人参五味子颗粒与五味子稠膏中五味子醇甲在大鼠体内的药动学研究

智炎伟

[摘要] 目的 建立高效液相色谱法测定大鼠血浆中的五味子醇甲，考察人参五味子颗粒与五味子稠膏中的五味子醇甲在大鼠体内的药动学差别。 方法 大鼠分别灌胃给予相当于五味子醇甲49.6mg/kg的五味子稠膏和人参五味子颗粒，血样用HPLC分析。采用C18色谱柱，甲醇-水（67∶33）为流动相，检测波长250nm。 结果 五味子醇甲血浆浓度在0.22～27.00μg/mL之间线性关系良好，低、中、高浓度样品回收率分别为64.3%，70.2%和68.7%。大鼠灌胃五味子稠膏和人参五味子颗粒后的主要药动学参数分别为AUCO-t（26.67）和（30.77）mg/（h·L），AUC0-∞（29.44）和（41.64）mg/（h·L），tmax（0.86）和（0.83），Cmax（11.19）和（12.94），药-时曲线均符合二房室模型。结论 五味子醇甲在大鼠体内药动学的研对中药复方制剂的药物动力学研究探索有一定进展。

[关键词] 五味子醇甲；人参五味子颗粒；药动学；高效液相色谱

[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2014）04-35-04

A pharmacokinetic study of schisandrin in ginseng schisandra granules and schisandra thick paste inside rats

ZHI Yanwei

Department of Pharmacy，Luoyang Central Hospital Affiliated to Zhengzhou University，Luoyang 471000，China

[Abstract] Objective To investigate the pharmacokinetic differences of schisandrin in Ginseng schisandra granules and schisandra thick paste inside rats via high efficiency liquid chromatography used to test schisandrin in rat's plasma. Methods Rats were intragastrically administered schisandra thick paste and Ginseng schisandra granules，both of which contains 49.6 mg/kg of schisandrin.Their blood samples were analyzed by HPLC.C18 chromatographic column was applied.Methanol-water （67：33） was in mobile phase，and the testing wavelength was 250 nm. Results Linearity remained good when the blood concentration of schisandrin was between 0.22-27.00μg/mL.The recovery rates of samples of low， medium and high concentrations were 64.3%，70.2% and 68.7% respectively.Main pharmacokinetic parameters after intragastric administration of schisandra thick paste and Ginseng schisandra granules for rats were AUC0-t （26.67） and （30.77） mg/（h·L），AUC0-∞ （29.44） and （41.64） mg/（h·L），tmax （0.86） and（0.83），Cmax （11.19） and （12.94） respectively.The concentration-time curves all accorded to two-compartmental model. Conclusion The study on pharmacokinetics of schisandrin inside rats promotes and enlightens researches and explorations of pharmacokinetics of compound preparation of Chinese herbal medicine.

[Key words] Schisandrin；Ginseng schisandra granules；Pharmacokinetics；High efficiency liquid chromatography

人参五味子颗粒由人参和五味子精制而成，具有益气敛阴，安神镇静之功效。用于病后体虚，神经衰弱。五味子为木兰科植物五味子[Schisandra chinensis（Turcz.） Baill]或华中五味子（S.Sphenanchera Rehd.etWils.）的干燥成熟果实。前者习称“北五味子”，主产于东北，后者习称“南五味子”，主产于西南及长江流域以南各省。本文中均指北五味子。味酸、甘、温。归肺、心、肾经。五味子挥发油及其有效成分之一五味子醇甲（1）具有镇静[1-2]、催眠[1]、抗惊厥[3]、保护脑神经细胞[4-5]等多种作用。同时考察复方制剂中1的体内过程，并与五味子稠膏中1的药动学特征进行比较，可以初步评价复方中其他配伍成分对1药动学特征的影响，以进一步探讨中药复方配伍的合理性。

1 仪器与试药

JASCO LC-1500型高效液相色谱仪（生产商：日本分光工业株式会社），UV-1575型紫外/可见检测器；N2000型双通道色谱工作站（生产商：浙江大学智能信息工程研究所）。

五味子醇甲对照品（由中国药品生物制品检定所提供，批号：110857-200304）；对羟基苯甲酸甲酯（由中国药品生物制品检定所提供，批号：857-200202，2）；五味子稠膏（自制）；人参五味子颗粒（长春新宇制药有限公司，批号：20091201）；甲醇采用色谱纯，水采用重蒸馏水，其余试剂均采用分析纯。

