肝恶性肿瘤射频消融术后患者细胞免疫功能观察

闫景彬闫秀梅陈 斌孙宏伟

1浙江省温州市中西医结合医院超声科 温州 325000 2温州医学院附属第二医院儿科

3温州医学院附属第一医院

肝恶性肿瘤射频消融术后患者细胞免疫功能观察

闫景彬1闫秀梅2陈 斌3孙宏伟3

1浙江省温州市中西医结合医院超声科 温州 325000 2温州医学院附属第二医院儿科

3温州医学院附属第一医院

肝恶性肿瘤；射频消融；细胞免疫；超声

肝癌是严重威胁人类健康的最常见的恶性肿瘤之一，当前对肝癌临床治疗的研究已从单纯物理、化学抗肿瘤研究提升到注重机体免疫机能状态改变的综合抗肿瘤机制方面的研究。射频消融术（radiofrequency ablation，RFA）治疗肝癌在抗肿瘤治疗领域内占有越来越重要的地位。研究表明[1]，射频消融术能有效减缓肿瘤生长，改善患者局部或全身的免疫功能。T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一大细胞群[2]，对患者的预后有重要的意义。

1 资料与方法

1.1临床资料 2012年1月—2013年5月，选取我院RFA治疗肝癌患者25例，男19例，女6例；年龄37～75岁，中位年龄48岁。患者均经影像学检查、血清肿瘤标志物和经肝穿刺活检确诊。其中原发性肝癌17例，转移性肝癌8例；单发病灶19例，2个5例，3个1例，共计32个；病灶直径＜3cm27处，3～5cm 5处；其中AFP升高的原发性肝癌患者15例；肝功能Child分级：A级21例，B级4例。入选条件：患者一般情况尚可，均无明显心脏、肺、肾等主要脏器损伤，所有病例未经放疗或化疗，治疗期间未使用影响免疫功能的药物。患者自愿接受RFA治疗，并保证在接受射频消融术治疗后30天内不接受其它方式的治疗，术前签署知情同意书。排除门静脉内有癌栓，或肝内肿瘤总数超过4个，或凝血功能有严重障碍者。同时选择25名健康献血者作为对照组，男20名，女5名，年龄22～55岁，中位年龄41岁。两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2仪 器 德国西门子公司Acuson Sequoia 512超声诊断仪，探头频率2～10MHz；配备探头穿刺架。epics-xl流式细胞仪（美国COULTER公司）；抗CD3—FITC/CD8-PE，抗CD3—FITC/CD4-PE（法国IM公司）。美国RITA公司RITA1500型射频治疗仪。

1.3射频消融步骤 完善术前准备，治疗前应用彩色多普勒超声观察肿瘤及周边脏器关系，术前建立静脉通路，肌注度冷丁、安定，并且确定穿刺部位。消毒、铺巾，用无菌袖套包扎穿刺探头及连接线，寻找最合适的进针线路，超声引导下取三份不同位置的肿瘤组织，送病理检查。操作方法：14G套管针经皮穿刺到肿瘤内并明确针尖位置，消融范围≥R+1.5cm（R为肿块直径），放置入射频针。选择时间12～20min，功率60～80W，对直径＜5cm的靶肿瘤，要求使其微波治疗的靶肿瘤全部被强回声掩盖，＞3～5cm的肿瘤重点对靶肿瘤及其周边血管处行微波硬化处理。术后碳化针道，拔针，并观察引导套管内是否有胆汁或血液溢出现象，如有则填塞明胶海绵。

1.4外周血CD3+CD4+、CD8+、NK检测 25例患者分别于RFA前1天，RFA后10、20、30天抽取外周静脉血5mL，肝素钠抗凝，送检CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表达水平。并与25名体检志愿者的外周血液T细胞亚群检测结果进行比较。

1.5统计学方法 应用SPSS11.0统计软件，数据以均数±标准差（） 表示，各指标处理前、后的结果比较采用配对t检验，两组比较采用成组t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1临床疗效 25例经过RFA后无死亡病例，无射频消融相关手术并发症，均于术后1个月内完成随访并且完成检查。11例治疗后肿瘤直径缩小＞1/2，其余患者治疗前后肿瘤大小无明显改变；彩色多普勒超声检查发现，17例肿瘤区域血流消失，8例血流阻力指数较治疗前有不同程度下降。术后增强MR、CT造影显示治疗病灶内未见明显动脉期增强。

7例术前AFP指标正常者，术后未见明显变化。另18例术后AFP指标均较术前明显下降，其中7例完全降至正常范围。

2.2外周血T淋巴细胞亚群比较 对照组与射频组术前比较，CD3+、NK细胞差异无统计学意义；射频组术前CD4+及CD4+/CD8+比值明显低于对照组，CD8+水平明显高于对照组，差异有统计学性意义（P＜0.01）。RFA术后第10天、第20天及第30天CD4+细胞及CD4+/CD8+比值均比术前增高（P＜0.05），CD8+细胞降低（P＜0.05）。术后第30天时NK细胞水平明显高于术前（P＜0.05）。术后血CD3+细胞与术前比较无明显变化。见表1。

表1 对照组与射频组术前、术后T淋巴细胞亚群检测结果（） %

表1 对照组与射频组术前、术后T淋巴细胞亚群检测结果（） %

注：与对照组比较，*P＜0.01；与术前比较，△P＜0.05

组别对照组射频组术前1天术后10天术后20天术后30天n/例25 25 25 25 25 CD3+ 69.98±7.94 65.98±11.13 67.21±11.75 69.01±11.43 68.37±12.98 CD4+ 42.86±8.57 28.98±10.11* 37.89±9.34△36.47±10.43△37.21±10.04△CD8+ 21.98±5.87 31.54±13.26* 25.24±9.20△24.52±9.89△23.94±9.76△CD4+/CD8+ 2.14±0.87 1.27±0.85* 1.75±0.87△1.83±1.24△1.94±1.21△NK 7.54±6.59 8.74±5.12 11.45±6.78 17.78±8.25△17.11±8.10△

3 讨论

随着RFA技术的发展及临床疗效的不断提高，RFA已经成为肝癌综合治疗中重要的治疗手段之一，特别是小肝癌的RFA治疗达到了与手术切除相似的效果[3-5]。RFA不仅可使直径≤5cm的小肝癌一次性完全灭活，还可激活机体的免疫力，为新兴的肿瘤治疗手段之一[6]。具有简便、微创、并发症少、可多次重复的特点。

研究证实[7-9]，恶性肿瘤患者常常合并有免疫功能下降。原发性肝恶性肿瘤患者体内T淋巴细胞亚群存在不同程度的紊乱，本组肿瘤患者术前CD4+、CD4+/ CD8+均低于正常对照组，CD8+较正常对照组高；同时肝恶性肿瘤诱导产生的血清免疫抑制因子在肿瘤的发生过程中所发挥的免疫抑制作用，进一步加重外周血T淋巴细胞功能紊乱。

本组结果显示，射频组的外周血T淋巴细胞亚群相比对照组变化更为明显，手术前后CD8+、CD4+及CD4+/CD8+差异有统计学意义（P＜0.01）；患者T细胞免疫功能从术后10天开始逐渐升高，NK细胞水平未见下降，术后30天NK细胞水平则有明显提升，表明患者的外周血免疫功能得到了改善甚至加强。本研究表明，超声引导射频消融治疗肝恶性肿瘤短期内疗效显著，患者细胞免疫功能得到显著改善，对肝恶性肿瘤患者的预后产生积极影响[10]。

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2013-08-20