HPLC法测定速效心痛滴丸中芍药苷含量*

车 爽，周 军，王 杰

(天津市药品检验所，天津3000070)

药品质量与检验

HPLC法测定速效心痛滴丸中芍药苷含量*

车 爽，周 军，王 杰

(天津市药品检验所，天津3000070)

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定速效心痛滴丸中芍药苷的含量。方法:采用phenomenex luna－C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱;以乙腈－0.1%磷酸溶液(15∶85)为流动相;检测波长为230 nm。结果:芍药苷在0.031 027 2～3.102 72 μg范围内线性良好，平均回收率为99.46%，RSD为0.46%(n=6)。结论:本方法可用于速效心痛滴丸的质量控制。

速效心痛滴丸，芍药苷，HPLC

速效心痛滴丸由牡丹皮、川芎、冰片3味药材组成，具有凉血活血，宽胸止痛之功效，用于治疗血热瘀阻，轻、中度胸痹心痛，烦热口渴，舌红。其中牡丹皮具有清热凉血、活血、散瘀之功效，用以治血中伏火而除热，是针对胸痹心痛偏热证的病机而设，为君药。芍药苷是牡丹皮的主要有效成分之一。本研究建立HPLC法测定速效心痛滴丸中芍药苷含量，结果准确，重复性好，快速简便，可作为速效心痛滴丸质量标准的定量方法。

1 仪器与试药

日本SHIMADZU LC－20AD高效液相色谱仪，紫外检测器，LC solution工作站。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110736－201035)，速效心痛滴丸分别由北京(批号029005、129006)及上海(批号20111007)两家药品生产企业提供。甲醇、乙腈(色谱纯，天津市康科德科技有限公司)，磷酸(分析纯，天津市赢达稀贵化学试剂厂)，水为去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱:phenomenex luna－C18(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液(15∶85);检测波长:230 nm;流速:1.0 ml/min;进样量:10 μl;理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于2 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含30 μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品适量，研细，取0.5 g，精密称定，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，超声提取45 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备按处方取除牡丹皮的各味药材，按制法制得样品，再按“2.2.2”项下供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。

2.3 阴性对照试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪中，按“2.1”项下色谱条件分析。结果阴性样品在芍药苷色谱峰对应的保留时间无干扰。见图1。

2.4 线性关系考查取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成浓度为每1 ml中含芍药苷分别为3.102 72、15.513 6、31.027 2、77.568、155.136和310.272 μg的对照品溶液。分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件分析，测定芍药苷峰面积，以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，求得回归方程:Y=1 000 000 X－6 383.7 (r=1，n=6)。结果表明芍药苷在0.031 027 2～3.102 72 μg范围内线性良好。

图1 对照品(A)供试品(B)阴性样品(C)HPLC色谱图

2.5 进样精密度试验取同一批(批号20111007)样品适量，研细，取0.5 g，精密称定，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析，连续进样6次，测定样品中芍药苷峰面积，峰面积的RSD为0.07%，符合要求。

2.6 重复性试验取同一批(批号20111007)样品，共6份，研细，取0.5 g，精密称定，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析，测定每份样品中芍药苷含量。结果表明样品中芍药苷平均含量为1.354 6 mg/g，RSD为1.06%，符合要求。

2.7 稳定性试验取同一批(批号20111007)样品，研细，取0.5 g，精密称定，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件分析，分别在0、2、4、8、12、18和24 h测定样品中芍药苷峰面积，测得峰面积值的RSD为1.19%。结果表明供试品溶液在24 h内基本无变化，稳定性良好。

2.8 回收率试验取同一批(批号20111007)样品，研细，取0.25 g，共6份，精密称定，置锥形瓶中，分别精密加入含芍药苷对照品的50%甲醇溶液(0.012 410 88 mg/ml)25 ml，再按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，制得供回收率用供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析，计算回收率，结果显示平均回收率为99.46%，RSD为0.46%，符合规定。见表1。

表1 加样回收率试验测定结果

2.9 样品含量测定取3个批号的样品，按照“2.2.2”项下供试品溶液制备操作，按“2.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。按外标法以峰面积计算样品的含量。测得3批供试品中芍药苷的平均含量分别为1.359 4、1.244 8和1.298 4 mg/g(n=2)。

