心肺复苏不同预后患者NF-κB、血清细胞因子动态变化及意义

陈媛媛，饶小平，李群，吴卫萍

（江西省儿童医院PICU，江西南昌 330006）

·论著·

心肺复苏不同预后患者NF-κB、血清细胞因子动态变化及意义

陈媛媛，饶小平，李群，吴卫萍

（江西省儿童医院PICU，江西南昌 330006）

目的探讨心肺复苏(CPR)不同预后患者NF-κB、血清细胞因子动态变化及意义。方法将25例CPR后自主循环恢复患者分为复苏失败组(A组)15例和存活出院组(B组)10例。于心肺复苏后24 h、48 h、72 h留取静脉血，分离出单核细胞，采用免疫荧光抗体染色、流式细胞仪检测NF-κB激活的单核细胞百分率，用ELISA法检制血清TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8的水平变化。结果CPR后24 h时，A、B两组NF-κB表达水平差异有统计学意义(P＜0.05)；CPR后48 h时，A组NF-κB表达水平进一步上升，而B组下降，两组NF-κB水平差异有统计学意义(P＜0.05)；CPR后72 h时，A组NF-κB呈小幅上升，B组继续下降，两组差异进一步增大(P＜0.05)。CPR后24 h时A组TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8水平高于B组(均P＜0.05)，CPR后48 h时A组TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8水平达峰值，高于B组(均P＜0.05)。CPR后72 h时两组TNF-α水平下降，差异无统计学意义，而A组IL-l、IL-6、IL-8水平虽下降，但高于B组(均P＜0.05)。结论细胞因子异常释放参与复苏后缺血一再灌注损伤病理过程，NF-κB是调控细胞因子释放的关键，其活性增强导致细胞因子的大量甚至瀑布样释放，引起复苏后MODS的发生，导致死亡。

心肺复苏；NF-κB；细胞因子

心脏骤停是儿科临床最紧急的危重症，心肺复苏(CPR)成功率虽不断提高，但患儿经过CPR后内脏器官继发缺血再灌注损伤，发生较高的复苏后多器官功能障碍综合征(MODS)，导致死亡率仍高。缺血再灌注损伤中，炎症损伤贯穿于全过程，肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、IL-1、IL-6、IL-8等炎症细胞因子的基因启动子上均存在NF-κB的结合位点，缺血再灌注时NF-κB的激活能调节炎症细胞因子的表达[1-2]。本研究检测心肺复苏后患儿的NF-κB及细胞因子水平，探讨NF-κB、细胞因子对心肺复苏患儿病情和预后的预测作用，为下一步寻找干预措施控制NF-κB引起的炎症反应，改善心肺复苏后存活率。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2012年8月至2013年6月PICU病房收治的心跳呼吸骤停经心肺复苏后建立自主循环，并生存＞72 h的25例患者。男性14例，女性11例。＜1岁7例，1～3岁16例，＞3岁2例。原发病因：窒息5例，溺水10例，中毒5例，支气管异物3例，严重低血糖2例。

1.2 分组将心肺复苏成功后25例患者分为复苏失败组(A组)：心肺复苏成功后经抢救治疗最终仍死亡患者，共15例，男性10例，女性5例；＜1岁4例，1～3岁10例，＞3岁1例。存活出院组(B组)：心肺复苏成功后最终存活出院患者，共10例，男性4例，女性6例；＜1岁3例，1～3岁6例，＞3岁1例。

1.3 纳入标准研究对象应符合心脏骤停诊断标准：意识丧失，颈、股动脉搏动消失，呼吸断续或停止，皮肤苍白或明显发绀，即刻或短时间内心电图呈现以下三类表现(心搏停顿；无脉性电活动；心室颤动或无脉性室性心动过速)。入选病例排除因恶性肿瘤、慢性疾病所致呼吸、心跳停止和发病前1周内伴有各种感染、休克、严重创伤者。

