P53和Ki67在食管癌中的表达及其临床意义

雷 蕾叶 斌王西川

（1 成都市第六人民医院肿瘤科，四川 成都 610051；2 成都市第六人民医院病理科，四川 成都 610051）

P53和Ki67在食管癌中的表达及其临床意义

雷 蕾1叶 斌1王西川2

（1 成都市第六人民医院肿瘤科，四川 成都 610051；2 成都市第六人民医院病理科，四川 成都 610051）

目的 研究P53蛋白、Ki67在食管癌中的表达，探讨其临床意义。方法 采用免疫组化法检测35例食管癌，13例食管炎组织中P53蛋白和Ki67的表达水平，分析其与临床及病理各参数的相关性。结果 P53蛋白、Ki67在食管癌组织中的阳性表达率显著高于食管炎，差异均有统计学意义（P=0.046，P=0.001）。在食管癌组织中P53蛋白的阳性表达率在临床分期、浸润程度、淋巴结转移及组织学分化程度方面有明显差异（P＜0.05），Ki67的阳性表达率仅与食管癌的临床分期和浸润深度有关（P＜0.05），与组织学分化程度和淋巴结转移无关（P＞0.05）。食管癌组织中P53蛋白和Ki67的表达密切相关（P=0.006）。结论 P53蛋白和Ki67与食管癌的发生、发展有关，二者协作检测对判断食管癌恶性程度和预后具有重要的临床意义。

食管癌；P53蛋白；Ki67

食管癌是发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，我国是食管癌高发国家，也是食管癌病死率最高的国家[1]。其发病因素目前还不明确，研究表明，食管癌发生与环境、饮食、遗传、不良生活习惯、遗传等因素关系密切，是多种因素同时作用的结果[2]。影响食管癌预后的因素主要有临床病理分期、浸润程度、生长方式、组织级别以及患者抗肿瘤的免疫能力等。早期诊断和早期手术治疗是根治食管癌和获得长期生存最有效的方法[3]。

食管癌标志物的检测可反映肿瘤的生物学特性，对诊断、治疗及预后具有重要意义。P53基因是重要的抑瘤基因，分为野生和突变两种亚型，是细胞增生的主要负调控子，该基因的突变或缺失是导致许多肿瘤发生的原因。Ki67是1种细胞增殖核抗原，其表达与多种肿瘤的发生、发展、浸润、转移有关。本研究采用免疫组化方法检测食管炎和食管癌组织中P53蛋白和Ki67表达情况，以探讨其临床意义。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集我院普外科2007年4月至2012年4月的35例食管癌手术标本，其中男性20例，女性15例，年龄32～84岁，中位年龄60岁；同时收集食管炎标本13例用于对照，其中男9例，女性4例，年龄37～81岁，中位年龄63岁。标本均经组织病理确诊；患者术前均未接受过放化疗。食管癌患者临床分期按2007版AJCC颁布的食管癌TNM分期标准：Ⅰ期6例，Ⅱ期10例，Ⅲ期11例，Ⅳ期8例。食管癌分化程度：高分化腺癌15例，中分化腺癌12例，低分化腺癌8例。胃癌浸润深度：浸润达黏膜层者18例，浸润未达黏膜层者17例。周围淋巴结转移情况：发生淋巴结转移者19例，未发生淋巴结转移者16例。

1.2 方法

采用免疫组化PV-9000法。所有抗体均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。石蜡包埋，制成4 µm厚的切片。脱蜡、水化组织切片；高压锅抗原热修复；3%H2O2去离子水孵育以阻断内源性过氧化物酶；滴加一抗，4 ℃过夜；PBS冲洗，滴加聚合酶辅助剂，37 ℃孵育20 min；PBS冲洗后滴加辣根酶标记山羊抗小鼠IgG多聚体，37 ℃孵育30 min；应用DAB溶液显色；自来水冲洗、复染、脱水、透明、封片。

1.3 结果判断

于显微镜下观察，每例观察2张切片，每张切片随机选择10个高倍视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，取其平均值为细胞的阳性率。P53的结果判断：细胞核呈现清晰的棕黄色颗粒为阳性，按阳性细胞所占的比例及显色深度分为，阳性细胞数所占比例＜10%为阴性(-)；10%～25%为弱阳性(+)，显色浅，颗粒细；26%～50%为中度阳性(++)，显色较深；＞50%为强阳性(+++)，显色深，颗粒粗。Ki67的结果判断与P53同。