SD大鼠由军事医学科学院实验动物中心提供[合格证号：SCXK（军）2007-004]，大鼠为清洁级的SD大鼠，均为雄性[6]。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm，5?m）；流动相：甲醇-水（67∶33）；检测波长：250nm；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：20μL。

2.2 味子稠膏的制备

五味子酌予碎断，加30%乙醇适量，浸渍3d，滤过，残渣再以同法浸渍2d，滤过，合并滤液，静置，取上清液浓缩至稠膏。

2.3 溶液的配制

2.3.1 系列标准溶液及质控（QC）标准溶液的配制 精密称取五味子醇甲对照品10.80mg，加甲醇配制成0.108mg/mL的储备液，再用甲醇依次稀释成系列标准溶液和质控标准溶液。

2.3.2 内标溶液的配制 精密称取2适量，用甲醇溶解并稀释成浓度为5μg/mL的内标溶液。

2.4 灌胃试剂的配制

2.4.1 五味子稠膏灌胃液 称取五味子稠膏适量，加适量30%乙醇溶解，测定含量，再加入1%CMC-Na稀释成灌胃液（含五味子醇甲6.2mg/mL），供大鼠给药用。

2.4.2 人参五味子颗粒灌胃液 取人参五味子颗粒，研细，称取适量，精密称定，加入1% CMC-Na配置成混悬液（含五味子醇甲6.2mg/mL），供大鼠给药用。

2.5 血浆样品的预处理

抗凝后血液立即离心分离血浆，低温冰箱冷藏待测，测定时微量加样器精取冻融血浆0.5mL，置具塞离心管中，精密加入乙腈2mL旋混60s，离心（2700×g）15min，精取上层乙腈，约60℃水浴中用氮气吹干，用100μL甲醇溶解残留物，加入10μL内标溶液，进样20μL，记录色谱图。

2.6 专属性试验

取大鼠空白血浆，操作方法为“血浆样品的预处理”进样测定，得出空白血浆色谱图（图1A）；将一定浓度的五味子醇甲对照品溶液（0.22μg/mL）和内标溶液加入大鼠空白血浆中，同法操作，得相应色谱图（见图1B）；同法操作分别得到给药1.5h后大鼠血浆样品色谱图（见图1C、D）。从图中可知，1与其他干扰组分的分离效果均显示良好，未见任何杂质峰干扰。在此色谱条件下，血浆中1的理论塔板数≥3000，tR为9min左右，分离度均达到1.5。

A：空白血浆；B：血浆中加入五味子醇甲对照品；

C：灌胃五味子稠膏后的血浆样品；

D：灌胃人参五味子颗粒后的血浆样品；E：定量下限

1：五味子醇甲色谱峰；2：内标物对羟基苯甲酸甲酯的色谱峰

图1 典型的HPLC色谱图

2.7 线性范围和定量下限

五味子醇甲标准溶液用空白大鼠血浆配制成五味子醇甲浓度分别为27.00，10.80，5.40，2.70，1.08，0.54，0.22μg/mL的系列血浆样品，按“血浆样品的预处理”项制备系列标准溶液。纵坐标（Y）为待测物的峰面积与内标峰面积的比，横坐标（X）为待测物的浓度，用加权最小二乘法[7]（权重系数：1/X2）进行线性回归运算，使用典型回归方程为：Y=3598.2X+801.6，r=0.9953。由此可见，当血浆中1在0.22～27.00μg/mL的浓度范围内时，其线性关系良好。当信噪比（S/N）为10时，本实验所建立的方法测定1的定量下限可达0.22μg/mL。

2.8 精密度和回收率

取空白血浆，按“溶液的配制”项下的方法分别配制1低、中、高三个浓度（0.54，10.80和27.00g/mL），进行质量控制（QC）样品分析，每一浓度取6份样本，QC样品的浓度使用当日标准曲线计算，分别对日内及日间精密度进行计算，连续测定3d。结果，低、中、高三个浓度的日内精密度（RSD）分别为4.68%，4.32%，6.29%，日间精密度（RSD）分别为6.59%，7.40%，9.86%。

