白耙齿菌菌丝培养环境条件的研究

于 萍，隋飞飞，陈艳秋，冉丽萍

(延边大学农学院，吉林 延吉 133002)

白耙齿菌菌丝培养环境条件的研究

于 萍，隋飞飞，陈艳秋，冉丽萍*

(延边大学农学院，吉林 延吉 133002)

以菌丝干重和菌丝生长速度为考核指标，通过单因素试验，对白耙齿菌菌丝生长的培养基配方、温度、pH值及通气条件进行筛选。试验结果表明，最适培养基为YPAD培养基，最适温度为32℃，最适pH值为7.0，在正常通气培养条件下有利于菌丝生长和干重积累。

白耙齿菌；菌丝；培养环境条件

白耙齿菌Irpexlacteus(Fr.) Fr.，又名白囊孔菌、白囊耙齿菌，分类学上隶属于担子菌亚门(Basidiomycetes)、层菌纲(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、多孔菌科(Polyporaceae)、耙齿菌属(IrpexFr.)[1]。白耙齿菌子实体为一年生担子果，形态结构多变，菌盖表面乳白色至浅黄色，子实层体奶油色至淡黄色，幼时孔状，成熟后撕裂成耙齿状[2]。

在国外，白耙齿菌的应用主要集中在脱色合成染料[3，4]和降解土壤中各种顽固有机污染物[5]。在我国白耙齿菌主要用作药物制剂，目前已开发出多种药剂产品，如肾炎康、益肾康胶囊等[6]。白耙齿菌含有多种药用成分[7-9]，具有很高的药用价值以及市场开发潜力。目前对白耙齿菌的研究主要集中在化学成分及药理作用上，人工培养研究较少，因此本试验在筛选其最佳培养基配方的基础上对其环境条件进行研究，为人工驯化栽培奠定基础。

1 材料与方法

1.1 供试菌株

供试菌株子实体由课题组成员于2010年采自长白山林区，经吉林农业大学图力古尔教授鉴定为白耙齿菌。将子实体带回实验室进行组织分离，在PDA培养基上纯化获得供试菌株。菌种由延边大学农学院应用真菌实验室保存。

1.2 试验方法

1.2.1 不同培养基对白耙齿菌菌丝生长的影响

培养基分别采用PDA培养基、CPDA培养基、YPAD培养基、PGY培养基、TY培养基、SEM培养基、1号培养基(葡萄糖 10 g·L-1、酵母膏 10 g·L-1、淀粉 10 g·L-1、NaCl 5 g·L-1、CaCO33 g·L-1、琼脂 20 g·L-1)。每个处理重复5次，采用平板培养法，每个培养皿中装培养基35 mL，高温高压灭菌后，接直径为0.5 cm的菌块于培养皿中央，在25℃恒温箱中进行暗培养。待菌块发菌后，利用十字交叉法测定菌落直径，定时观察并记录菌丝生长速度、菌丝长势及菌落边缘整齐度等特征。待菌丝长满后刮取菌丝，于45℃恒温箱中烘干后，采用电子天平(余姚市金诺天平仪器有限公司，精确度为万分之一)称量并记录菌丝干重。数据采用SPSS 11.5软件中的Duncan检验进行差异显著性分析(显著水平为p<0.05)。

1.2.2 不同温度对白耙齿菌菌丝生长的影响

利用获得的最佳培养基作为基础培养基，分别设置20℃、23℃、26℃、29℃、32℃、35℃六个处理。其它试验方法、步骤、测定项目同1.2.1。

1.2.3 不同pH值对白耙齿菌菌丝生长的影响

利用获得的最佳培养基作为基础培养基，分别设置pH 4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0八个处理。其它试验方法、步骤、测定项目同1.2.1。

1.2.4 不同通气条件对白耙齿菌菌丝生长的影响

利用获得的最佳培养基作为基础培养基，分别设置单层牛皮纸包扎(A)、单层聚乙烯塑料薄膜包扎(B)2个处理，以不包扎(C)作为对照。其它试验方法、步骤、测定项目同1.2.1。

2 结果与分析

2.1 不同培养基对白耙齿菌菌丝生长的影响

不同培养基对白耙齿菌菌丝生长的影响见表1。

表1 不同培养基对白耙齿菌菌丝生长的影响

注：+表示生长稀疏；++表示生长较致密；+++表示生长致密；小写字母表示P<0.05水平上的差异显著性。下同。

从表1中可以看出，白耙齿菌菌丝可以利用多种培养基，但不同培养基对白耙齿菌菌丝生长的影响明显不同。在CPDA培养基上菌丝生长速度最快，但菌丝长势弱；在YPAD培养基上培养的白耙齿菌菌丝粗壮，洁白，边缘整齐，菌丝干重显著高于其他处理。因此，白耙齿菌菌丝生长的最适培养基为YPAD培养基。

2.2 不同温度对白耙齿菌菌丝生长的影响

不同温度对白耙齿菌菌丝生长的影响明显不同，结果见表2。

表2 不同温度对白耙齿菌菌丝生长的影响

如表2所示，白耙齿菌菌丝在20℃～35℃范围内均能生长，但不同温度下长势明显不同。在20℃～32℃范围内，菌丝的日均生长速度和菌丝干重随温度的升高而增加，随后菌丝干重随温度的升高而减少。32℃时菌丝粗壮，浓密，边缘整齐，干重最大，为 187.18 mg 。因此，白耙齿菌菌丝生长的最适生长温度为32℃。