1.4 统计处理

采用SPSS19.0统计软件进行χ2检验和相关性分析。

2 结 果

2.1 癌组织与食管炎组织中P53和Ki67的表达及比较

免疫组化的结果显示，P53蛋白和Ki67主要表达于细胞核。35例食管癌标本中P53蛋白和Ki67表达阳性率分别为37.14%（13/35）和74.29%（26/35）；13例食管炎标本中P53蛋白和Ki67表达阳性率分别为7.69%（1/13）和23.08%（3/13）；二者比较，差异有统计学意义（表1）。

表1 食管癌组织和食管炎组织中P53蛋白和Ki67的表达[n（%）]

表2 食管癌组织和食管炎组织中P53蛋白和Ki67的表达[n（%）]

2.2 食管癌组织中P53和Ki67蛋白表达与临床病理特征的关系

35例食管癌中，P53蛋白的阳性表达与临床分期、浸润深度、淋巴结转移和组织学分化程度有关（P＜0.05）。Ki67的阳性表达与临床分期和浸润深度有关（P＜0.05）；但与淋巴结转移和组织学分化程度无关（P＞0.05）（表2）。

2.3 食管癌组织中P53和Ki67蛋白表达之间的关系

35例食管癌中，P53和Ki67蛋白同为阳性者13例，同为阴性者9例，二者之间呈显著相关（r=0.452，P=0.006），（表3）。

表3 P53和Ki67在食管癌组织中表达的相关性分析（例）

3 讨 论

P53蛋白是重要的细胞生长负调节因子，P53基因突变导致对细胞周期的调节功能丧失，使细胞异常增殖和恶性转化[4]。它与细胞周期蛋白（cyclins）结合形成复合体，抑制依赖细胞周期蛋白的相关激酶（CDKs）活性，使细胞停滞在G1期或引起细胞程序性死亡，从而消除可能癌变的异常细胞[5]。P53基因大约有50%[6]的突变率，当P53基因发生突变时，可导致稳定的蛋白质不能完成抑制细胞增殖的作用，并且促进细胞恶性转化，使P53基因由抑癌基因转为原癌基因[7]由于野生型P53蛋白代谢不稳定，半衰期仅20～30 min，且细胞内含量低，因此，用免疫组化方法不能检出；突变型P53蛋白半衰期延长(数小时)[8]，细胞核内出现突变型P53蛋白的集聚，因而用免疫组化方法能够检出[9]。本研究结果显示，P53蛋白在食管癌组织的阳性表达率为37.14%，明显高于食管炎组织，结果与王斌等[10]相符。李华川等[11]及夏长华等[12]报道肿瘤细胞分化越差、浸润范围越广，淋巴结阳性，P53表达水平就越高。在本研究中，蛋白P53的阳性表达与浸润深度、淋巴结转移和组织学分化程度有关（P＜0.05），与上述报道相符，且蛋白P53在Ⅲ、Ⅳ期的阳性表达显著高于Ⅰ期和Ⅱ期(P＜0.05)。上述结果提示P53突变与肿瘤的发生、发展，恶性细胞的侵袭、转移密切相关。

Ki-67抗原是Gerdes等于1983年发现的在增殖细胞中表达的一种核抗原，也是目前较为肯定的核增殖标志。主要功能与细胞合成代谢有关。除了G0期和G1早期外，其他各期均有此抗原表达，M期达到高峰[13]。已有研究显示，Ki-67抗原与肺癌、淋巴瘤、乳腺癌、头颈部癌、消化道肿瘤等密切相关，可能与这些肿瘤的发生、发展、分级、分期、浸润和转移、复发及预后等各方面均有相关性[14,15]，可作为诊断、预测疗效和预后等方面的标志物。

本研究中，Ki67抗原在食管癌组织的阳性表达率为74.29%，明显高于食管炎组织，有显著统计学差异（P＜0.05）。Ki67的阳性表达在不同临床分期和浸润深度的食管癌标本中差异有统计学意义（P＜0.05）；而在食管癌有无淋巴结转移和不同组织学分化程度，差异无统计学意义（P＞0.05）。以上结果提示Ki67对鉴别食管癌及食管炎有重大的意义，且与食管癌的诊断及预后有一定的相关性。

综上所述，食管癌中P53及Ki67基因表达上调，与食管癌的发生、发展密切相关，将二者作为生物标志物进行联合检测，有利于对食管癌患者恶性程度及预后的评估。

[1] 朱俊宇,雷君,高尚兰.乌鲁木齐地区食管癌危险因素的病例对照研究[J].新疆医科大学学报,2009(10):1434-1435.

