宫颈脱落细胞HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA在宫颈病变筛查中的应用

周 星，刘丽华，张金库，赵文明，姜 丽，陈 红，周炳娟

(1河北联合大学，河北唐山063000;2保定市第一中心医院)

子宫颈上皮内瘤变(CIN)是宫颈癌的癌前病变。研究发现［1.2］，高危型乳头瘤病毒(HR-HPV)感染、病毒癌基因HPV E6/E7 mRNA表达与宫颈癌发病有关，二者在CIN中阳性率较高。对HR-HPV进行检测可发现宫颈癌早期病变或具有高危因素的人群，已被列为宫颈癌筛检项目之一。2011年8月～2013年9月，我们收治宫颈病变患者301例，现分析其HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA检测结果，探讨其在宫颈病变筛查中的价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集保定市第一中心医院2011年8月～2013年9月门诊及病房收治的宫颈病变患者301例，年龄20～65岁，中位年龄39岁。其中慢性宫颈炎95例;癌前病变190例，其中CIN1 72例，CIN2 58例，CIN3 60例;宫颈鳞状细胞癌16例。将CIN2以上病变定为癌前病变［3］。

1.2 宫颈脱落细胞HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA表达检测 用窥器暴露宫颈后，宫颈细胞专用采样刷插入子宫颈口旋转5周，收集宫颈口鳞柱交界区的脱落上皮细胞，并将刷头部放入装有专用保存液的瓶内并编号。取1/2样本采用HC2法检测HR-HPV DNA，重复检测每份样本两次并取均值，HPV阳性判断标准为RLU/CO＞1.0。剩余1/2样本采用bDNA技术检测HPV E6/E7 mRNA。将样本倒入15 mL离心管，3 000 r/min离心5 min后倒掉上清液;加入2 mL DDH2O，反复吹打或振荡器振荡，使细胞全部混悬，加入300 μL组织裂解液和3 μL蛋白酶K，65℃孵育30 min，加入终止反应液终止反应;制成的细胞悬浮液用宫颈稳态检测试剂盒进行测试，将反应板放入冷光仪，经计算软件自动读取HPV E6/E7 mRNA拷贝数值;重复检测每份样本两次并取均值，以平均拷贝数值(Copies/cell)＞1.0为阳性判断标准。

1.3 观察指标

1.3.1 HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA 诊断癌前病变的灵敏性、特异性、阳性预测值 以病理结果为参照，比较HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA的灵敏性、特异性及阳性预测值。

1.3.2 不同年龄者HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA的阳性率 将患者按照年龄分为＜30岁、30～39岁、40～49岁及＞50岁，比较各年龄段患者中两项指标的阳性率。

1.3.3 不同病变程度者HPV E6/E7 mRNA与HRHPV DNA的阳性率 将患者按照病变程度分为CIN1、CIN2、CIN3和宫颈癌四个水平，比较各病变中两项指标的阳性率。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件，数据比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA 诊断癌前病变的灵敏性、特异性、阳性预测值 HPV E6/E7 mRNA的灵敏性、特异性、阳性预测值分别为50.8%(68/134)、85.6%(143/167)、80.2%(97/121)，HRHPV DNA的灵敏性、特异性、阳性预测值分别为79.1%(106/134)、62.9%(105/167)、63.1%(106/168)，HPV E6/E7 mRNA的诊断灵敏性低于HRHPV DNA(P＜0.05)，特异性和阳性预测值高于HPV DNA(P 均 ＜0.05)。

2.2 不同年龄受检者HPV E6/E7 mRNA与HRHPV DNA的阳性率比较 在30岁以下与30～39岁的受检者中HPV E6/E7 mRNA的阳性率低于HR-HPV DNA(P均＜0.05);在40～49岁及50岁以上的受检者中二者阳性率差异无统计学意义。30岁以下的受检者HPV E6/E7 mRNA阳性率最低，HR-HPV DNA的阳性率最高;随着年龄增加，HPV E6/E7 mRNA阳性率有逐渐升高趋势，HR-HPV DNA的阳性率逐渐降低。见表1。

表1 不同年龄者HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA的阳性率比较(%)

2.3 不同病变程度受检者HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA的阳性率比较 CIN2、CIN3和宫颈癌者HPV E6/E7 mRNA阳性率高于慢性宫颈炎者，且CIN3者高于CIN2者(P均＜0.05);CIN1、CIN2、CIN3及宫颈癌患者HR-HPV DNA的阳性率高于慢性宫颈炎患者(P均＜0.05)，CIN2与CIN3者中阳性率无统计学差异。见表2。

表2 不同病变程度者HPV E6/E7 mRNA与HR-HPV DNA的阳性率比较(%)

3 讨论

HR-HPV 是宫颈癌感染的主要诱因［4，5］，但只有少数感染会发展成恶性疾病，原因是恶性肿瘤的发展需要E6和E7癌基因在整合的HPV基因组中表达［6，7］。两个病毒癌基因通过钝化肿瘤抑制蛋白p53和pRb［8］促进不规则细胞的生长，导致宿主细胞癌变，若没有表达E6和E7基因，细胞自身不会发生恶性转化［9］，而此时宿主可能已感染了 HRHPV，其DNA检测显示为阳性。本研究发现，与HR-HPV DNA相比，HPV E6/E7 mRNA表达对CIN2［10，11］有更高的特异性和阳性预测值，但灵敏性较低，提示HPV E6/E7 mRNA比HR-HPV DNA准确度更好［12］。在临床应用中，CIN1患者可行HPV E6/E7 mRNA检测来预测癌变风险，阳性者可积极采取治疗措施;对于宫颈癌术后患者，可检测阴道残端HPV E6/E7 mRNA预估风险，选择随访间隔时间，预防复发。由于HPV还与直肠癌、食道癌、阴道癌等的发生发展有关，HPV E6/E7 mRNA阳性要考虑导致阴道断端复发的可能［13］，应做好这方面的随访。本研究结果显示，40岁以下者HR-HPV DNA的感染率高达50%，但HPV E6/E7 mRNA的检出率较低，说明此年龄段大部分HPV感染可以消退，只有少部分有恶性进展的风险;对于40岁以上妇女的HPV E6/E7 mRNA检测相对更有意义。随着年龄增加，HR-HPV DNA的阳性率有降低趋势，HPV E6/E7 mRNA的阳性率逐渐升高，40岁以上者中二者阳性率相近且差异无统计学意义，说明年龄较大者感染HPV后进展为恶性病变的风险相对较大，应尽早采取措施。HPV E6/E7 mRNA的阳性率在CIN1和CIN2者间差异有统计学意义，而HR-HPV DNA无统计学意义，说明对诊断为不典型鳞状上皮(ASC-US)或低度上皮内病变(LISL)的患者，HPV E6/E7 mRNA检测能更加准确地提示病毒感染进展情况。根据病毒基因是否整合入宿主基因组中，可判断HPV E6/E7基因产物的表达状态，以提高宫颈疾病的筛查效率。

综上所述，HPV E6/E7mRNA检测相对HRHPV DNA检测特异性及阳性预测值较高，有望成为宫颈疾病筛查更好的指标，对宫颈癌的预防、治疗及降低宫颈癌发病率和病死率具有积极意义。

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