双百口服液防治抗结核药物性肝损伤的作用机制研究

唐宋琪，陈云慧，郑翔鸿，钟森

（1.海南医学院，海口 571199；2.成都中医药大学，成都 611137；3.成都中医药大学附属医院，成都 610075）

抗结核化疗药物的肝毒性一直是困扰结核治疗的重要因素［1，2］。抗结核药物引起的肝损伤，不但影响结核患者治疗的依从性，而且影响患者及其家属的生活质量［3］。中医药在肺结核治疗领域的应用历史悠久，相关记载文献众多。中药制剂双百口服液（SBOL）是具有代表性的药物之一，其功效为养阴润肺、益气健脾，用于治疗肺阴不足、脾气虚弱所致的肺结核。SBOL与抗结核化疗药物联合应用可明显降低抗结核药物性肝损伤的发生率及肝损伤严重程度［4］，然而其作用机制并不明确。本文以SD大鼠为研究对象，将中药制剂SBOL作为干预手段，从细胞色素酶CYP2E1及肝组织抗氧化角度探讨中医药防治抗结核药物性肝损伤的作用机制。

1 材料和方法

1.1 动物

清洁级SD大鼠，雌性，45只，体质量（150±20）g，生产许可证号：SCXK（川）2008－0011。SD大鼠购回适应性喂养1w后，随机分为3组：空白组、异烟肼（H）及利福平（R）组、HR＋SBOL组，每组15只。

1.2 药物

SBOL，吉林一正药业有限公司，组方：百合、沙参、寸冬、生地、生晒参、川贝、百部、地骨皮、白芨、黄芪、山药、猫爪草，批号：B20020363；H，沈阳红旗制药有限公司，批号：0906031；R，沈阳红旗制药有限公司，批号：0909071。

1.3 试剂

血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂，四川迈克科技有限责任公司，批号：0711061；血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂，四川迈克科技有限责任公司，批号：0711051；CYP2E1ELISA 试剂盒，美国Uscnlife，批号：E0988r；肝组织匀浆丙二醛（MDA）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20100107；肝组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20100107；肝组织匀浆谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20100107。

1.4 仪器

HITACHI 7170型全自动生化仪（日本日立）；全自动多功能酶标仪MK3（芬兰雷勃）；721分光光度计（上海第三分析仪器厂）。

1.5 给药方法与剂量［2］

空白组：生理盐水20mL／kg灌胃，1次／d；HR组：H 30mg／kg，R 60mg／kg，灌胃，1次／d；HR＋SBOL组：H 30mg／kg，R 60mg／kg，SBOL 6mL／kg，灌胃，1次／d。给药周期：4w。

1.6 指标与测定方法

ALT、AST：全自动生化分析仪检测；肝组织匀浆细胞色素CYP2E1酶：ELISA试剂盒检测；MDA、SOD和GSH－Px：紫外分光试剂盒检测。

1.7 统计学方法

采用SPSS 17.0软件处理数据。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用单因素方差分析LSD法，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HR与SBOL联合应用对大鼠血清AST、ALT的影响

给药4w后，单纯给予HR的大鼠血清AST、ALT明显升高；联合SBOL给药的大鼠血清ALT高于空白对照组，血清AST未发生明显变化。研究结果提示，SBOL与HR联合给药可有效控制大鼠肝脏酶学的异常升高（见表1）。

表1 大鼠血清AST、ALT的变化（±s）

表1 大鼠血清AST、ALT的变化（±s）

▲与空白组比较，P＜0.05；◆与 HR组比较，P＜0.05

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2.2 HR与SBOL联合应用对大鼠肝组织CYP2E1含量的影响

给药4w后，单纯给予HR的大鼠肝组织匀浆CYP2E1含量明显高于空白组和HR＋SBOL组；联合SBOL给药的大鼠肝组织匀浆CYP2E1含量与空白组比较，未发生明显变化。研究结果提示，HR引起的大鼠肝脏酶学异常变化可能与CYP2E1有关，SBOL可能通过抑制肝组织CYP2E1含量，对抗HR引起的肝损伤（见表2）。

