S-100和CD83+DC在喉黏膜病变中的表达及意义

金 丹 王雪峰 王唯一 张 敏 刘 学

S-100和CD83+DC在喉黏膜病变中的表达及意义

金 丹 王雪峰△王唯一 张 敏 刘 学

目的 研究树突状细胞（DC）在声带息肉、喉黏膜白斑及声门型喉鳞癌组织中的表达差异。方法采用免疫组化方法检测20例声带息肉组织、47例喉黏膜白斑组织、45例声门型喉鳞癌组织及20例正常喉黏膜组织中S-100+DC及CD83+DC的浸润情况。结果声带息肉组、喉白斑组、声门型喉鳞癌组的S-100及CD83+DC数较正常喉黏膜组明显增多（P＜0.05）；声带息肉组S-100及CD83+DC数比喉白斑组明显增多，声带息肉组及喉白斑组S-100及CD83+DC数较声门型喉鳞癌组有所增加；在喉黏膜白斑组织中重度不典型增生组S-100及CD83+DC数明显高于轻、中度不典型增生组（P＜0.05）；高、中分化声门型喉鳞癌组S-100及CD83+DC数高于低分化组（P＜0.05）。结论声带息肉、喉黏膜白斑及声门型喉鳞癌均存在免疫活动异常，DC的变化在喉癌发生发展过程中发挥重要作用。

白斑，口腔；喉肿瘤；喉黏膜；癌，鳞状细胞；声门；树突细胞；S100蛋白质类；CD83

喉癌是主要的头颈部恶性肿瘤之一，喉白斑被认为是喉癌癌前病变，是喉癌不容忽视的阶段。树突状细胞（dendritic cell,DC）是功能最强大的专职抗原呈递细胞，在初次免疫应答的诱导方面具有独特地位[1]。DC与肿瘤的发生发展关系密切，其数量的减少及功能的障碍是肿瘤细胞逃逸机体免疫监视的一个重要原因。本研究利用免疫组化方法检测正常喉黏膜组织、声带息肉、喉白斑病及声门型喉鳞癌患者病变组织中S-100及CD83+DC的表达，通过分析DC在不同组织中的变化情况，探讨其在肿瘤发生发展过程中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 喉部病变标本132例均来源于2009年10月—2013年3月辽宁医学院附属第一医院手术切除标本，所有病例均经病理证实，声门型喉鳞癌患者术前均未接受放、化疗，其中正常喉黏膜组20例，男16例，女4例，平均年龄（56.10±6.86）岁。声带息肉组20例，男12例，女8例，平均年龄（42.10±7.82）岁。喉白斑组47例，男35例，女12例，平均年龄（50.45±9.44）岁，轻度不典型增生15例，中度不典型增生15例，重度不典型增生17例。声门型喉鳞癌组45例，男38例，女7例，平均年龄（60.91±8.56）岁。病理学分级高分化15例，中分化15例，低分化15例。所有标本用10％福尔马林固定后常规石蜡包埋，制成4 μm厚的切片。

1.2 方法

1.2.1 试剂 兔抗人S-100多克隆抗体及兔抗人CD83抗体均购自北京博奥森生物技术有限公司，免疫组化SP试剂盒购自北京中杉金桥。

1.2.2 免疫组化检测 所有标本组织S-100和CD83+DC的浸润情况采取免疫组化染色，操作步骤按试剂盒说明进行，其中PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.3 染色结果判定标准 胞质具有树突状突起，同时细胞质内或细胞核呈棕褐色颗粒着色，单纯看到细胞树突者不能进行计数，只有确定DC的细胞核者才进行计数。在正常喉黏膜组、声带息肉组和喉黏膜白斑组低倍镜下（×100）选取喉黏膜层，更换高倍镜（×400），计数随机10个镜下阳性细胞总数。声门型喉鳞癌组先在低倍镜下（×100）选取染色较好的区域，更换高倍镜（×400）计数10个镜下阳性细胞总数。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0软件完成统计分析。正态分布的计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，多重比较采用LSD-t检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 S-100及CD83+DC的阳性表达情况 S-100 及CD83+DC呈棕褐色，单核，胞体呈卵圆形或不规则形，部分细胞表面可见长短不等、粗细不一的突起，S-100及CD83+DC染色位于细胞质及细胞膜。在正常喉黏膜仅见少量DC散在于间质中。声带息肉中DC在上皮和间质均有分布，在喉黏膜白斑的黏膜层和黏膜下层间质中见DC细胞呈簇状或散在分布。声门型喉鳞癌组织中S100+DC分布于癌组织及癌组织与正常组织交界处，CD83+DC多分布于癌周组织内，癌组织中央分布极少见，图1～8。

