牛大力水提物和醇提物急性毒性实验研究*

杨增艳,周海松,赵湘培,唐瑾,柏春晖

(广西民族医药研究院,南宁 530001)

牛大力水提物和醇提物急性毒性实验研究*

杨增艳,周海松,赵湘培,唐瑾,柏春晖

(广西民族医药研究院,南宁 530001)

目的 对牛大力水提取物和醇提取物的急性毒性进行初步研究。方法通过测定小鼠的最大耐受量(MTD)评价牛大力的安全性。结果牛大力水提取物的MTD＞1 000 g·kg-1,相当于人拟用日剂量的110倍;牛大力醇提物的MTD＞1 700 g·kg-1,相当于人拟用日剂量的186倍。结论牛大力无明显毒性,常用日剂量安全。

牛大力水提物;牛大力醇提物;毒性实验,急性;最大耐受量

牛大力为豆科崖豆藤属美丽崖豆藤(Millettia specisoaChamp)的根,具有补虚润肺、强筋活络等功效。常用于治疗肾虚、气虚、腰酸腿痛、风湿病、慢性肝炎、支气管炎、咳嗽、肺结核等病症[1]。有关该药材的毒性实验研究少见报道。笔者对牛大力的水提物和醇提物进行急性毒性实验研究,结合两种提取物对小鼠体质量方面的影响,对牛大力的安全性做出初步评价,为其进一步开展药效学研究提供理论基础和科学依据。

1 材料与方法

1.1 动物 SPF级昆明种小白鼠80只,雌雄各半,体质量18～22 g。由广西医科大学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(桂)2013-0003,动物质量合格证号:0001757。动物分笼饲养,自由饮水,喂标准颗粒饲料。动物室温度(24±2)℃,相对湿度50%～60%,照明时间随同自然变化。

1.2 药材 牛大力药材采自广西防城。挖出植物根部,洗净,切段晒干备用。经广西民族医药研究院梁定仁主任鉴定为豆科崖豆藤属美丽崖豆藤的根。

1.3 仪器 电子天平(美国双杰兄弟有限公司),恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂)。

1.4 牛大力水提取物的制备 牛大力药材粗粉,加入8倍体积纯化水于不锈钢锅中浸泡45 min后,加热煮沸后调整温度致药液微沸,继续水煮2 h,滤出药液。重复2次,将3次所得滤液合并,浓缩药液至浓度为6.6 g·mL-1,得牛大力水提物。

1.5 牛大力醇提取物的制备 牛大力药材粗粉用75%乙醇10倍量浸泡30 min后,微沸回流煎煮1.5 h,滤渣取汁,重复2次,将3次所得滤液合并,浓缩药液至浓度为21 g·mL-1,得牛大力醇提物。

1.6 预实验情况 随机选取受试小白鼠10只,雌雄各半。实验前禁食12 h,实验动物一次性灌胃3 h后给饲料,自由饮水。观察1 d,记录动物死亡情况。牛大力水提物浓度为6.6 g·mL-1,按40 mL·kg-1小鼠体质量一次性灌胃,无死亡,动物饮食和活动正常;牛大力醇提物浓度为21 g·mL-1,按40 m L·kg-1小鼠体质量一次性灌胃,无死亡,动物饮食和活动正常。预实验结果提示,可进行最大耐受量(maximum tolerated dose,MTD)实验。

1.7 MTD实验 实验前动物禁食12 h,按相当于原药材水提物6.6 g·mL-1、醇提物21 g·mL-1,小鼠口服最大给药量0 mL·kg-1,灌胃给药,水提物1 d内共给药3次(分别于9∶00,13∶00,17∶00),醇提物1 d内给药2次(分别于9∶00,17∶00),空白对照组相应给予0.9%氯化钠溶液。每天观察并记录小鼠的体质量、皮肤毛发、眼和黏膜的变化、四肢活动以及发生中毒和死亡等情况,连续观察14 d,14 d后处死小鼠进行尸体解剖检查。

1.8 统计学方法 用SPSS10.0版统计软件进行统计分析,计量资料用均数±标准差(±s)表示,采用t检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