表2 大鼠肝组织CYP2E1的含量（±s）

表2 大鼠肝组织CYP2E1的含量（±s）

▲与空白组比较，P＜0.05；◆与 HR组比较，P＜0.05

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2.3 HR与SBOL联合应用对大鼠肝组织GSHPx、SOD、MDA的影响

给药4w后，单纯给予HR的大鼠肝组织MDA含量明显升高，SOD和GSH－Px含量降低；联合SBOL给药的大鼠肝组织MDA含量与空白组比较，未发生明显变化，SOD和GSH－Px含量均升高。研究结果提示，HR引起的大鼠肝脏酶学异常变化可能与MDA的蓄积有关，SBOL可能通过提高肝组织中SOD和GSH－Px含量发挥抗氧化作用，对抗HR引起的肝损伤（见表3）。

表3 大鼠肝组织中MDA、SOD、GSH－Px的含量（±s）

表3 大鼠肝组织中MDA、SOD、GSH－Px的含量（±s）

▲与空白组比较，P＜0.05；◆与 HR组比较，P＜0.05

?

3 讨论

前期临床研究［4，5］发现，中药与抗结核化疗药物联合应用可有效降低抗结核药物性肝损伤的发生率及肝损伤严重程度，本研究也证实了SBOL的保肝作用。CYP2E1是一种肝脏毒物代谢酶，具有遗传多态性，可参与外源性和内源性化合物的代谢［6－8］，抑制CYP2E1在肝组织中的含量，减少其对抗结核化疗药物的有毒代谢，减少肝毒性代谢产物的产生。本研究结果显示，大鼠在服用HR后，血清ALT、AST升高，同时肝组织中CYP2E1含量也升高，该结果提示HR合用可能具有诱导CYP2E1产生的作用，CYP2E1含量的升高可能增加了HR对肝脏的毒性。中药SBOL与抗结核化疗药物联合应用可稳定肝组织中CYP2E1含量，减轻化疗药物对大鼠肝脏的损害，在一定程度上对抗HR造成的肝损害。

中药的抗氧化作用与保肝作用关系密切［9，10］，本研究从抗氧化角度探讨了中药防治抗结核药物性肝损伤的作用机制。研究发现，SBOL与HR联合应用可稳定大鼠肝组织中MDA的含量，升高SOD和GSH－Px的含量，该结果提示SBOL具有一定的抗氧化作用，其保肝作用与抗氧化有关。研究同时发现，HR合用可降低大鼠肝组织SOD和GSH－Px的含量，然而，SOD和GSH－Px含量的降低是由于HR的合用直接抑制了SOD和GSH－Px的合成，还是由于其增加了自由基的产生，导致SOD和GSHPx的消耗过多，仍有待进一步研究。

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［2］魏伟，吴希美，李元建.药理实验方法学［M］.4版.北京：人民卫生出版社，2010：71.

［3］贾忠，吴晶，马建军，等.一线抗结核药物肝损害的研究现状［J］.中国防痨杂志，2013，35（6）：468－471.

［4］孙真真.抗结核药物肝毒性的研究进展［J］.儿科药学杂志，2013，19（2）：60－63.

［5］冯伟，刘福荣，马传锐，等.结核病患者家属生活质量及其影响因素分析［J］.中南大学学报：医学版，2013，31（10）：1075－1079.

［6］王晓存.基因多态性与抗结核药物所致不良反应的相关性研究［D］.北京：北京市结核病胸部肿瘤研究所，2013.

［7］王涛.细胞色素P450－2E1基因多态性与抗结核药物所致药物性肝损害相关性研究［D］.北京：中国人民解放军军医进修学院，2012.

［8］谢鹏鸣.CYP450－2E1基因多态性与抗结核药物所致肝损害关联研究［D］.新疆：新疆医科大学，2012.

［9］王明媚，周亮，张鑫，等.药物性肝损伤的诊断和防治研究进展［J］.中国药业，2014，23（7）：94－96.

［10］黄明春，陈剑鸿，胡小刚，等.金丝桃苷对CCl＿4诱导大鼠急性肝损伤抗氧化应激研究［J］.局解手术学杂志，2013，22（6）：14－16.