream

R 978.5

A

1674-4942（2014）04-0407-03

2014-09-07