给药后实验动物均出现不喜动、不思饮食、尿液发黄、便溏等现象,24 h后观察,上述症状消失,各组动物饮食和活动正常,未出现任何中毒症状,无动物死亡。14 d后处死小鼠,肉眼观察心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠及胸腔、腹腔,各器官均无异常。牛大力水提取物MTD＞1 000 g·kg-1,醇提物MTD＞1 700 g·kg-1。以人拟用日剂量为1 g·kg-1来计算,水提物的最大耐受量相当于人拟用日剂量的110倍,而醇提物的最大耐受量相当于人拟用日剂量的186倍。牛大力水提物组给药组对小鼠体质量无影响;牛大力醇提物给药组的小鼠体质量增加量均小于空白对照组,差异有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

表1 牛大力水提物和醇提物对小鼠体质量的影响Tab.1 Effect of water extract and ethanol extract of Radix millettiae speciosae on body weight of mice±s

表1 牛大力水提物和醇提物对小鼠体质量的影响Tab.1 Effect of water extract and ethanol extract of Radix millettiae speciosae on body weight of mice±s

与空白对照组比较,*1P＜0.01Compared with blank control group,*1P＜0.01

体质量/%空白对照组(雄性)组别剂量/ (g·kg-1)小鼠/只/g给药前给药后14 d体质量增加率10 21.33±1.63 31.50±1.87 0.48空白对照组(雌性)0 10 18.67±0.82 27.00±0.89 0.45牛大力水提物(雄性)1 000 10 21.85±1.34 31.77±2.42 0.45牛大力水提物(雌性)1 000 10 19.17±1.03 26.33±1.56 0.37牛大力醇提物(雄性)1 700 10 21.46±1.20 29.61±1.56 0.34*1牛大力醇提物(雌性)1 700 10 21.23±1.64 26.77±1.54 0.30*10

3 讨论

根据《中药药理研究方法学》要求,小鼠最大耐受药量倍数以耐受人用量口服100倍以上(按体质量计算)为安全,可以提供临床应用[2]。实验结果表明,牛大力无论水提物或醇提物的最大给药量均大于成人日用剂量100倍,且受试动物饮食和活动正常,未出现任何中毒症状,无动物死亡,提示牛大力无明显毒副作用。另外,牛大力的醇提物造成小鼠体质量增加量减少的现象,还需结合长期毒性试验和更进一步的药理实验,才能综合分析与评价牛大力的安全性。

[1] 广西壮族自治区卫生厅.广西中药材标准[M].南宁:广西科学技术出版社,1990:31.

[2] 陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京:人民卫生出版社,2006:107-109.

DOI 10.3870/yydb.2014.06.007

Acute Toxicity Study of Water and Ethanol Extracts of Radix Millettiae Speciosae

YANG Zeng-yan,ZHOU Hai-song,ZHAO Xiang-pei,TANG Jin,BAI Chun-hui
(Guangχi Minority Nationality Medical Institute,Guangχi Zhuang Qutonomous Region,Nanning 530001,China)

ObjectiveTo study the acute toxicity of water and ethanol extracts ofRadiχmillettiae speciosae.MethodsThemaximum tolerated dose(MTD) of water and ethanol extracts ofRadiχmillettiae speciosaeweremeasured for the safety evaluation.ResultsMaximal tolerated dose(MTD) of water extractwas higher than 1 000 g·kg-1,which equaled to 110 times the dose for human adults(60 kg).MTD of ethanol extractwas higher than 1 700 g·kg-1,which equaled to 186 times the dose for human adults(60 kg).ConclusionRadiχmillettiae speciosaedoes not have obvious toxicity,thus its routine clinical dose is safe and feasible.

Water extract ofRadiχmillettiae speciosae;Ethanol extract ofRadiχmillettiae speciosae;Toxicity experiment,acute;Maximum tolerated dose

R285

A

1004-0781(2014)06-0721-02

2013-10-20

2013-11-20

*2012年度广西壮族自治区卫生厅中医药科技专项课题(GZPT1231)

杨增艳(1975-),男,壮族,广西南宁人,副主任药师,硕士,主要从事传统医药研究与开发工作。电话:(0) 13517687298,E-mail:yzyan@163.com。