2.3 不同pH值对白耙齿菌菌丝生长的影响

不同pH值对白耙齿菌菌丝生长速度和干重的影响明显不同，结果见表3。

表3 不同pH值对白耙齿菌菌丝生长的影响

由表3可见，pH值在4.5～8.0之间菌丝均能生长。pH值在4.5～7.0范围内时，菌丝干重随pH值的增大而增大，pH值在7.0～8.0范围内时，菌丝干重和日均生长速度随pH值的增大而减小。pH值为7.0时，菌丝浓密，粗壮，边缘整齐，菌丝干重最大，为 251.31 mg。因此，白耙齿菌菌丝生长的最适宜pH值为7.0。

2.4 不同通气条件对白耙齿菌菌丝生长的影响

不同通气条件对菌丝生长没有明显影响，结果见表4。

表4 不同通气条件对白耙齿菌菌丝生长的影响。

由表4可见，3种处理下菌丝生长速度没有明显差异，但不包扎处理(C)时菌丝干重最大，为 113.43 mg，其次是牛皮纸包扎(A)，二者差异不显著。采用单层聚乙烯塑料薄膜(B)包扎时，菌丝长势较弱，说明在正常通气培养条件下有利于白耙齿菌菌丝生长和干重积累。

3 小结

试验证明，白耙齿菌菌丝生长的最佳培养基配方为YPAD培养基(酵母膏 10 g·L-1、蛋白胨 20 g·L-1、葡萄糖 20 g·L-1、琼脂 20 g·L-1)；29℃～32℃范围内有利于白耙齿菌生长，最适培养温度为32℃；pH在6.5～7.5范围内适合白耙齿菌菌丝生长，以pH7.0为最佳；正常通气培养条件下有利于白耙齿菌菌丝生长和干重积累。大多数食(药)用菌的最适温度为25℃左右，白耙齿菌最适温度为32℃，较大多数食(药)用菌偏高，但与有柄灵芝[10]和香味全缘孔菌[11]相差不大。白耙齿菌液体培养及出菇试验还有待于进一步研究。

[1]图力古尔，戴玉成. 长白山主要食药用木腐真菌多样性及其保育[J]. 菌物研究，2004，2(2)：26.

[2]戴玉成，图力古尔. 中国东北野生食药用真菌图志[M]. 北京：科学出版社，2007：100.

[4]Duraisamy Kalpana, Natarajan Velmurugan, Jae Hong Shim,et al. Biodecolorization and biodegradation of reactive Levafix Blue E-RA granulate dye by the white rot fungusIrpexlacteus[J]. Journal of Environmental Management, 2012, 111(30): 142-149.

[5]Eduard Borràs, Gloria Caminal, Montserrat Sarrà, et al. Effect of soil bactera on the ability of polycyclic aromatic hydrocarbonsb (PAHs) removal byTrametesversicolorandIrpexlacteusfrom contaminated soil[J]. Soil Biology and Biochemistry, 2010, 42(12): 2087-2093.

[6]戴玉成，图力古尔. 中国东北野生食药用真菌图志[M]. 北京：科学出版社，2007：100.

[7]杨真威，姜瑞芝，陈英红，等. 耙齿菌糖蛋白的提取分离、理化性质及抗炎活性[J]. 天然产物研究与开 发，2005，17(3)：280-282.

[8]石陶圣，吴凌，赵兴红，等. 响应面法优化白囊耙齿菌胞内多糖提取条件[J]. 中国医药工业杂志，2009，40(10)：743-746.

[9]张蒙，杜琳娜，张野，等. 响应面法结合满意度函数优化白囊耙齿菌发酵培养基[J]. 中国医药工业杂志，2011，42(1)：17-20.

[10]梁志群，陈子武. 有柄灵芝菌丝生物学特性研究[J]. 中国农学通报，2011(18)：164-167.

[11]魏玉莲，周宝祥. 香味全缘孔菌培养条件的研究[J]. 林业科学研究，2005(4)：451-454.

Research on Culture Conditions ofIrpexlacteusMycelia

YU Ping, SUI Fei-fei, CHEN Yan-qiu, RAN Li-ping

(Agricultural College of Yanbian University, YanjiJilin133002)

Take mycelium dry weight and growth rate as evaluation indexes, the best conditions forIrpexlacteuscultivation were screened through one-way analysis of variance. The results showed that the YPAD mycelium was most suitable for mycelial growth, and the optimal temperature and pH were 32℃ and 7.0 respectively. This study also indicated that the normal ventilation conditions was good for mycelial growth and accumulation of dry weight.

Irpexlacteus; Mycelial growth; Culture condition

于萍(1990-)，女，在读硕士研究生，研究方向为特种植物资源与生物技术。

*通信作者： 冉丽萍，女，主要从事地方种质资源开发与利用的研究。E-mail: cyq326@126.com

2014-07-25

S646.9

A

1003-8310(2014)05-0035-02