2.2 在不同的喉黏膜病变中S-100及CD83+DC的数量 声带息肉组、喉白斑组及声门型鳞癌组中S-100及CD83+DC数高于正常喉黏膜组，声带息肉组S-100及CD83+DC数比喉白斑组明显增多，声带息肉组及喉白斑组S-100及CD83+DC数较声门型喉鳞癌组有所增加，见表1。

2.3 S-100及CD83+DC数在喉黏膜白斑组织不同病理分级中的比较 重度不典型增生组S-100及CD83+DC数明显高于轻、中度不典型增生组（P＜ 0.05），轻、中度不典型增生组相比，差异无统计学意义，见表2。

Tab.1 The number of S-100 and CD83+DC in each group表1 各组中的S-100及CD83+DC数量（±s）

Tab.1 The number of S-100 and CD83+DC in each group表1 各组中的S-100及CD83+DC数量（±s）

＊＊P＜0.01；a与正常喉黏膜组比较，b与声带息肉组比较，c与喉白斑组比较，P＜0.05

组别正常喉黏膜组声带息肉组喉白斑组声门型喉鳞癌组F n 20 20 47 45 S-100 8.35±2.21 70.85±14.99a23.49±9.51ab16.44±6.75abc206.262＊＊CD83 7.40±2.04 44.35±7.87a19.45±8.32ab13.38±5.64abc124.014＊＊

Tab.2 Relationships between expression of S-100 and CD83+and different pathological grading in Laryngeal leukoplakia表2 S-100及CD83+DC数与喉黏膜白斑组织不同病理分级的关系 （±s）

Tab.2 Relationships between expression of S-100 and CD83+and different pathological grading in Laryngeal leukoplakia表2 S-100及CD83+DC数与喉黏膜白斑组织不同病理分级的关系 （±s）

＊＊P＜0.01，a与重度不典型增生比较，P＜0.05，表3同

组别轻度不典型增生中度不典型增生重度不典型增生F n 15 15 17 S-100 15.93±3.28a19.33±6.11a33.82±5.89 52.478＊＊CD83 14.00±3.78a15.40±6.09a27.82±6.01 31.923＊＊

2.4 在声门型喉鳞癌不同分化程度中S-100及CD83+DC数的表达情况 高、中分化组S-100及CD83+DC数明显高于低分化组，差异有统计学意义，高、中分化组比较，差异无统计学意义，见表3。

Tab.3 The expression of S-100 and CD83+with relationship of different differentiation of glottic squamous cell carcinoma表3 S-100及CD83+DC数与声门型喉鳞癌不同分化程度的关系 （±s）

Tab.3 The expression of S-100 and CD83+with relationship of different differentiation of glottic squamous cell carcinoma表3 S-100及CD83+DC数与声门型喉鳞癌不同分化程度的关系 （±s）

＊＊P＜0.01，a与低分化比较，P＜0.05

组别高分化中分化低分化F n 15 15 15 S-100 20.93±5.02a19.33±4.47a9.06±3.01 34.407＊＊CD83 17.07±5.04a14.93±4.45a8.13±2.85 18.391＊＊

