虎耳草灌注剂的质量控制方法

郑 岩 王红霞 陈随清

（河南中医学院药学院生药学科，郑州450008）

虎耳草灌注剂的质量控制方法

郑 岩 王红霞 陈随清*

（河南中医学院药学院生药学科，郑州450008）

目的建立虎耳草灌注剂的质量控制方法。方法色谱柱为hxpersil ODS（250mm×4.0mm、5μm），流动相为甲醇-水（20∶80），流速为1.0ml／min，检测波长275nm，柱温30℃。结果岩白菜素的进样量在0.0202～0.202μg之间与峰面积呈良好线性关系（R2=0.9998），平均回收率为102.45%，RSD=2.66%。结论本方法灵敏、准确、重现性好，可用于虎耳草灌注剂的质量控制。

虎耳草灌注剂；岩白菜素；HPLC；质量控制

虎耳草，为虎耳草科虎耳草属植物虎耳草（Sawifraga stolonifera Curt.）的干燥全草，能祛风清热，凉血解毒，用于治疗急性中耳炎、风热咳嗽、风疹瘙痒、湿疹等［1］。是常用的民族药，收载于《贵州省中药材、民族药质量标准》2003年版［2］。为贵州省著名制剂“咳速停胶囊”、“胆炎康胶囊”和“咳平胶囊”的主要原料药［3］。虎耳草的主要成分有岩白菜素、槲皮素、槲皮苷、原儿茶酸、没食子酸等［4］。其中，岩白菜素具有镇咳祛痰作用，可用于治疗慢性支气管炎。药理研究表明虎耳草有抑菌、抗炎和镇咳等作用［5］。本文拟以岩白菜素为指标，建立虎耳草灌注剂的HPLC质量控制方法，以保证虎耳草灌注剂的质量，为虎耳草进一步的药理、药效及临床研究科学依据。

1 仪器与试药

1.1 实验仪器高效液相色谱仪（LC-20AT，日本岛津公司），紫外检测器（SPD-20A，日本岛津公司），色谱工作站（CBM-102，日本岛津公司）；循环水式多用真空泵（SHZ-95B，巩义市予华仪器有限责任公司）；分析天平（BS2242S，北京赛多利斯仪器系统有限公司）；十万分之一天平（梅特勒，Mettler Toledo AB 135-S）；自动双重纯水蒸馏器（SZ-93，上海亚荣生化仪器厂）；溶剂过滤器（HL，天津市恒奥科技发展有限公司）；数控超声波清洗器（KQ-500DV，昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂甲醇（为色谱纯，天津四友精细化学品有限公司，20110909）；提取用甲醇为分析纯（北京化工厂，20110518）；双蒸水为自制。

1.3 对照品岩白菜素为中国生物制品检定所提供，批号（742-2000111），经HPLC检测，含量＞99%。

1.4 样品所用虎耳草灌注剂样品为河南中医学院三附院自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：phenomenex hydro ODS C18（250mm×4.6mm，4μm）色谱柱，流动相：甲醇-水（20∶80），流速：1.0ml／min，检测波长：275nm，进样量：10μl，柱温：30℃。

2.2 对照品溶液制备精密称取岩白菜素对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶液并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.0101mg／ml的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备精密量取1ml虎耳草灌注剂，50%甲醇定容至50ml，用0.45μm滤膜滤过，作为供试品，备用。

2.4 阴性对照溶液的制备按处方比例配成不含虎耳草的阴性对照样品，按2.3项下供试品溶液制备方法，制成阴性对照溶液，分别精密吸取阴性对照溶液、供试品溶液及对照品溶液各10μl，按上述色谱条件进样测定，结果表明，阴性对照溶液色谱图中与对照品相同保留时间处无吸收峰干扰。对照品、供试品及阴性对照对照溶液色谱图见图1-3。

图1 岩白菜素标准品HPLC图

图2 供试品溶液HPLC图

图3 阴性对照溶液HPLC图

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系的考察取岩白菜素对照品溶液，浓度为0.0101mg／ml，进样量为2、4、6、10、14、20μl。以岩白菜素的峰面积（×10E5）为纵坐标，进样量（μg）为横坐标进行线性回归，回归方程为：x=14.72w+ 0.0106，R2=0.9998，表明岩白菜素的进样量在0.0202～0.202μg之间与峰面积呈良好线性关系。

2.5.2 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24、48小时进样测定岩白菜素峰面积，计算RSD=1.63%。结果表明，供试液在本实验条件下48小时内稳定性较好，结果见表1。

表1 虎耳草灌注剂稳定性试验结果

2.5.3 精密度试验精密吸取同一供试品溶液，重复进样5次，分别测定岩白菜素峰面积，计算RSD=0.55%，表明此方法精密度良好。结果见表2。

表2 虎耳草灌注剂精密度实验结果

2.5.4 重现性试验按供试品溶液制备方法平行制备5份供试品溶液，分别测定岩白菜素平均峰面积，计算RSD=1.66%，表明此方法重现性良好。结果见表3。

表3 虎耳草灌注剂重现性实验结果

2.5.5 加样回收率试验取六份已知岩白菜素含量的虎耳草灌注剂各0.5ml，精密称定后，分别精密加入每1ml含岩白菜素0.295mg的标准品溶液0.5ml，其余按照2.3项下供试品溶液的制备方法制备，进样测定，结果见表4。

表4 虎耳草灌注剂中岩白菜素加样回收率实验结果（%）

表5 虎耳草灌注剂含量测定结果

3 讨论

测定结果表明，本实验建立的HPLC法测定虎耳草灌注剂中岩白菜素含量的方法准确、灵敏、重现性好，可作为控制虎耳草灌注剂质量的有效方法，并为今后虎耳草的药理、药效及临床研究研究提供科学依据。

［1］江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1997：1335.

［2］贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药质量标准［S］.贵阳：贵州科技出版社，2003：235.

［3］徐昌艳，张丽艳，李燕，等.黔产苗药虎耳草的HPLC指纹图谱研究［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（15）：73-76.

［4］罗厚蔚，吴葆金，陈节庵，等.虎耳草有效成分的研究［J］.中国药科大学学报，1988，19（1）：1.

［5］李亨东，李英伦，范巧佳，等.四川宝兴虎耳草活性部位筛选［J］.中草药，2009，40：187-189.

Qu alit y Co n t r ol Me t h o d f o r Saxif r a g a Pe r f usio n Ag e nt

Zheng Yan W ang Hongxia Chen Suiqing

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(Henan University of Traditional Chinese M edicine，Zhengzhou，Henan Province，450008，China)

ObjectiveTo establish a qualitx control method for the Sawifraga perfusion agent.MethodsThe analxsis vas performed on phenomenon hxdro C18column（250mm×4.6mm，4μm），the mobile phase vas MeOH-H2O（20∶80）vith a flov rate at 1.0ml／min，and detection vavelength at 275nm under column temperature 30℃.ResultsThere vas a good linear relationship vhen the sample size of bergenin vas at a range of 0.0202μg～0.404μg（R2=0.9998），the recoverx vas 102.45%，with RSD at 2.66%.ConclusionThis method vas simple，ewact，and reproducible to be used for the qualitx control of the Sawifraga perfusion agent.

Sawifraga perfusion agent；Bergenin；HPLC；Qualitx control

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.02.102

：1672-2779（2014）-02-0150-02

��张文娟 本文校对：李雪菊

2013-10-19）

*通讯作者