mfn2和nm23在不同膀胱组织中的表达

白 云 熊艳杰 姜广建

临床研究

mfn2和nm23在不同膀胱组织中的表达

白 云1熊艳杰2姜广建3△

目的 探讨线粒体融合蛋白-2(mfn2)和肿瘤转移抑制基因（nm23）在膀胱癌组织中的表达及与临床病理特征间的关系。方法选取65例膀胱癌标本，其中男50例，女15例。TNM分期：Ⅰ期47例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例、Ⅳ3例，另择正常膀胱组织、良性膀胱肿瘤标本各15例作为对照。应用免疫组化SP法检测mfn2和nm23的表达情况，并分析其在膀胱癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系。结果膀胱癌组织中mfn2的阳性表达率均高于正常和良性膀胱组织，nm23的阳性表达率均低于正常和良性膀胱组织（均P＜0.05）。膀胱癌组织中mfn2的表达在不同分化程度、TNM分期间的差异有统计学意义，在不同年龄、性别、淋巴结转移情况和临床分期间的差异无统计学意义。nm23在不同TNM分期、淋巴结转移情况和临床分期间的差异有统计学意义，在不同年龄、性别和分化程度间的差异无统计学意义。结论mfn2在膀胱癌中高表达，mfn2与膀胱癌的发生、发展密切相关；nm23在膀胱癌中低表达，可作为预测膀胱癌转移及其预后的参考指标。

膀胱肿瘤；免疫组织化学；mfn2；nm23

线粒体融合蛋白-2(mfn2)，也称为增殖抑制基因(HSG)，由陈光慧教授发现[1]，其位于线粒体外膜，与线粒体的融合功能有关，其介导的增殖抑制作用可能是通过线粒体凋亡途径来实现的。目前，国内外对此基因在多种癌症中的表达及作用有了较为深入的研究，但其与膀胱癌的相关研究报道尚属少见。肿瘤转移抑制基因（nm23）是从K-1735鼠黑色素瘤细胞株中用消减杂交法分离出来的，是与肿瘤转移抑制有关的基因，其表达水平与肿瘤侵袭和淋巴结转移有关，在膀胱癌中的表达已有相关研究，但其与临床病理特征间的关系报道不一。本研究采用免疫组化法检测mfn2和nm23在膀胱癌组织中的表达情况，并分析其表达与临床病理特征间的关系，探讨其在膀胱癌发生发展过程中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年5月—2013年8月于河北联合大学附属医院行手术治疗的膀胱癌患者65例，其中男50例，女15例，年龄35～75岁，平均（57.7±8.2）岁；术前均未经任何化疗、放疗及抗肿瘤药物治疗。取其手术切除的膀胱癌标本，临床病理分期按照TNM分期标准进行：Ⅰ期47例、Ⅱ期10例、Ⅲ期5例、Ⅳ3例。另选取正常膀胱组织、良性膀胱肿瘤各15例作为对照。

1.2 主要试剂 兔抗人mfn2单克隆抗体（美国Santa Cruz公司），鼠抗人nm23单克隆抗体（美国Zymed公司），SP-9001免疫组化染色试剂盒、DAB及枸橼酸盐（北京中杉金桥生物技术有限公司），OLYMPUS光学显微镜（奥林巴斯光学工业株式会社）。

1.3 方法 采用免疫组化SP法，操作按照试剂盒说明书进行。切片常规脱蜡至水进行高压抗原修复，抗原封闭，每张切片滴加兔抗人mfn2单克隆抗体（1∶200）和鼠抗人nm23单克隆抗体（即用型试剂），4℃过夜，次日加生物素标记的羊抗鼠∕兔二抗工作液，PBS冲洗3次后，加辣根酶标记链霉卵白素工作液，PBS冲洗后，DAB显色，苏木素复染，脱水封固。用PBS代替一抗做阴性对照。

1.4 结果判定 以细胞浆或细胞核呈现黄色至棕黄色判为阳性细胞。染色强度分为：未染色0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞所占百分比：0～5％为0分，6％～25％为1分，26％～50％为2分，＞50％为3分。两者相加之和为结果评定：0～2分判断为阴性，3～6分判断为阳性。

1.5 统计学方法 应用SAS 8.2软件进行统计学处理，计量资料用均数±标准差（±s）表示，多组间比较采用方差分析，组间多重比较采用LSD-t检验；计数资料以例（％）表示，多组间比较采用卡方检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 mfn2和nm23在不同膀胱组织中的表达 mfn2阳性反应主要位于细胞浆，呈棕黄色颗粒，见图1A；mfn2在良性膀胱肿瘤和正常膀胱组织中的阳性表达率均低于膀胱癌组织（均P＜0.05），见表1。nm23的阳性染色主要在细胞质内，细胞核表达量少，见图1B；nm23在良性膀胱肿瘤和正常膀胱组织中的阳性表达率均高于膀胱癌组织（均P＜0.05），见表1。

