双波长分光光度法用于氯霉素并水杨酸体系的含量测定研究*

杨 平，曾蔚欣，孙路路

(首都医科大学附属北京世纪坛医院，北京100038)

双波长分光光度法用于氯霉素并水杨酸体系的含量测定研究*

杨 平，曾蔚欣，孙路路

(首都医科大学附属北京世纪坛医院，北京100038)

目的:改进复方氯霉素洗剂中氯霉素的含量测定方法。方法:采用双波长紫外分光光度法测定氯霉素的含量，且不需进行额外的样品处理过程。结果:氯霉素测定的线性范围为2.5～20 μg/ml(r=0.999 9);低、中、高浓度的回收率分别为99.25%、100.87%和98.81%。结论:双波长紫外分光光度法用于测定复方氯霉素洗剂中氯霉素的含量，与现行的重氮滴定法比较，方法准确，简便易行，适用于医院制剂的快检要求。

双波长紫外分光光度法，氯霉素，含量测定

复方氯霉素洗剂是医院制剂品种，可止痒、杀菌、消炎，用于治疗脂溢性伴毛囊型皮炎，其中氯霉素的含量测定方法在《中国医院制剂规范》［1］中规定为重氮滴定法，其样品的处理需煮沸15 min，过滤，过程烦琐，且使用淀粉碘化钾试纸指示滴定终点，结果受人为因素及试纸质量的影响较大，终点不易掌握。由于处方中还含有水杨酸，具有紫外吸收，影响氯霉素的测定，故有文献报道用HPLC法进行测定［2，3］。由于医院制剂的检验需要快速、准确，本文经反复验证，采用双波长分光光度法，消除水杨酸对氯霉素测定的干扰，且不需额外的样品处理过程，快速简便，质量可控。

1 仪器与试药

1.1 仪器HP8453型紫外可见分光光度计，惠普公司;GB 630型分析天平。

1.2 试药氯霉素(梯希爱化成工业发展有限公司，批号Q2X7D－GE);水杨酸(分析纯);复方氯霉素洗剂(本院自制，批号20120826、20121106、20121207、20120709、20130106);水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 标准储备溶液的制备氯霉素储备液:精密称取氯霉素0.25 g于100 ml量瓶中，加乙醇20 ml溶解，加水至刻度，摇匀，得到浓度为2.5 mg/ml的溶液，再取该溶液10 ml于100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，得到浓度为0.25 mg/ml的储备液。水杨酸储备液:精密称取水杨酸0.5 g于100 ml量瓶中，加乙醇20 ml溶解，加水至刻度，摇匀，得到浓度为5.0 mg/ml的溶液，再取该溶液10 ml于100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，得到浓度为0.5 mg/ml的储备液。

2.2 对照品溶液的制备精密量取各2 ml储备溶液，置50 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。氯霉素及水杨酸浓度分别为10 μg/ml和20 μg/ml。

2.3 阴性对照液的配制取处方量的其他成分(含薄荷脑、甘油)，制成100 ml的溶液，备用。

2.4 测定条件的确定取阴性对照液1 ml，置100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为空白对照液，在200～600 nm波长范围内扫描，结果显示其在此波长范围内无吸收。分别取氯霉素对照品溶液(含氯霉素10 μg/ml)及水杨酸对照品溶液(含水杨酸20 μg/ml)，在200～600 nm波长范围内扫描，结果氯霉素在278 nm波长处有最大吸收，故选择278 nm为氯霉素的测定波长。水杨酸对照品溶液在278 nm处的吸收度为0.226 1，依据水杨酸的紫外吸收曲线，寻找与278 nm处吸收度最接近的波长为312 nm处，其吸收值为0.229 9，故选择312 nm为测定氯霉素的参比波长，见图1。

2.5 标准曲线的制备精密量取5份水杨酸储备液2 ml，分别置于50 ml的量瓶中，再依次精密加入氯霉素标准储备溶液0.5、1、2、3和4 ml，加纯化水至刻度，摇匀。分别在278 nm及312 nm处测定A1及A2，以ΔA= A1－A2对浓度(C)作线性回归，得到回归方程为:ΔA= 0.019 2 C－0.012 5(R2=0.999 8)，线性范围为2.5～20 μg/ml。