1.4 研究方法发生心脏骤停时均按以下程序进行复苏：胸外心脏按压，频率100～120次/min，深度3～4 cm，同时连接呼吸机，应用复苏药物，1/10 000肾上腺素(0.01 mg/kg)静推，如无效每隔5 min重复1次，以恢复自主心律及收缩压≥90 mmHg(1 mmHg= 0.133 kPa)。于CPR后24 h、48 h、72 h分别抽取外周静脉血8 ml，5 ml立即加入肝素钠抗凝管(10 ml容量，含500 U/ml肝素钠0.1 m1)内，然后迅速将血液和抗凝剂轻轻的颠倒混匀，避免用力震荡而破坏血细胞。分离外周血单个核细胞。免疫荧光抗体染色、流式细胞仪检测N-κB激活的单核细胞百分率，另3 ml静脉血经高速离心后分离血清，置-20℃冰箱待检。TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8检测采用EllSA法测定，试剂盒采用试剂由上海华美生物工程有限公司提供。操作由专人严格按试剂盒说明进行。比较各组患者不同时间点NF-κB、血清TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8炎症细胞因子动态变化差异。

2 结果

2.1 各时间点两组间NF-κB的比较CPR后24 h时A、B两组NF-κB表达水平差异有统计学意义(P＜0.05)；CPR后48 h时，A组进一步上升而B组下降，两组NF-κB水平差异有统计学意义(P＜0.05)；CPR 72 h时，A组NF-κB呈小幅上升，B组继续下降，两组差异进一步增大，见表1。

表1 两组各时间点静脉血单核细胞中NF-κB水平的比较(±s，%)

表1 两组各时间点静脉血单核细胞中NF-κB水平的比较(±s，%)

组别A组(n=15) B组(n=10) t值P值24 h 24.73±7.03 18.4±2.59 2.69＜0.05 48 h 50.67±11.41 13.5±1.84 10.05＜0.05 72 h 57.7±13.27 7.6±1.58 11.68＜0.05

2.2 各时间点两组间TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8的比较CPR后24 h时TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8水平高于B组(均P＜0.05)，CPR后48 h时TNF-α、IL-l、IL-6、IL-8水平达峰值，高于B组(均P＜0.05)。CPR后72 h时两组TNF-α水平下降，差异无统计学意义，而A组IL-l、IL-6、IL-8水平虽下降但高于B组(均P＜0.05)，见表2。

表2 两组各时间点血清细胞因子水平的比较(±s，pg/ml)

表2 两组各时间点血清细胞因子水平的比较(±s，pg/ml)

时间24 h组别A组(n=15) B组(n=10) t值P值48 h A组(n=15) B组(n=10) t值P值72 h A组(n=15) B组(n=10) t值P值TNF-α 111.6±7.07 53.6±8.26 18.61＜0.05 166.53±13.94 87.9±9.49 15.39＜0.05 64.87±11.41 60.6±12.35 0.87＞0.05 IL-1 56.8±11.04 30.9±10.82 5.74＜0.05 90.4±10.55 51±10.38 9.11＜0.05 43.47±10.36 26.5±7.33 4.43＜0.05 IL-6 76±20.31 54.3±6.29 8.34＜0.05 149.13±16.02 90.8±11.73 9.76＜0.05 86.07±12.81 37.1±8.4 10.52＜0.05 IL-8 128±14.44 90.4±8.58 7.60＜0.05 471±52.6 153.2±14.57 18.33＜0.05 298.2±48 65±6.34 15.01＜0.05

3 讨论

CPR后48 h时复苏失败组促炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8达峰值，且高于存活出院组，提示异常释放过多的促炎性细胞因子，使致病细胞因子处于优势，其结果就是朝着全身炎症反应综合征(SIRS)方向恶化发展。临床中可以通过监测患儿心肺复苏后早期促炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的水平及拮抗和干预促炎性细胞因子治疗，从而减轻和逆转复苏后SIRS的发生、发展，进一步降低复苏后死亡率。

在复苏失败组CPR24 h时NF-κB呈快速上升趋势，直至72 h时仍表现出小幅上升趋势，而存活出院组NF-κB于CPR24 h即达峰值，之后逐渐下降，两组NF-κB水平差异进一步增大。NF-κB的异常增高，预示着CPR患者的病情恶化，应引起医护人员的足够重视。作为一个多功能核转录因子，NF-κB具有非常广泛的生物学特性[3]，激活后可促进多种炎性细胞因子的转录，致使炎症反应放大与延续(即级联瀑布效应)。静息状态时NF-κB滞留在胞浆中呈非活性状态，CPR后NF-κB被激活，使其亚基向核内迁移的特性得以恢复，进入细胞核内后与κB敏感基因增强子区的κB序列结合，影响一系列基因的表达[4-5]。因此触发炎性因子表达的“瀑布样效应”，各类炎性细胞因子大量表达，反过来又刺激了NF-κB的激活，从而使NF-κB激活的正反馈机制占据主导地位，若这种诱因未得到及时纠正，则CPR患者的病情加重，死亡率增加。而存活出院组循环动力学逐渐恢复正常，消除NF-ΚB激活的诱因，从而使NF-κB激活的负反馈机制占据主导地位，故患者渐趋康复[6]。