取低、中、高三个浓度（0.54，10.80和27.00g/mL）的质量控制（QC）样品（每浓度6样本），按“血浆样品预处理”项下同法试验，获得相应色谱峰面积；另取空白血浆，加入乙腈沉淀蛋白（剂量：2mL）处理后，再加入相对应浓度的内标溶液和质控标准溶液（每种浓度取6样本），涡旋混合1min，离心（2700×g）10min，进行样本分析，得出相应色谱峰面积。提取回收率采用每一浓度两种处理方法的峰面积比值进行计算。结果：低、中、高三个浓度1样品的平均回收率分别为64.3%，70.2%和68.7%（n=6）。内标物的平均回收率为68.2%（n=18）。从而说明1的血浆样品的提取回收率与体内药物分析的要求相符合，内标提取回收率稳定。

2.9 稳定性试验

按“血浆样品的预处理”项下方法，制得1浓度分别为1.08和10.80μg/mL的血浆样品。分别对样品在在不同条件下的稳定性进行考察： 避光条件下室温放置6h；样品处理后室温放置4h；样品预处理后4℃放置24h；样品3次冷冻解冻循环及-20℃保存30d。结果，1血浆样品在上述各试验条件下的RSD分别为：3.2%和4.3%、1.8%和2.3%、1.9%和0.8%、2.3%和3.5%（3次冷冻解冻循环后）、7.6%和5.8%。表明稳定性良好。

2.10 药动学研究

药动学参数：取12只SD大鼠，体重取（250±20）g之间的雄性，给药前禁食12h，自由饮水，随机分成2组，每组6只，分别灌胃给药五味子稠膏灌胃液和人参五味子颗粒灌胃液，给药剂量按1计均为49.6mg/kg，并于给药前和给药后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，3，4，6，8h从眼眶后静脉丛采血，置于肝素化的试管中，分离血浆，置-20℃保存待测。测定血药浓度，使用药动学软件DAS2.0处理所得数据，算出药动学参数。结果，以最小A IC判断，五味子稠膏和人参五味子颗粒中的1在大鼠体内的药动学过程均符合二房室模型，主要的药动学参数见表1，平均药-时曲线见图2。

3 讨论

实验中同时还对羟基苯甲酸和绿原酸的色谱行为进行了考察，用来确定内标物质；但2峰形良好，保留时间适当，最终选作为内标物质。

五味子醇甲给大鼠灌胃[8]后，血浆的分布相半衰期仅约32min，药物吸收较快，给药后作用产生迅速。五味子醇甲有明显的中枢作用[9-10]，这与药物能迅速吸收和通过血脑屏障相符合。其消除相半衰期仅约1.5h，说明药物代谢及排泄也很快，研究延缓代谢的制剂是一个很好的方向。

大鼠分别灌胃给予五味子稠膏和人参五味子颗粒，测定拟定时间点的血药浓度后用DAS2.0软件计算1的药动学参数，其药-时曲线均符合二房室模型。将两组药动学参数进行t检验分析，结果Cmax，t1/2α，t1/2β，tmax和CL不具有显著性差异；灌胃人参五味子颗粒后1的AUC0-t和AUC0-∞均大于灌胃五味子稠膏，但其差异不具有显著性（0.05

中药复方制剂与单味药材相比，药物动力学研究要复杂许多。药材的配伍使得疗效得到提高，更加适应病情的需要，并且可以降低毒负作用，因此，药物动力的学研究不是单方面的药物叠加。目前，药物动力学研究还处于探索阶段，对大多数中药复方的药物动力学规律不清楚，对复方制剂在人体内的有效成分的变化及药动学规律更加的不清楚，因此，在临床上开展复方药物动力学研究存在很大的难度，本文对五味子醇甲在大鼠体内药动学的研究，期望对中药复方制剂的药物动力学研究探索有一定进展。

[参考文献]

[1] 霍艳双，陈晓辉，李康，等.北五味子的镇静、催眠作用[J].沈阳药科大学学报，2005，22（2）：126.

[2] 齐治，崔景荣，田建柱，等.五味子果实挥发油对中枢神经系统的药理作用研究[J].北京医科大学学报，1988，20（6）：457.

[3] 钮心懿.五味子有效成分“醇甲”的中枢神经系统作用[J].药学学报，1983，18（6）：416.

[4] 李海涛，胡刚.五味子醇甲抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的研究[J]南京中医药大学学报，2004，20（2）：96.

