胡颓子叶不同提取物药理活性的比较研究

李广胜，鲁光华，陈 宁，韩永成，刘 伟，黄丽杰

胡颓子（Elaeagnus pungens Thunb.）为胡颓子科胡颓子属植物，别名：卢都子、半含春、甜棒子。中医将其用作平喘药［1］，胡颓子叶收载于1977年版《中国药典》一部，是胡颓子科植物胡颓子的干燥叶［2］，具有止咳平喘、止血、解毒之功效，用于主治肺虚咳嗽、气喘、咳血、吐血、痈疽、痔疮肿痛等症［3－6］。对胡颓子叶不同提取物进行镇咳、平喘、祛痰活性比较，为进一步对胡颓子叶的化学成分及药理活性进行深入研究提供实验依据。

1 材料

1.1 试剂 石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、羧甲基纤维素纳、磷酸组胺、氯化乙酰胆碱、酚红等均为分析纯。

1.2 仪器 HH-S型水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂），岛津UV-220型紫外可见分光光度计（日本），DFZ-01型电热真空干燥箱（黄石市恒丰医疗器械有限公司）。

1.3 药品 试验所用胡颓子叶于2012年购自安徽亳州，由河南中医学院董诚明教授鉴定为：胡颓子叶为胡颓子科胡颓子属植物（Elaeagnus pungens Thunb.）的干燥叶。蛇胆川贝液：广西灵峰药业有限公司，批号：5610011。

1.4 动物 清洁级Wistar小鼠，体质量18～22 g，4～6周，♂♀各半，购自河南省实验动物中心。动物合格证号：scxk（豫）2011－0014。清洁级 Wistar豚鼠，体质量180～220 g，4～6周，♂♀各半，购自河南省康达公司。动物合格证号：scxk（豫）2011－0001。

2 方法

2.1 供试样品的制备 取胡颓子叶粗粉500 g，分别用体积分数为0.95、0.50的乙醇浸泡过夜，回流提取2次，首次加8倍量2 h，第2次加6倍量1 h，合并提取液，回收乙醇，浓缩至无醇味。加入水混匀，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，浓缩至稠膏，得到相应的提取物（即石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组），萃取后残余水溶液减压蒸馏回收溶剂，60℃真空干燥，得到水部位，备用。

2.2 镇咳实验［7］取小鼠60只，随机分为6组。分别为模型组、阳性对照组、石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组、水部位组。各组小鼠均分别灌胃（ig）给药，模型组ig等容量蒸馏水，其中阳性对照给予2.1 ml·kg－1的蛇胆川贝液，其余各组灌胃给予含生药10.8 g·kg－1的胡颓子叶不同提取物的药液，给药容量为20 ml·kg－1。每天给药1次，连续7 d，末次给药1 h后，将小鼠置于烧杯中，另在烧杯内放入一棉球，向棉球中注入0.2 ml浓氨水，迅速将烧杯倒置，让小鼠引发咳嗽。观察并记录小鼠引咳潜伏期，以及小鼠在3 min内的咳嗽次数。

2.3 祛痰实验 取小鼠60只，随机分为6组。分组给药同实验“2.2”。末次给药30 min后，分别给各小鼠腹腔注射质量分数为5%酚红10 ml·kg－1。给予酚红30 min后，颈椎脱臼处死，剥去气管周围组织，取甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有2 ml NaCl的试管中，再加入1 mol·L－1NaOH 0.1 ml，摇匀2 h，使气管色素溶出，用紫外可见分光光度计于波长546 nm处测定。

2.4 平喘实验 取豚鼠若干，逐只放入雾室，恒速、恒量喷入质量分数为2%氯化乙酰胆碱（ACh）和质量分数为0.1%磷酸组胺混合液15 s，观察动物呼吸急促、抽搐及跌倒翻滚时间，以跌倒翻滚时间小于120 s的动物为哮喘合格。将合格动物随机分为6组，每组10只。各组豚鼠均分别灌胃（ig）给药，模型组ig等容量水，其中阳性组给予2.1 ml·kg－1的蛇胆川贝液，其余各组灌胃给予含生药5.94 g·kg－1的胡颓子叶不同提取部位的药液，给药容量为20 ml·kg－1。各组每日灌胃给药1次，连续7 d，末次给药1 h后，依上述方法喷雾引喘，记录豚鼠跌倒翻滚的时间。

2.5 统计学处理 统计数据采用SPSS13.0分析，数值变量将采用¯x±s进行统计学描述，用单因素方差方法分析（One-WayANOVA）。

Tab1 Antitussiveeffectsinmice（¯x±s，n＝10）

3 结果

3.1 镇咳实验 与模型组相比，阳性对照组和乙酸乙酯组对小鼠有明显止咳作用（P＜0.01）；正丁醇组对小鼠咳嗽有显示作用（P＜0.05）。与其余提取物组比，乙酸乙酯组明显有效（P＜0.01）。见 Tab1。

3.2 祛痰实验 与模型组相比，阳性对照组和乙酸乙酯组对小鼠含痰均具有明显的祛痰作用（P＜0.01）；正丁醇组对小鼠含痰具有明显的祛痰作用（P＜0.05），与石油醚组或水部位组比，乙酸乙酯组有效（P＜0.05）。见Tab2。

*P＜0．05，**P＜0．01vsModel；△P＜0.05vsPetroleumether；＃P＜0.05vsWater-part

3.3 平喘实验 与模型组相比，阳性对照组、乙酸乙酯组和正丁醇组对2%氯化乙酰胆碱（ACh）和0.1%磷酸组胺混合液引起的小鼠哮喘均有明显的平喘作用（P＜0.01）。与石油醚组或水部位组比，乙酸乙酯组明显有效（P＜0.01）。与正丁醇组比，乙酸乙酯组有效（P＜0.05）。见Tab3。

Tab3 Protectiveeffectsofdrug-induced breathinginguineapigs（¯x±s，n＝10）

4 讨论

本研究采用3种动物模型，分别为氨水引咳法、气管酚红法、组胺－乙酰胆碱致喘法。结果表明，乙酸乙酯组和正丁醇组对咳嗽、多痰和哮喘均有明显作用，其中镇咳、祛痰作用以正丁醇组为佳，平喘作用以乙酸乙酯组作用明显，而石油醚组和水组均未见明显效果。

本实验从药效学角度证实了胡颓子叶乙酸乙酯组和正丁醇组确有镇咳、平喘、祛痰的作用，为临床用药提供了实验支持。胡颓子乙酸乙酯组和正丁醇组对组胺引起的哮喘模型有一定的平喘作用，由此推测，胡颓子的平喘作用机制很可能是通过抑制对过敏递质的释放来实现的。其祛痰作用可能是通过增强小鼠呼吸道分泌功能实现的。至于发挥上述作用的有效成分及机制尚待进一步深入研究。

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