Snail和SRF在人恶性脑胶质瘤中的表达及其与微血管密度的关系

华海侠，董玉宝，王晓华，姚 薇，王 玲，付占昭＊，顾 涛，赵 敏

（秦皇岛市第一医院1.肿瘤内科；3.老年病科；4.急诊科；5.病理科，河北秦皇岛066000；2.抚宁县人民医院肿瘤科，河北秦皇岛066300）

Snail和SRF在人恶性脑胶质瘤中的表达及其与微血管密度的关系

华海侠1，董玉宝2，王晓华3，姚 薇1，王 玲4，付占昭1＊，顾 涛1，赵 敏5

（秦皇岛市第一医院1.肿瘤内科；3.老年病科；4.急诊科；5.病理科，河北秦皇岛066000；2.抚宁县人民医院肿瘤科，河北秦皇岛066300）

胶质瘤是神经系统常见肿瘤，手术和传统放化疗手段效果不佳［1］。胶质瘤的发生机制尚未完全阐明，但是目前认为肿瘤细胞获得侵袭和转移的能力，以及产生放化疗耐药能力是肿瘤复发和生存率低的分子基础［2］。本研究通过检测锌指蛋白转录因子Snail和血清反应因子（SRF），观察二者与微血管密度（MVD）之间的关系，为探讨胶质瘤发生机制提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 临床标本 收集秦皇岛市第一医院2010年6月至2012年6月间手术切除，经病理确诊的脑胶质瘤石蜡标本80例，并按照2007年WHO中枢神经系统肿瘤分类及分级标准复诊并进行病理组织学分级，其中Ⅰ级5例，Ⅱ级32例，Ⅲ级25例，Ⅳ级18例。对照组脑组织15例，均来自癌旁正常脑组织。

1.2 方法 所有石蜡切片均常规行HE染色，均由2名病理科医师分别进行组织学观察，5μm连续切片，分别行Snail、SRF和CD34免疫组织化学染色，抗体浓度均为1∶100，采用枸盐酸热修复，实验中分别设立阴性对照和阳性对照。

1.3 结果判定 由2名病理科医师独立阅片，在400倍视野下观察10个视野，每视野计数100个细胞，计算阳性细胞百分比，按照以下4级进行计分：0分：阳性细胞数＜10%；1分：10%－25%；2分：26%－50%；3分：51%－75%；4分：＞75%。染色强度评分标准：无色0分；淡黄色1分；棕黄色2分；棕色或棕褐色3分。以两者乘积作为阳性评判标准，其中4分以上定义为阳性。CD34表达以血管内皮细胞胞浆棕黄色着色，计数标准为：棕黄色的单个、数个内皮细胞可计数为1个血管，计数5个不连续高倍视野内的微血管数，取其平均值作为该病例的微血管密度值。

1.4 统计学处理 用SPSS13.0进行统计，不同组别间比较采用χ2检验，MVD两组间采用t检验，相关性分析采用spearman相关系数法，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 Snail、SRF在两组中的表达 Snail、SRF在胶质瘤中阳性表达率分别为70.00%、45.00%，显著高于对照组的26.67%、13.33%，两组间比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 CD34染色结果及MVD测定 胶质瘤组织中血管壁CD34免疫组织化学染色呈棕黄色，微血管形态呈芽状、管状、条索状。脑胶质瘤组中MVD值为42.12±12.18，显著高于对照组的13.14±3.26，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 Snail、SRF、MVD在脑胶质瘤中表达的临床意义 如表2所示，Snail、SRF、MVD在脑胶质瘤中的差异表达，与性别、年龄、肿瘤大小均无关（P＞0.05）；而与肿瘤级别和1年复发率密切相关，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 Snail、SRF在对照组及脑胶质瘤组中的表达

表2 Snail、SRF和MVD在脑胶质瘤组织中表达的临床意义

2.4 Snail、SRF与MVD在脑胶质瘤组织中表达的相关性分析 Snail阳性组MVD值为48.24± 14.73，显著高于阴性组的38.12±7.45，差异具有统计学意义（t＝3.187，P＝0.002）；SRF阳性组MVD值为47.28±10.34，显著高于阴性组的36.38± 9.25，差异具有统计学意义（t＝4.972，P＝0.000）。

3 讨论

研究表明，脑胶质瘤的复发和放化疗耐性与上皮－间质转化（EMT）关系密切［5］。在脑胶质瘤SHG－44细胞中过表达整连素相关蛋白激酶能够诱导Snail蛋白表达上调，细胞获得更强的迁移和侵袭能力。在本研究中发现Snail在胶质瘤组织中高表达，并与肿瘤级别和复发关系密切，提示Snail在胶质瘤中的高表达多提示预后不良。而转录因子SRF在EMT中发挥重要调控作用，能够调控恶性肿瘤的进行性进展，破坏细胞连接，使肿瘤细胞松散获得迁移可能，并能够促进肿瘤细胞增殖，上调基质金属蛋白酶（MMP）－2、－9的表达，使肿瘤细胞更易浸润和侵袭；SRF的转录能够诱导肿瘤细胞获得间质细胞表型，促进迁移和侵袭的能力提高，提示SRF在肿瘤的发生、发展进程中起到了较为重要的调控作用，其对胶质瘤细胞的迁移亦具有重要的调控作用［6］。

［1］Chang L，Su J，Jia X，et al.Treating malignant glioma in Chinese patients：update on temozolomide［J］.Onco Targets Ther，2014，7：235.

［2］Miyazono K，Ehata S，Koinuma D.Tumor－promoting functions of transforming growth factor－βin progression of cancer［J］.Ups J Med Sci，2012，117（2）：143.

［3］Chiang C，Ayyanathan K.Snail／Gfi－1（SANG）family zinc finger proteins in transcription regulation，chromatin dynamics，cell signaling，development，and disease［J］.Cytokine Growth Factor Rev，2013，24（2）：123.

［4］Zhao M，Xu H，He X，et al.Expression of serum response factor in gastric carcinoma and its molecular mechanisms involved in the regulation of the invasion and migration of SGC－7901cells［J］.Cancer Biother Radiopharm，2013，28（2）：146.

［5］Xi H，Hong X，Min Z，et al.Serum response factor is overexpressed in esophageal squamous cell carcinoma and promotes Eca－109cell proliferation and invasion［J］.Oncol Let，2012，5（3）：819.

［6］Ziv－Av A，Taller D，Attia M，et al.RTVP－1expression is regulated by SRF downstream of protein kinase C and contributes to the effect of SRF on glioma cell migration［J］.Cell Signal，2011，23（12）：1936.

2013－07－19）

1007－4287（2014）07－1092－02

＊通讯作者