3 讨论

3.1 流动相的选择高效液相法测定芍药苷含量时，在《中国药典》等现行标准中采用有多种流动相系统。分别采用甲醇－水－冰醋酸(40∶60∶0.01)［1］、甲醇－0.1%磷酸缓冲盐(pH为7.4)(21∶79)［2］、乙腈－0.1%磷酸水(14∶86)［3］与乙腈－0.1%磷酸水(15∶85)等流动相进行实验。结果以乙腈－0.1%磷酸水溶液(15∶85)为流动相，分离效果最佳，保留时间适中，故选用乙腈－0.1磷酸水溶液(15∶85)为流动相。

3.2 提取方法的选择

3.2.1 提取溶剂取同一批(批号20111007)样品，研细，取0.5 g 8份，精密称定，分别精密加入稀乙醇、75%乙醇、50%甲醇和75%甲醇各25 ml，称定重量，超声处理45 min，放冷，再称定重量，用各自的溶剂补足减失的重量，滤过，取续滤液，分别测定样品中芍药苷含量。结果表明，以50%甲醇作为溶剂时，样品中芍药苷含量较高，为1.380 1 mg/g，故本实验采用50%甲醇作为提取溶剂。

3.2.2 提取方式取同一批(批号20111007)样品，研细，取0.5 g 4份，精密称定，精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，分别超声处理或加热回流45 min，放冷，称定各自重量，用50%甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，测定样品中芍药苷含量分别为1.324 6和1.324 7 mg/g(n=2)。采用超声处理和加热回流两种提取方式，测定结果基本相同。但超声处理较简便，故选择超声处理为样品的提取方式。

3.2.3 提取时间取同一批(批号20111007)样品，研细，取0.5 g 8份，精密称定，分别精密加入50%甲醇25 ml，称定重量，分别超声处理30、45、60和90 min，放冷，再称定各自重量，用50%甲醇补足减失各自的重量，滤过，取续滤液，测定样品中芍药苷的含量分别为1.354 8、1.357 3、1.357 0和1.353 9 mg/g (n=2)，测定结果无明显区别，但超声45 min提取的结果含量最高，故选定超声处理时间为45 min。

3.3 柱温的选择比较不同柱温(30、35和40℃)条件下样品的分离情况，结果样品中的芍药苷与杂质峰均分离较好。

3.4 色谱柱的选择取重现性试验项下的供试品溶液，分别采用资生堂SPOLAR－C18柱、phenomenex luna－C18柱和Agilent ZORBAX SB－C18柱，均为(4.6 mm×250 mm，5 μm)，采用日本SHIMADZU LC－20AD高效液相色谱仪，进样测定。结果上述3种色谱柱其色谱峰峰型和分离度良好，测定结果均不受影响，证明本方法耐用性良好。

通过方法学考查建立了高效液相色谱法测定速效心痛滴丸中芍药苷含量，本方法简便易行，结果准确，重复性好，可作为速效心痛滴丸质量标准的定量方法。

1鲍邢杰，宿树兰.对《中国药典》2010版Ⅰ部中白芍中芍药苷含量测定方法的探讨［J］.时珍国医国药，2012，23(5):1309

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3中国药典［S］.一部.2010:96

Determination of paeoniflorin in Suxiaoxintong dropping pills by HPLC

Che Shuang，Zhou Jun，Wang Jie
(Tianjin Institute for Drug Control，Tianjin 300070)

Objective:To establish an HPLC method for the determination of paeoniflorin in Suxiaoxintong dropping pills.Methods:Analyses was carried out on phenomenex luna－C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)with acetonitrile－0.1%phosphoric acid as mobile phase，The detection wavelength was set at 230 nm.Result:The calibration curve of paeoniflorin was linear in the range of 0.031 027 2 to 3.10272 μg(r=1，n=6)，and average recovery was 99.46%，RSD was 0.46%.Conclusion:The method can be used for the quality control and determination of Suxiaoxintong dropping pills.

Suxiaoxintong dropping pills，paeoniflorin，HPLC

R927.2

A

1006-5687(2014)01-0005-03

2013-10-13