本研究结论建议临床检测血清中炎症细胞因子、NF-κB的动态变化，以利于掌握心肺复苏MODS的进展情况和机体反应。NF-κB大量激活，可能预示着CPR患者的病情恶化，应引起医护人员的足够重视。恰当使用NF-κB抑制剂，干预这种NF-κB的恶性激活，阻止炎性介质的恶性表达和释放，可能对防止心脏骤停患者CPR后的病情进一步恶化，为预防SIRS、 MODS、复苏后综合征及免疫调节功能紊乱的发生提供新的治疗途径，从而提高CPR患者的复苏成功率。

[1]李桂花.核转录因子NF-κB与危重症的关系[J].现代医药卫生, 2009,25(2):235-237.

[2]Grigoryev DN,Finigan JH,Hassoun P,et al.Science review:searching for gene candidate in acute lung injury[J].Crit Care,2004,8 (6):440.

[3]Xiao W.Advances in NF-kappa B signaling transduction and transcription cell[J].Mol Immunol,2004,1(6):425.

[4]王聪敏,孟新科.救逆通瘀对心肺复苏后患者脑保护作用的研究[J].实用心脑肺血管病杂志,2010,18(6):702-703.

[5]何建卓,张敏州,郭立恒,等.加味黄连解毒汤对多器官功能障碍综合征大鼠核转录因子-κB通路的影响[J].中国中西医结合急救杂志,2011,18(5):303-306.

[6]张弋,陈晓逃,江慧琳,等.炎症因子和氧自由基与心肺复苏后再灌注损伤关系探讨[J].现代医院,2005,5(9):13-14.

Dynamic changes and significance of NF-κ B and serum cytokines in patients with different prognosis of cardiopulmonary resuscitation.

CHEN Yuan-yuan,RAO Xiao-ping,LI Qun,WU Wei-ping.Pediatric Intensive Care Unit(PICU),Children's Hospital of Jiangxi Province,Nanchang 330006,Jiangxi,CHINA

ObjectiveTo investigate the dynamic changes and significance of serum cytokines and NF-κ B in patients with different prognosis of cardiopulmonary resuscitation(CPR).MethodsTwenty-five CPR patients with return of spontaneous circulation were divided into resuscitation failure group(group A,n=15)and survival group(group B,n=10).24 h,48 h,72 h after cardiopulmonary resuscitation,the venous blood was taken and the monocytes were isolated.The mononuclear cells percentage of NF-κB activation was detected by flow cytometry staining with immunofluorescent antibody,and ELISA was used to check the changes of the serum cytokines,TNF-α,IL-1, IL-6,IL-8.Results24 h after CPR,there was significant difference in NF-κ B expression level between group A and group B(P＜0.05).48 h after CPR,NF-κB expression level increased in group A and decreased in group B,with significant difference between the two groups(P＜0.05).72 h after CPR,NF-κB level in group A showed a slight rise, and the NF-κB level in group B continued to decline,showing increased difference between the two groups(P＜0.05). 24 h after CPR,TNF-α,IL-1,IL-6,IL-8 levels of group A were significantly higher than those of group B(P＜0.05). 48 h after CPR,TNF-α,IL-1,IL-6,IL-8 levels in group A reached the peak,higher than those of group B(P＜0.05). 72 h after CPR,TNF-α levels of the two groups decreased,with no statistically significant difference between the two groups.Though IL-1,IL-6,IL-8 levels of group A decreased,but still higher than those of group B(P＜0.05).ConclusionThe abnormal release of cytokines participate in the pathological process of ischemia reperfusion injury after resuscitation,NF-κB is key to the regulation of cytokines release which leads to the increase of the activity of cytokines and waterfall release,causes MODS after resuscitation,andResultsin death.

Cardiopulmonary resuscitation;NF-κB;Cytokines

R605.97

A

1003—6350（2014）03—0364—03

2013-07-17)

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.03.0140

江西省卫生厅普通科技计划项目（编号：20133147）

陈媛媛。E-mail：xyuan98@163.com