兴安百里香离体快繁技术研究

王新颖

沈阳市园林科学研究院 沈阳 110016

兴安百里香(Thymus dahuricus)为唇形科，百里香属小灌木，分布于我国东北北部及内蒙古东部。花冠粉紫色，花多且花期长，且耐干旱、耐践踏，管理粗放。全株香味浓郁，其所含的芳香油挥发性较强，能驱虫防蚊、抗菌防腐，可以用作观赏地被，也可以用于芳香疗养功能地被和护坡地被等。

种子繁殖是百里香属常见而有效的繁殖方法［1］。但该种子为小粒种子，采收和播种比较难，难以满足快速获得大量种苗的需求。本试验研究了兴安百里香(T. dahuricus)的快速繁殖方式，建立了快速繁殖体系，以期解决兴安百里香(T. dahuricus)人工快繁问题。

1 材料与方法

1.1 材料及外植体处理

试验于2013年9月—2014年10月于沈阳市园林科学研究院芳香园林植物研究所组培室进行，供试兴安百里香引自辽宁省阜新境内。外植体采用1 ～1.5 cm 带腋芽的茎段，在洗衣粉水中浸泡10 min，自来水冲洗3 ～4h 后置于超净工作台上，用75%的酒精浸泡10 ～30s，放入1g·LHgCl2中消毒，然后无菌水冲洗5 遍，用无菌滤纸吸干材料表面水分，待用。

1.2 不同消毒时间

将处理好的外植体放入1g·LHgCl2中消毒3，5，6，7 min，然后无菌水冲洗5 遍，用无菌滤纸吸干材料表面水分，接种到无菌固体MS 培养基中，每个处理90 个外植体，15 d 后调查不同消毒时间下外植体成活率(表1)。

1.3 初代培养基的筛选

将带腋芽的茎段接种到初代培养基中(表2)，每个处理接种90 个外植体，15 d 后观察腋芽萌发状态。

1.4 愈伤组织分化培养基的筛选

挑选淡绿色、质地疏松透明的愈伤组织，接种到愈伤组织分化培养基中(表3)，每个处理接种90块愈伤组织，30 d 后统计不定芽分化率及生长状况。

1.5 继代增殖培养基的筛选

将诱导出来的丛生芽转接到继代增殖培养基中(表4)，30 d 后比较不同培养基诱导不定芽的长势。

1.6 生根培养基的筛选

将诱导出来的小苗转接到不同的生根培养基中，30 d 后调查生根率和幼苗长势。

2 结果与分析

2.1 消毒时间对外植体成活的影响

由表1 可以看出，随着消毒时间的延长，污染率逐渐降低，成活率随之增高。当消毒时间为7 min时，污染率最低(8.9%)，而成活率为90%。因此，最佳消毒时间为7 min。

表1 不同消毒时间对兴安百里香成活率的影响

2.2 不同初代培养基对诱导成苗的影响

由表2 看出，不同初代培养基对诱导丛生芽影响较小，而在一定范围内，激素浓度对愈伤组织的诱导率影响较大。当激素浓度为6- BA0.25 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1时，成苗最好，丛生芽和愈伤组织诱导率最高达100%和94.4%，而且愈伤组织状态最佳。因此，最适宜的初代培养基为MS +6-BA0.25 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1。

表2 不同初代培养基对诱导成苗的影响

2.3 不同培养基对愈伤组织分化的影响

由表3 看出，不同的培养基对愈伤组织分化的影响较大，在一定范围内分化率随着激素浓度的升高而升高。当激素浓度为6- BA0.5 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1时，分化率最高，分化率达到64.4%;当激素浓度继续升高时，愈伤组织颜色变褐变硬，分化率降低为32.2%。因此，较适宜的愈伤组织分化培养基为MS +6- BA0.5 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1。

表3 不同培养基对愈伤组织分化的影响

2.4 不同培养基对兴安百里香继代增殖的影响

由表4 看出，激素种类和浓度对兴安百里香增殖影响较大，不添加激素，兴安百里香继代苗长势良好，但是没有增殖。当激素浓度为0.5 mg·L-1时，均有增殖;当激素种类为IBA 时，继代苗长势良好且可见少量生根。因此，适宜的继代培养基为MS+IBA0.5 mg·L-1。

表4 不同培养基对兴安百里香继代苗长势的影响

2.5 不同培养基对兴安百里香生根的影响

由表5 看出，以MS 为基本培养基，生根率为0;而以1/2MS 为基本培养基有利于生根，当IBA浓度为0.5 mg·L-1时，生根率最高达100%，且地上部长势健壮;激素浓度高于1.0 mg·L-1，抑制了兴安百里香生根。因此，适宜兴安百里香的生根培养基为1/2MS+IBA0.5 mg·L-1。

表5 不同培养基对兴安百里香生根的影响

3 结论

外植体的选择和灭菌是组织培养的关键环节。由于兴安百里香具有密生的匍匐茎且具有少量的短毛，因此外植体消毒具有一定难度。试验结果表明，采用带腋芽的茎段在1g·LHgCl2中消毒7 min，污染率最低。这与李晓东［2］普通百里香的3 min 灭菌时间的研究结果不同，究其原因可能是试验外植体采自露地栽培的苗，而李晓东采用无菌苗为外植体。另外，在初代培养中，不仅诱导出大量的丛生芽，而且还诱导出长势良好、透明疏松的愈伤组织。愈伤组织在MS +6- BA0.5 mg·L-1+ IAA0.5 mg·L-1中，分化率最高达到64.4%。这与王玲［3］的研究相近，进一步证明百里香属植物愈伤组织分化不定芽是可行的，但是不同的是试验改进了培养基中激素的种类和浓度，将分化率提高了近1 倍。试验还发现，在1/2MS + IBA0.5 mg·L-1中生根率100%。这与李晓东的研究相同，不同的是在培养基1/2MS+IBA0.5 mg·L-1+PP3330.75 mg·L-1中生根率为0，其原因和影响试管苗移栽后长势的原因还有待进一步研究。

［1］王玲，张秀珍，仲轶，等.4种百里香属植物种皮微形态比较［J］.东北林业大学学报，2010，38(4):20-22.

［2］李晓东，王永飞，马三梅，等. 普通百里香的组织培养和快速繁殖［J］.湖北农业科学，2009，48(6):1295-1297.

［3］王玲，杨丽鹏，张秀珍，等. 东北百里香组培再生体系的建立［J］.园艺学报，2011，38(6):1185-1190.