图1 氯霉素及水杨酸的紫外吸收图

2.6 回收率试验精密量取9份水杨酸储备液2 ml，分别置于50 ml的量瓶中，再依次精密加入氯霉素储备液1.6、2和2.4 ml，加纯化水至刻度，摇匀，每一浓度进行3样本分析。分别在278 nm及312 nm处测定A1、A2，计算ΔA，按“2.5”项下的回归方程计算氯霉素的含量。结果平均回收率为99.64%，RSD为1.27%，见表1。

表1 氯霉素回收率测定结果

2.7 两种方法测定氯霉素含量的比较按“2.2”项下方法准确量取5个批号的样品，按照重氮滴定法及双波长法分别进行含量测定，两种方法测得结果间无显著性差异，见表2。

表2 两种方法样品含量测定结果比较

3 讨论

目前复方氯霉素洗剂中氯霉素的含量测定方法是《中国医院制剂规范》收载的重氮滴定法。操作比较烦琐费时，其样品的处理需煮沸15 min，过滤;且用碘化钾淀粉试纸划痕判断终点受试纸质量及环境温度的影响较大;同时终点的判断更与操作人员的视觉及经验有关，容易产生较大误差。应用双波长紫外分光光度法可消除水杨酸对氯霉素测定的干扰［4］，本文的改进之处在于水杨酸的测定仍采用中和滴定法，经典，准确，快速;氯霉素的测定采用双波长法，方法学研究结果符合含量测定的要求，其在更广的范围内(2.5～20 g/ml)具有较好的线性。在具体测定中仅需精密量取5 ml复方氯霉素洗剂，置100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，再取该溶液1 ml，置50 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为供试品溶液。以水为空白，在278 nm及312 nm处测定A1及A2，ΔA=A1－A2计算，将结果代入回归方程，计算即得氯霉素的浓度。该方法的最大优点在于大大节省了测定的时间成本，结果受人为及环境因素影响很小。本文通过测定5批样品将双波长法与滴定法测定的结果进行了比较及统计学分析，结果显示，两种方法测得的结果间无显著性差异。可见双波长法不但快速，并且准确，结果重现性好，适合医院制剂的快检要求。

1中华人民共和国卫生部药政局.中国医院制剂规范(二版)［Z］.北京:中国医药科技出版社，1996:103

2杨辉，崔爱瑛.HPLC法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素和水杨酸的含量［J］.解放军药学学报，2007，23(6):470－472

3冯碧敏，陈丽娟，张昊.HPLC法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素和水杨酸的含量［J］.泸州医学院学报，2005，28(4):363－364

4管玫，李开兰，谢智远.双波长分光光度法测定复方氯霉素洗剂中氯霉素及水杨酸的含量［J］.华西药学杂志，1992，7(2):116－118

Determination of chloramphenicol in compound chloramphenicol lotion by dual wavelength UV spectrophotometry

Yang Ping，Zeng Weixin，Sun Lulu
(Beijing Tiantan Hospital Affiliated to Capital Medical University，Beijing 100038)

Objective:To Improve the method of determination of chloramphenicol in compound chloramphenicol lotion.Methods:Dual wavelength UV spectrophotometry was used to directly determine the chloramphenicol without any additional processing.Results:The linear range is 2.5～20 μg/ml(r=0.999 9)，the recovery of chloramphenicol from the high，medium and low levels of chloramphenicol solution was 99.25%，100.87%and 98.81%，respectively.Conclusions:The method of dual wavelength UV spectrophotometry for the determination of chloramphenicol in compound chloramphenicol lotion is accurate，simple and suitable for hospital preparations.

dual wavelength UV spectrophotometry，chloramphenicol，content determination

R927.11

A

1006-5687(2014)01-0022-03

2013-11-20

首都卫生发展科研专项(No.2011－2008－01)