3 讨论

树突状细胞作为体内最重要的抗原呈递细胞，它的功能是提醒适应性免疫系统警惕潜在威胁，将外源或致病性的分子（称为抗原）呈递给效应细胞，使其对感染或肿瘤生长做出应答。本研究显示，正常喉黏膜中可见DC散在于间质中。与正常喉黏膜相比，声带息肉组织中有大量的DC浸润，可能是局部刺激产生炎症反应的结果。喉白斑组织中DC数量较正常增高，表明有炎症反应，也说明细胞免疫在其发病中占有重要地位。而喉黏膜白斑组DC数较声带息肉组减少，说明前者比后者的免疫功能减低，提示这是喉黏膜白斑易癌变的一个危险因素。其中轻、中度不典型增生组DC数较少，表明这些病变没有被免疫系统有效监视，使癌细胞未受到特异性细胞毒性T细胞的杀伤破坏，导致病变的恶化。随着不典型增生程度的增加，DC数量也增多。但是，当有较少的DC存在时，病变会从癌前状态更加迅速地过渡到癌阶段还是反之亦然，现仍难以解释[2]。病变从喉黏膜白斑发展到声门型喉鳞癌，DC数量减少，说明癌前病变的喉黏膜炎症等因素的持续刺激，使机体的免疫系统受到抑制，导致机体免疫逃逸的发生，导致癌变，因此喉黏膜白斑组织中免疫系统监视功能的减弱是从癌变前的阶段向恶性转变的重要原因之一。声门型喉鳞癌组织中DC数量减少，可能是由于肿瘤患者机体免疫应答能力减弱、肿瘤细胞本身对于周围微环境的干扰或破坏，抑制肿瘤内DC的聚集。在肿瘤微环境中，DC还可以诱导免疫系统攻击肿瘤细胞，抑制其生长，高、中分化组的声门型喉鳞癌组织中DC数明显高于低分化组，说明肿瘤组织中DC浸润程度高，容易激活机体产生有效地抗肿瘤免疫应答，因而预后较好。

S-100是目前最常用的检测DC的抗体。研究认为，S-100几乎在成熟和未成熟DC上都有表达[3]。而CD83不仅是成熟DC的主要特征性标志，还是DC发挥其激发免疫应答作用不可或缺的功能性分子[4]。本研究检测到声门型喉鳞癌组织中的CD83主要表达于癌周组织，癌巢内少有表达，根据S-100在癌组织内的表达情况，说明声门型喉鳞癌组织中的DC多处于未成熟阶段，而未成熟的DC抗原呈递功能不强，因此癌组织内的DC不能激活有效的免疫反应，使T细胞处于无能状态，免疫系统不能有效地清除癌细胞，使喉癌发生、发展、转移。有学者认为，DC数量与喉癌的分级之间存在一种间接关系，DC可作为诱导抗肿瘤免疫应答的一个重要组成部分，S-100+DC可作为喉癌预后良好的因素[2]。 Li等[5]研究证实S-100及CD83+DC浸润较多的喉癌患者预后好。Zhao等[6]报道食管癌癌前病变中的S-100+DC的浸润密度较大，认为这种免疫状态在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的调控作用。Sprinzl 等[7]对喉癌前病变的DC进行免疫组化研究，检测到轻、中度不典型增生中仅有少量的DC，而在重度不典型增生中DC浸润明显增多。

DC在声带息肉、喉黏膜白斑及声门型鳞癌中的数量变化，说明了三种病变中均有免疫活动的异常，喉黏膜白斑组织中DC数量及功能的异常，造成无效的免疫监视功能，是从癌前病变向恶性转变的重要线索。

Fig.1 The expression of S-100+DC inlaryngeal normal mucosa (SP,×400)图1 S-100+DC在正常喉黏膜的表达(SP,×400)

Fig.2 The expression of CD83+DC in laryngeal normal mucosa (SP,×400)图2 CD83+DC在正常喉黏膜的表达(SP,×400)

Fig.3 The expression of S-100+DC in Vocal cord polyp(SP,×400)图3 S-100+DC在声带息肉中的表达(SP,×400)

Fig.4 The expression of CD83+DC in Vocal cord polyp(SP,×400)图4 CD83+DC在声带息肉中的表达(SP,×400)

Fig.5 The expression of S-100+DC in laryngeal leukoplakia (SP,×400)图5 S-100+DC在喉黏膜白斑的表达(SP,×400)

Fig.6 The expression of CD83+DC in laryngeal leukoplakia (SP,×400)图6 CD83+DC在喉黏膜白斑的表达(SP,×400)

Fig.7 The expression of S-100+DC in glottic squamous cell carcinoma(SP,×400)图7 S-100+DC在声门型喉鳞癌的表达(SP,×400)

Fig.8 The expression of CD83+DC in glottic squamous cell carcinoma(SP,×400)图8 CD83+DC在声门型喉鳞癌的表达(SP,×400)

[1]Frankenberger B，Schendel DJ.Third generation dendritic cell vaccines for tumor immunotherapy[J].Eur J Cell Biol，2012，91(1):53-58．doi：10.1016∕j.ejcb.2011.01.012.