2.2 mfn2和nm23在膀胱癌组织中的表达与临床病理特征之间的关系 mfn2的表达在不同分化程度、TNM分期间的差异有统计学意义，在不同年龄、性别、淋巴结转移情况和临床分期间的差异无统计学意义。nm23在不同TNM分期、淋巴结转移情况和临床分期间的差异有统计学意义，在不同年龄、性别和分化程度间的差异无统计学意义，见表2。

Fig.1 Expression of HSG∕mfn2 and nm23 in bladder cancer（IHC,×400）图1 mfn2和nm23在膀胱癌中的表达（免疫组化，×400）

Tab.1 HSG/mfn2 and nm23 positive expression rates in bladder cancer group,benign bladder tumor group and normal bladder tissue group表1 mfn2和nm23在不同膀胱组织中的表达例（％）

3 讨论

3.1 mfn2在膀胱癌组织中的的表达意义 mfn2是位于线粒体外膜的一种ATP反应酶，它参与内质网应激反应，并参与线粒体融合。笔者前期研究发现mfn2在卵巢癌中高表达，丁焕然等[2]研究发现mfn2在肺癌中的表达也较高。然而也有研究显示，mfn2在乳腺癌[3]、结直肠癌[4]、胃癌[5]等组织中的表达量明显低于正常组织和良性组织。本研究结果显示，mfn2在膀胱癌中的表达明显高于良性膀胱肿瘤和正常膀胱组织，可能是由于线粒体过表达需要消耗能量较高的细胞，推测该基因在膀胱癌中的表达量高与促进线粒体融合有关。本研究还发现mfn2的表达与肿瘤分化程度有关，分化程度低mfn2的阳性表达比例也较小，提示mfn2具有细胞周期阻滞效应，诱导膀胱癌细胞系凋亡[6]。笔者推测mfn2在膀胱癌组织中高表达也可能与线粒体功能及诱导细胞凋亡相关。但mfn2基因在癌症中的作用还需进一步深入研究。

3.2 nm23在膀胱癌组织中的的表达意义 nm23是肿瘤转移抑制基因，其作用可能与其蛋白产物核苷二磷酸激酶有关，此酶通过影响细胞骨架蛋白的生物活性调节细胞运动，并通过G蛋白的信号传递发挥负向调节作用，从而抑制癌细胞转移[7]。本研究结果显示，nm23在不同TNM分期、淋巴结转移情况和临床分期间的差异有统计学意义，膀胱癌组织中nm23的阳性表达比例随着TNM分期和临床分期的增加而降低，提示TNM分期和临床分期与nm23的阳性表达呈负相关，nm23可能参与了膀胱癌组织的分化、侵润与转移，且淋巴结转移率明显低于阴性者。高放[8]、顾勇[9]等的研究结果与本研究基本一致，提示nm23在膀胱癌的生物学演变过程中，对癌细胞的转移起着一定的调节作用，可作为预测膀胱癌预后的指标[10]。

Tab.2 The relationship between the expression of HSG/mfn2,nm23 and the clinical pathology parameter of bladder cancer表2 mfn2、nm23在膀胱癌中的表达与临床病理特征之间的关系 例（％）

[1]Chen KH，Guo X，Ma D，et al．Dysregulation of HSG triggers vascula Fproliferative disorders[J].Nat Cell Biol，2004，6(9)：872-883.

[2]Ding HR,Jiang GJ,Ma XB,et al.Expression of HSG,p21WAF1 and PCNA and their significance in lung cancer[J].Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology，2009,25（2）：147-150.[丁焕然，姜广建，马小兵，等.肺癌组织中HSG、P21和PCNA的表达及意义[J].临床与实验病理学杂志，2009,25（2）：147-150.]

[3]Zhang JH，Wang BX，Wang P，et al.Expressions of HSG and EGFR in breast cancer and their relationship with clinicopathological features[J].The Practical Journal of Cancer,2013,28（1）:25-27.[张景华，王保信，汪萍，等.乳腺癌组织中HSG和EGFR的表达及其与临床病理特征的关系[J].实用癌症杂志,2013,28（1）:25-27.]

[4]Ai JZ,Jiang GJ,Li YH.Expression and significance of Human Hyperplasic Suppress Gene(HSG)in Colorectal Malignant Adenoma[J]. Cancer Research on Prevention and Treatment,2007,34 （10）：762-763.[艾建中,姜广建,李玉红.增殖抑制基因在结直肠癌中的表达及其意义[J].肿瘤防治研究,2007,34（10）：762-763.]