[5] 应国清，俞志明，单剑峰，等.北五味子有效组分的研究进展[J].河南中医，2005，25（6）：84.

[6] 许美娟，王广基，谢海棠.五味子醇甲在大鼠肝微粒体内的代谢动力学和性别差异[J].药学学报，2007，42（07）：730-734.

[7] 钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题[J].药物分析杂志，1996，16（5）：343-346.

[8] 张微微，王颖，邹桂欣，等.五味子醇甲胃肠吸收动力学研究[J].辽宁中医杂志，2009，36（11）：1965-1966.

[9] 高剑锋，张洪生.五味子对中枢神经系统作用的研究概述[J].中国药师，2010，13（12）：1813-1816.

[10] 苏明威，王乃平，辛华雯，等.五味子药理作用研究进展[J].中国药师，2009，12（7）：960-962.

（收稿日期：2013-11-10）

2.10 药动学研究

药动学参数：取12只SD大鼠，体重取（250±20）g之间的雄性，给药前禁食12h，自由饮水，随机分成2组，每组6只，分别灌胃给药五味子稠膏灌胃液和人参五味子颗粒灌胃液，给药剂量按1计均为49.6mg/kg，并于给药前和给药后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，3，4，6，8h从眼眶后静脉丛采血，置于肝素化的试管中，分离血浆，置-20℃保存待测。测定血药浓度，使用药动学软件DAS2.0处理所得数据，算出药动学参数。结果，以最小A IC判断，五味子稠膏和人参五味子颗粒中的1在大鼠体内的药动学过程均符合二房室模型，主要的药动学参数见表1，平均药-时曲线见图2。

3 讨论

实验中同时还对羟基苯甲酸和绿原酸的色谱行为进行了考察，用来确定内标物质；但2峰形良好，保留时间适当，最终选作为内标物质。

五味子醇甲给大鼠灌胃[8]后，血浆的分布相半衰期仅约32min，药物吸收较快，给药后作用产生迅速。五味子醇甲有明显的中枢作用[9-10]，这与药物能迅速吸收和通过血脑屏障相符合。其消除相半衰期仅约1.5h，说明药物代谢及排泄也很快，研究延缓代谢的制剂是一个很好的方向。

大鼠分别灌胃给予五味子稠膏和人参五味子颗粒，测定拟定时间点的血药浓度后用DAS2.0软件计算1的药动学参数，其药-时曲线均符合二房室模型。将两组药动学参数进行t检验分析，结果Cmax，t1/2α，t1/2β，tmax和CL不具有显著性差异；灌胃人参五味子颗粒后1的AUC0-t和AUC0-∞均大于灌胃五味子稠膏，但其差异不具有显著性（0.05

中药复方制剂与单味药材相比，药物动力学研究要复杂许多。药材的配伍使得疗效得到提高，更加适应病情的需要，并且可以降低毒负作用，因此，药物动力的学研究不是单方面的药物叠加。目前，药物动力学研究还处于探索阶段，对大多数中药复方的药物动力学规律不清楚，对复方制剂在人体内的有效成分的变化及药动学规律更加的不清楚，因此，在临床上开展复方药物动力学研究存在很大的难度，本文对五味子醇甲在大鼠体内药动学的研究，期望对中药复方制剂的药物动力学研究探索有一定进展。

[参考文献]

[1] 霍艳双，陈晓辉，李康，等.北五味子的镇静、催眠作用[J].沈阳药科大学学报，2005，22（2）：126.

[2] 齐治，崔景荣，田建柱，等.五味子果实挥发油对中枢神经系统的药理作用研究[J].北京医科大学学报，1988，20（6）：457.

[3] 钮心懿.五味子有效成分“醇甲”的中枢神经系统作用[J].药学学报，1983，18（6）：416.

[4] 李海涛，胡刚.五味子醇甲抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的研究[J]南京中医药大学学报，2004，20（2）：96.

[5] 应国清，俞志明，单剑峰，等.北五味子有效组分的研究进展[J].河南中医，2005，25（6）：84.

[6] 许美娟，王广基，谢海棠.五味子醇甲在大鼠肝微粒体内的代谢动力学和性别差异[J].药学学报，2007，42（07）：730-734.

[7] 钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题[J].药物分析杂志，1996，16（5）：343-346.

[8] 张微微，王颖，邹桂欣，等.五味子醇甲胃肠吸收动力学研究[J].辽宁中医杂志，2009，36（11）：1965-1966.

