产蛋鸡免疫程序对卵黄抗体效价的影响

藏玉婷 张杨 王彬 宋扬 孙德君 丁国杰

摘 要：试验用小鹅瘟免疫原按8种免疫程序接种120日龄产蛋鸡，分别在接种后不同时间琼脂扩散试验试验检测卵黄抗体效价，筛选出最佳免疫接种程序。基础免疫，产蛋鸡每只肌肉注射小鹅瘟活疫苗1.0 mL（5羽份）；在基础免疫后14 d进行第2次接种，加强免疫，产蛋鸡每只肌肉多点注射小鹅瘟灭活疫苗2.0 mL；在加强免疫后14 d进行第3次接种，强化免疫，产蛋鸡每只肌肉多点注射小鹅瘟灭活疫苗3.0 mL。

关键词：卵黄抗体；抗体效价；产蛋鸡；免疫程序

鸡卵黄免疫球蛋白（Immunoglobulin of Yolk，IgY）是母鸡受到免疫刺激后选择性将其血清中相应的特异性IgG转移至卵黄中并蓄积而成的[1]。目前在IgY的形成、生物学特性等方面已研究得比较清楚，并且IgY作为诊断试剂和防治药物的研究愈来愈受到关注[2-3]。为此，本实验将产蛋鸡按不同免疫程序接种免疫原，通过比较抗小鹅瘟IgY效价高低来确定鸡群免疫程序，现将试验结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 小鹅瘟免疫原 小鹅瘟活疫苗（GD株），疫苗批号GD201001；小鹅瘟灭活疫苗（H株），疫苗批号H201001；上述两种疫苗均由哈药集团生物疫苗有限公司制备。

1.1.2 试验用产蛋鸡 120日龄产蛋鸡420只，由哈药集团生物疫苗有限公司实验动物中心提供；达到《生产用产蛋鸡质量标准》要求。

1.1.3 小鹅瘟阳性血清 东北农业大学王君伟教授惠赠。

1.1.4 小鹅瘟琼扩抗原 参照“小鹅瘟诊断技术” [4]的方法制备。

1.2 方法

1.2.1 试验分组 将400只产蛋鸡分成8组，每组50只。同时另设健康对照20只，隔离饲养。

1.2.2 免疫程序设定 基础免疫，其中4组产蛋鸡每只肌肉注射小鹅瘟活疫苗1.0 mL（5羽份），另外4组产蛋鸡每只肌肉注射小鹅瘟灭活疫苗1.0 mL；加强免疫，在基础免疫后14 d进行第2次接种，产蛋鸡每只肌肉多点注射不同剂量小鹅瘟灭活疫苗；强化免疫，在加强免疫后14 d进行第3次接种，产蛋鸡每只肌肉多点注射不同剂量小鹅瘟灭活疫苗，对照组与试验组同时进行生理盐水注射，具体免疫程序见表1。

1.2.3 抽样 分别于基础免疫前、加强免疫前、强化免疫前和强化免疫后14 d 4个时间点采集鸡蛋，每个时间点从不同组分别收集鸡蛋10枚，打蛋分离卵黄，无菌混合卵黄液各10 mL作为待检样品，用于抗体效价测定。

1.2.4 抗体效价测定 在8.0%氯化钠溶液100 mL中加入1 g优质琼脂粉，加热融化后，加入终浓度为0.01%硫柳汞防腐，浇制凝胶板。在其上按中央1孔外围6孔打孔，孔径5 mm，间距3 mm。将抗体作2倍系列稀释后进行试验，抗原及其抗体加样量以孔满为度（约25 μL），加样后置37～38℃湿盒孵育24～48 h。当阴、阳性血清对照成立时，与标准抗原形成白色沉淀线的抗体最大稀释倍数即为卵黄抗体的效价。

2 结果

2.1 不同时间点抗体测定结果

8组免疫程序接种产蛋鸡后不同时间点，琼脂扩散试验检测卵黄抗体效价，基础免疫中小鹅瘟活疫苗（GD株）的免疫效果优于小鹅瘟灭活疫苗（H株）的免疫效果，而在以活苗作为基础免疫的试验组中，第4组=第3组>第2组>第1组。第4组和第3组抗体效价无差异，确定第3组免疫程序为小鹅瘟卵黄抗体最佳免疫程序（表2）。

2.2 小鹅瘟卵黄抗体最佳免疫程序

小鹅瘟卵黄抗体最佳免疫程序详见表3。

3 讨论

用小鹅瘟免疫原按不同免疫程序接种120日龄产蛋鸡，8组免疫程序接种产蛋鸡后不同时间点卵黄抗体效价检测，基础免疫中小鹅瘟活疫苗（GD株）免疫后14 d，琼扩效价达到1∶8，而基础免疫中小鹅瘟灭活疫苗（H株）免疫后14 d，琼扩效价只达到1∶4，因此基础免疫中小鹅瘟活疫苗（GD株）的免疫效果优于小鹅瘟灭活疫苗（H株）的免疫效果；而在以活苗作为基础免疫的试验组中，加强免疫多点注射小鹅瘟灭活疫苗2.0 mL 优于1.0 mL；强化免疫接种3.0 mL与4.0 mL免疫效果相同，考虑到节约疫苗用量以及避免免疫抑制问题，因此，加强免疫选择肌肉多点注射小鹅瘟灭活疫苗3.0 mL。通过比较接种后不同时间卵黄抗体效价，确定小鹅瘟卵黄抗体免疫程序为：基础免疫接种，产蛋鸡每只肌肉注射小鹅瘟活疫苗1.0 mL（5羽份）；加强免疫接种，在基础免疫后14 d进行第2次接种，产蛋鸡每只肌肉多点注射小鹅瘟灭活疫苗2.0 mL；强化免疫接种，在加强免疫后14 d进行第3次接种，产蛋鸡每只肌肉多点注射小鹅瘟灭活疫苗3.0 mL。■（编辑：狄慧）

参考文献：

[1] Peterson R. Antibody production and transfer to egg yolk in chicken [J].Immunol.1962，89：272.

[2] 张玲，蒙永祥，等.鸡蛋黄免疫球蛋白IgY的特性及其应用[J].新中医，2003（4）： 78-79.

[3] 罗函禄.高免卵黄抗体的应用及其展望（二）[J].江苏农业科学，1997（6）： 59-60.

[4] 中国标准出版社第一编辑室编. 动物防疫标准汇编[M].北京：中国标准出版社，2004，473-478.