[2] Parkin DM,Bray F,Ferlay J,et a1.Globalcancer statistics 2002[J]. CA Cancer J Clin,2010,55(2):74-108.

[3] 毛友生,赵晓航,张德超,等.食管癌肿瘤标志物研究进展[J].世界华人消化杂志,2002(11):1321-1323.

[4] 潘晓琳,高志斌,陆天才,等.卵巢癌中k-ras基因点突变及p53蛋白表达[J].临床与实验病理学杂志,2005,21(1):66-69.

[5] 王喜梅,罗光霞,张雪梅,等.宫颈腺癌HPV18/18感染与ki67、p53蛋白表达的关系[J].实用癌症杂志,2009,24(1):22-25.

[6] Vikhanskaya FD,Incalci M,Broggini M.P73 competes with P53 and attenuates its response in human ovarian cancer cell line[J]. Nucleic Acids Res,2000,28(2):513-519.

[7] 于永亮,尚亚非.P53蛋白表达对结肠癌术后肿瘤复发转移预后的关系[J].实用医技杂志,2007,14(36): 5014-5015.

[8] 周桥,杨光华.p53研究的一些新进展[J].中华病理学杂志,1995, 24(2):267.

[9] Toshikats U,Fumio I,Yokosuka O,et al.Expression of p53 andp21/WAFI proteins in gastric and esophageal cancer comparion with mutation of the p53 gene[J].Dig Dis Sci,1998,43(2):279.

[10] 王斌.HPV感染与P53在食道癌患者中的表达意义及临床观察[J].辽宁医学院学报,2013,34(3):62-63.

[11] 李华川,陆士新.食管庙和责门癌组织中p53基因突变的研究[J].中华种瘤杂志,1994,16(3):172-176.

[12] 夏长华,胡巧英,姚伟强,等.P53在食管癌中的表达及其临床意义[J].中国癌症杂志,1996,6(4):243-245.

[13] 陈燕昌,林舜国,郑宇辉,等.乳腺癌ki67抗原和DNA倍体的相关性及临床意义[J].福建医科大学学报,2005,39(1):48-49.

[14] 李维嘉,李建秋.K-i67和FasL在食管癌中的表达及意义[J].实用医药杂志,2003,20(5):361-362.

[15] 黄宇,胡晓桦,刘志辉.Ki-67表达与鼻咽癌、乳腺癌化疗疗效及预后的临床分析[J].中华临床医师杂志,2013,7(2):641-645.

Expression of P53, Ki67 in Esophageal Cancer and Its Clinical Significance

LEI Lei1, YE Bin1, WANG Xi-chuan2
(1 Department of Oncology, Sixth People’s Hospital of Chengdu, Chengdu 610051, China; 2 Department of Pathology, Sixth People’s Hospital of Chengdu, Chengdu 610051, China)

Objective To investigate the expression of protein P53 and Ki67 in esophageal cancer and analyze its clinical significance. Methods The expression of P53 and Ki67 in esophageal cancer of 35 cases and esophagitis of 13 cases were detected through immunohistochemistry, respectively. The relationship between theirs clinical and pathological parameters was analyzed. Results The expression rate of protein P53 and Ki67 in 35 cases of esophageal cancer were significantly higher than that in esophagitis, the difference was statistically significant among two groups (P=0.046,P=0.001). In esophageal cancer, the results showed that there was significant difference of expression of protein P53 between the depth of invasion, lymph node metastasis, clinical staging and the degree of differentiation（P＜0.05). While the expression of Ki67 was only significantly associated with the depth of invasion (P=0.042) and clinical staging (P=0.025). But it was not associated with the degree of differentiation and lymph node metastasis (P＞0.05). The positive expression of protein P53 and Ki6 were closely related（P=0.006）. Conclution The expression of P53 and Ki67 were associated with the occurrence and development of esophageal cancer. Therefore, The two joint detection had important clinical value to predict the degree of malignancy and prognosis of esophageal cancer.

Esophageal cancer; P53 protein; Ki67

R735.1

B

1671-8194（2014）19-0010-03