[9] 高剑锋，张洪生.五味子对中枢神经系统作用的研究概述[J].中国药师，2010，13（12）：1813-1816.

[10] 苏明威，王乃平，辛华雯，等.五味子药理作用研究进展[J].中国药师，2009，12（7）：960-962.

（收稿日期：2013-11-10）

2.10 药动学研究

药动学参数：取12只SD大鼠，体重取（250±20）g之间的雄性，给药前禁食12h，自由饮水，随机分成2组，每组6只，分别灌胃给药五味子稠膏灌胃液和人参五味子颗粒灌胃液，给药剂量按1计均为49.6mg/kg，并于给药前和给药后0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，3，4，6，8h从眼眶后静脉丛采血，置于肝素化的试管中，分离血浆，置-20℃保存待测。测定血药浓度，使用药动学软件DAS2.0处理所得数据，算出药动学参数。结果，以最小A IC判断，五味子稠膏和人参五味子颗粒中的1在大鼠体内的药动学过程均符合二房室模型，主要的药动学参数见表1，平均药-时曲线见图2。

3 讨论

实验中同时还对羟基苯甲酸和绿原酸的色谱行为进行了考察，用来确定内标物质；但2峰形良好，保留时间适当，最终选作为内标物质。

五味子醇甲给大鼠灌胃[8]后，血浆的分布相半衰期仅约32min，药物吸收较快，给药后作用产生迅速。五味子醇甲有明显的中枢作用[9-10]，这与药物能迅速吸收和通过血脑屏障相符合。其消除相半衰期仅约1.5h，说明药物代谢及排泄也很快，研究延缓代谢的制剂是一个很好的方向。

大鼠分别灌胃给予五味子稠膏和人参五味子颗粒，测定拟定时间点的血药浓度后用DAS2.0软件计算1的药动学参数，其药-时曲线均符合二房室模型。将两组药动学参数进行t检验分析，结果Cmax，t1/2α，t1/2β，tmax和CL不具有显著性差异；灌胃人参五味子颗粒后1的AUC0-t和AUC0-∞均大于灌胃五味子稠膏，但其差异不具有显著性（0.05

中药复方制剂与单味药材相比，药物动力学研究要复杂许多。药材的配伍使得疗效得到提高，更加适应病情的需要，并且可以降低毒负作用，因此，药物动力的学研究不是单方面的药物叠加。目前，药物动力学研究还处于探索阶段，对大多数中药复方的药物动力学规律不清楚，对复方制剂在人体内的有效成分的变化及药动学规律更加的不清楚，因此，在临床上开展复方药物动力学研究存在很大的难度，本文对五味子醇甲在大鼠体内药动学的研究，期望对中药复方制剂的药物动力学研究探索有一定进展。

[参考文献]

[1] 霍艳双，陈晓辉，李康，等.北五味子的镇静、催眠作用[J].沈阳药科大学学报，2005，22（2）：126.

[2] 齐治，崔景荣，田建柱，等.五味子果实挥发油对中枢神经系统的药理作用研究[J].北京医科大学学报，1988，20（6）：457.

[3] 钮心懿.五味子有效成分“醇甲”的中枢神经系统作用[J].药学学报，1983，18（6）：416.

[4] 李海涛，胡刚.五味子醇甲抑制6-羟基多巴胺诱导PC12细胞凋亡的研究[J]南京中医药大学学报，2004，20（2）：96.

[5] 应国清，俞志明，单剑峰，等.北五味子有效组分的研究进展[J].河南中医，2005，25（6）：84.

[6] 许美娟，王广基，谢海棠.五味子醇甲在大鼠肝微粒体内的代谢动力学和性别差异[J].药学学报，2007，42（07）：730-734.

[7] 钟大放.以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问题[J].药物分析杂志，1996，16（5）：343-346.

[8] 张微微，王颖，邹桂欣，等.五味子醇甲胃肠吸收动力学研究[J].辽宁中医杂志，2009，36（11）：1965-1966.

[9] 高剑锋，张洪生.五味子对中枢神经系统作用的研究概述[J].中国药师，2010，13（12）：1813-1816.

[10] 苏明威，王乃平，辛华雯，等.五味子药理作用研究进展[J].中国药师，2009，12（7）：960-962.

（收稿日期：2013-11-10）