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金黄色葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性的分析

2014-06-05路永生

中国实用医药 2014年25期
关键词:克林红霉素纸片

路永生

每一种细菌都是有一定的耐药性的, 随着人类技术的不断发展, 人们所发掘到的抗生素的种类越来越多, 这一成就有利也有弊, 抗菌药物的广泛的使用, 使得葡萄菌属已经成为了医院和社区引起化脓感染的主要来源, 在临床治疗金黄色葡萄球菌属的感染中, 作者大多选用林可酰胺类、大环内酯类以及链阳菌素B类等抗菌药物进行治疗, 需要特别注意的是克林霉素, 由于自身的渗透能力比较强的优点, 所以被选为对与头孢菌素以及青霉素过敏的首选的替代药物, 而且随着病原菌的耐药性的不断增加, 现有的抗菌药物已经呈现出比较高的耐药性, 除此之外, 红霉素的应用还能诱导出现克林霉素耐药的现象, 减少治疗的效果[1]。所以在现在的医疗体系当中, 诱导型克林霉素耐药已经引起了许多人的关注,所以, 本文中主要分析了金黄色葡萄球菌属对于红霉素以及克林霉素的耐药性, 使医务工作人员更加合理的使用抗菌药物, 更加彻底的治疗细菌的感染。

1 材料与方法

1.1 材料 试验中所采用的菌株均为本院在2012年6月~2013年4月临床送检的各类标本中分离出来的金黄色葡萄球菌160株(其中mecA基因阳性菌株为132株), 凝固酶阴性金黄色葡萄球菌180株(其中mecA基因阳性菌株为115株)。在采取的所有菌株均需经过ATB Expression细菌分析仪鉴定和确认。

1.2 仪器与试剂 35℃恒温箱, ATB Expression细菌分析仪,ID32 STAPH细菌鉴定卡, 克林霉素药敏纸片(2 μg), 红霉素药敏纸片(15 μg), M-H琼脂。

1.3 药敏纸片与药敏试验 血浆凝固酶胶乳试剂是法国生物梅里埃公司的产品, 而头孢西丁、克林霉素以及红霉素纸片是英国Oxoid公司的产品。采用的纸片扩散法药敏试验是按照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)规程来对金黄色葡萄球菌以及里昂金黄色葡萄球菌来进行操作的, 对于不同的药物, 作用效果也是不同的, 头孢西丁的抑制圈≤21 mm为耐药、≥22 mm为敏感;其他凝固酶阴性金黄色葡萄球菌抑制圈≤24 mm为耐药、≥25 mm为敏感。对于D-试验的操作, 需要将0.5麦氏单位浓度的金黄色葡萄球菌属涂抹于M-H琼脂板上面, 涂抹应尽量均匀, 两种纸片边缘之间的距离为15 mm, 在35℃的恒温箱中孵育16~18 h。对于结果的判读应该根据NCCLS进行判断, 标准是红霉素为14~22 mm, 克林霉素则为15~20 mm。D-试验阳性或者说是红霉素对克林霉素具有诱导耐药性的现象是克林霉素纸片的抑菌环在靠近红霉素纸片一侧出现了平面截断的现象, 也就是克林霉素纸片的抑菌环看似一个大写的D[2,3]。

1.4 基因的检测 采用的均为聚合酶链反应(PCR)法。进行模板DNA的制作:将在血平板上培养了一夜的细菌菌落悬浮于2 ml 0.85%的NaCl溶液当中, 浓度为5个麦氏单位。以速度为13000 r/min进行1 min的离心, 取出沉淀, 悬于200 μl的裂解缓冲液当中, 并在沸水中煮10 min左右, 然后在13000 r/min进行2 min的离心, 最后取出上清液保存在-20℃备用。

2 结果

2.1 耐药的表型 340株金黄色葡萄球菌属对红霉素和克林霉素的耐药表型情况, 见表1。

2.2 耐药基因类型的分布 在具有诱导耐药性的葡萄菌属中检测红霉素核糖体甲基化酶基因, 见表2。

表1 金黄色葡萄球菌属对红霉素和克林霉素不同耐药表型(n)

表2 89株D-试验阳性的葡萄菌属中红霉素耐药基因类型分布构成比(n, %)

3 讨论

在最近几年来, 大环内酯类对葡萄菌属的活性不断降低,在本次试验中对6种耐药基因进行了检测, 在数据中可以看出, 红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因, ermC基因主要见于MRCNS, ermA主要见于MRCNS, sat4见于MSSA和MRCNS, 而对于ermB来说是很少见的。

D-试验在临床试验中主要是用于红霉素对克林霉素的诱导耐药性的检测, 目的在于避免在使用克林霉素治疗时的失误的现象, 影响治疗的效果, 也浪费了药物。在现在的微量稀释法以及机器法药敏试验中, 对于此种诱导耐药机制尚不能检测出来, 所以需要进行D-检验, 使药物的耐药范围缩小, 得出的结果才有可信度[4]。因为耐药性的存在, 为了避免在临床上出现不合理使用克林霉素的现象, 所以需要在确定使用的药物之前对药物在临床实验室进行正规的D-试验的检验, 从而保证克林霉素的耐药性能够准确的检测出来,使医生有具体的指导来使用抗菌药物。

[1] 魏绪廷, 杨霞.葡萄球菌属对红霉素和克林霉素的诱导耐药性研究.中华医院感染杂志, 2008, 18(7):921-922.

[2] 曲海霞.葡萄球菌对克林霉素诱导型耐药的检测与分析.中外健康文摘, 2010, 7(28):140.

[3] 黄烈, 林广城.葡萄球菌属对红霉素和克林霉素的诱导耐药性研究.中外检验医学杂志, 2007, 17(2):121-124.

[4] 赵瑞珍.D试验检测葡萄球菌属中克林霉素诱导型耐药.中外医院感染学杂志, 2006, 16(9):977-979.

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