[5]Li J，Hao XH，Li H.Expression and significance of HSG and VEGF in gastric carcinoma[J].Journal of Xipan Jiaotong University(Medical Sciences),2011,32（2）：208-214.[李娟，郝晓慧，李欢.增殖抑制基因和血管内皮生长因子在胃癌中的表达及其意义[J].西安交通大学学报（医学版）,2011,32（2）：208-214.]

[6]Jin B，Fu G，Pan H，et al.Anti-tumour efficacy of mitofusin-2 in urinary bladder carcinoma[J].Int J Mol Sci Jul，2013，14(7)：13005-13021.

[7]Xie CH，Yang JP，Liu Z,et al.Expression correlation of Ki67, VEGF and nm23 genes in breast cancer and their clinical significance[J].Chinese Journal of Surgical Oncology，2011,3（6）：325-328.[谢春华，杨基鹏，刘峥，等.Ki67、VEGF m23在乳腺癌组织中的表达的相关性及临床意义[J].中国肿瘤外科杂志,2011,3 （6）：325-328.]

[8]Gao F，He JH，Zhang FM，et al.The relationship of the expression of nm23,COX-2 and MMP-9 with the invasion and metastasis of bladder carcimoma[J].China Foreign Medical Treatment，2012,31 （13）：26-28.[高放，何静华，张凤梅，等.nm23、COX-2与MMP-9与膀胱癌中的表达及其与肿瘤浸润和转移的关系[J].中外医疗,2012,31（13）：26-28.]

[9]Gu Y.Expression of C-erbB-2，EGFR and nm23-H1 in human bladder cancer and its clinical significance[J].Proceeding of Clinical Medicine，2011,20（5）：333-336.[顾勇.C-erbB-2和EGFR 及nm23-H1在膀胱癌中的表达及临床意义[J].临床医药实践, 2011,20（5）：333-336.]

[10]Li SS，Zhang FM，Xu H，et al.Expression and significance of nm23 and E-Cad in uroepithelium carcinoma of bladder[J].China Modern Medicine，2011,18（34）：12-14.[李胜水，张凤梅，许华，等. nm23与E-Cad蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及其意义[J].中国当代医药,2011,18（34）：12-14.]

（2013-11-07收稿 2014-05-29修回）

（本文编辑 陈丽洁）

Expression of Mitofusin-2(mfn2)and nm23 in Different Bladder Tissues

BAI Yun1，XIONG Yanjie2，JIANG Guangjian3△
1 College of Life Science，Hebei Union University，Tangshan 063000，China;2 Department of Pathology，Affiliated Hospital of Hebei Union University；3 Beijing University of Chinese Medicine△

E-mail:guangjianjiang@sina.com

ObjectiveTo research the expression of mitofusin-2(mfn2)and tumor metastasis suppressor genes （nm23）in bladder cancer cells and its correlation with clinical pathological feature．MethodsImmunohistochemistry was used to measure the expression of mfn2 and nm23．Sixty-five cases of bladder cancer were sampled，which include fifty cases of male and fifteen cases of female.TNM stage：Forty-seven cases were in stage I;Ten cases were in stage II;Five cases were in stageⅢ;Three cases were in stageⅣ.Other fifteen cases were sampled from normal bladder or benign tumor of bladder as control.All cases were collected from department of pathology，affiliated Hospital of hebei union university.ResultsThe positive expression rate of mfn2 in bladder cancer tissues was significantly higher than those in normal bladder tissues and benign tumor of bladder（χ2=32.528，P＜0.05）；The positive expression rate of nm23 in bladder cancer tissues was significantly lower than those in normal bladder tissues and benign tumor of bladder(χ2=19.719，P＜0.05)；the high expression level of mfn2 in bladder cancer was associated with tumor differentiation and TNM stage（P＜0.05），but not correlated with age，sex，lymph node metastasis and clinical grade.The low level of nm23 was associated with TNM stage，clinical grade and LN metastasis.ConclusionThe positive expression rate of mfn2 was increased in bladder cancer.It indicated that there was a close relationship between mfn2 and the occurrence and development of bladder cancer；The expression rate of nm23 was decreased in bladder cancer，it may be a predictor for metastasis and prognosis of bladder cancer.

urinary bladder neoplasms;immunohistochemistry;mfn2;nm23

R737.15

A

10.3969∕j.issn.0253-9896.2014.10.009

国家自然科学基金资助项目（30770247）；河北省科技厅课题（13277714D）

1河北联合大学生命科学学院（邮编063000）；2河北联合大学附属医院病理科；3北京中医药大学

△通讯作者 E-mail：guangjianjiang@sina.com