[2]Doroş C,Balica N,Cîmpean AM.Dendritic cells:friends or foes of laryngeal cancer[J]?Rom J Morphol Embryol,2013,54(1):131-135.

[3]Xu WC,Li ZB,Chen YR.Expression and distribution of S-100, CD83,and costimulatory molecules(CD80 and CD86)in tissues of thyroid papillary carcinoma[J].Cancer Invest,2011,29(4):286-292. doi:10.3109∕07357907.2011.568561.

[4]Klatka J1,Grywalska E,Klatka M,et al.Expression of selected regulatory molecules on the CD83+monocyte-derived dendritic cells generated frompatients with laryngeal cancer and their clinical significance[J].Eur Arch Otorhinolaryngol,2012,270(10):2683-2693. doi:10.1007∕s00405-013-2510-4

[5]Li X,Takahashi Y,Sakamoto K,et al.Expression of dendritic cell phenotypic antigens in cervical lymph nodes of patients with hypopharyngeal and laryngeal carcinoma[J].J Laryngol Otol,2009,123 (Suppl S31):5-10.

[6]Zhao CF，Zhang W，Tian WH，et al.immunohistochemical study of p53,PCNA expression and S-100+dendritic cells infiltration in esophageal cancer of xinjiang[J].Chinese Journal of Clinical and Experimental Patholog,1999,15(5):467.[赵春芳,张巍,田卫华,等.新疆食管癌P53-PCNA表达及S100+树突状细胞浸润的免疫组化研究[J].临床与实验病理学杂志,1999,15(5):467.]

[7]Sprinzl GM,Hussl B,Obrist P,et al.Dendritic cells in precancerous lesions of the larynx[J].Laryngoscope,2000,110(1):13-18.

（2014-02-13收稿 2014-05-14修回）

（本文编辑 魏杰）

Significance of S-100 and CD83+DC Expression in Laryngeal Mucosa Lesions

JIN Dan，WANG Xuefeng△，WANG Weiyi，ZHANG Min，LIU Xue
Department of Otolaryngology,the First Affiliated Hospital of Liaoning Medical University,Jinzhou 121000,China△

E-mail:jzswwang@126.com

ObjectiveTo investigate the infiltration of dendritic cell(DC)in Vocal cord polyp,laryngeal leukoplakia and glottic squamous cell carcinoma，and to observe laryngeal mucosal lesions of the state of the immune microenvironment,and to research significance of DC on the development of glottic squamous cell carcinoma.MethodsThe infiltration of S-100+and CD83+DC in 20 cases of Vocal cord polyp,47 cases of laryngeal leukoplakia,45 cases of glottic squamous cell carcinoma tumor and 20 cases of laryngeal normal mucosa were examined using immunohistochemistry.ResultsThe number of S-100+and CD83+DC were significantly higher in glottic squamous cell carcinoma,laryngeal leukoplakia and vocal cord polyp than that in laryngeal normal mucosa(P＜0.05).The number of S-100+and CD83+DC were higher in laryngeal leukoplakia than that in glottic squamous cell carcinoma(P＜0.05).The number of S-100+and CD83+DC in mild dysplasia and moderate dysplasia were less than that in severe atypical hyperplasia(P＜0.01).In glottic squamous cell carcinoma,S-100+and CD83+DC with poor-differentiated was significantly less than that with well-differentiated(P＜0.01).Conclusion Changes in the number of dendritic cell was found in vocal cord polyp,laryngeal leukoplakia and glottic squamous cell carcinoma,which indicated that there were an abnormal immune status.Changing of dendritic cell in laryngeal mucosa plays an important role in laryngeal cancer development.

leukoplakia,oral;laryngeal neoplasms;laryngeal mucosa;carcinoma,squamous cell;glottis;dendritic cells;S100 protein;CD83

R739.65

A

10.3969∕j.issn.0253-9896.2014.10.010

辽宁省科学技术计划项目（2012225019）

锦州，辽宁医学院附属第一医院耳鼻咽喉科（邮编121000）

△通讯作者 E-mail：jzswwang@126.com