超声集成双水相提取一枝蒿中总生物碱及抗氧化活性

张倩　解成喜

摘要 [目的]优化超声提取法和双水相体系相结合提取一枝蒿总生物碱的工艺，对一枝蒿总生物碱抗氧化活性进行研究。[方法]采用丙醇-硫酸铵双水相体系与超声波集成提取一枝蒿中总生物碱，以酸性染料比色法测定含量；通过考察对·OH清除和O2-·抑制能力来评价一枝蒿总生物碱抗氧化能力。[结果]一枝蒿总生物碱最佳的提取条件为：硫酸铵用量8 g，丙醇用量25 ml，醇水比0.60∶1条件下超声提取60 min；在此条件下，一枝蒿中的总生物碱平均提取量0.436 mg/g。当总生物碱浓度为200 μg/ml时，对·OH清除率达到67.65%，对O2-·抑制率达30.92%。[结论]该方法建立了一枝蒿总生物碱提取的最佳工艺，发现总生物碱具有良好的抗氧化活性。

关键词 超声波；双水相；总生物碱；一枝蒿；抗氧化活性

中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）13-03851-03

Abstract [Objective] To optimize the extraction process of total alkaloids from Artemisia rupestris by ultrasonic coupled with aqueous two phase system， to study antioxidant activity of total alkaloids. [Methods] Total alkaloids was extracted from Artemisia rupestris using propanolaqueous ammonium sulfate two phase system coupled with ultrasonic and the concentration of total alkaloids was determined with acid dye colorimetric method. Antioxidant activities were evaluated by capacity of total alkaloids for clearing ·OH and controlling O2-·. [Results] The optimum condition was 8.0 g ammonium sulfate， 25 ml propanol， 0.60∶1 propanol/water ratio， 60 min of extraction， 0.436 mg/g extraction rate of total alkaloids. When the concentration of total alkaloids was 200 μg/ml， the scavenging rate of ·OH was 67.65%， and the suppression ratio of O2-· was 30.92%. [Conclusion] The optimum extraction process of total alkaloids from Artemisia rupestris was obtained and the total alkaloids have good antioxidant activity.

Key words Ultrasonic； Aqueous twophase； Total alkaloids； Artemisia rupestris； Antioxidant activity

一枝蒿系菊科为多年生草本植物，药用全草，具有清热解毒、抗过敏、利胆和解蛇毒等功效，用于治疗消化不良、腹胃胀痛、蛇咬伤、荨麻疹、感冒发烧和肝炎等疾病[1]。生物碱是生物体内一类重要的含氮的有机化合物，其大多数具有生物活性，是许多药用植物的有效成分[2]。双水相具有操作简便、条件温和、提取率高、有机溶剂易于回收等优点，已经广泛应用于天然产物、医药、生物以及金属离子分离等领域[3-6]。试验将超声提取与双水相分离技术集成，将超声良好的提取作用与双水相体系的分离作用相结合，采用超声集成双水相体系的提取一枝蒿总生物碱，优化出一枝蒿总生物碱的最佳提取工艺，并以酸性染料比色法测定其含量，对一枝蒿总生物碱进行体外抗氧化活性研究，以期为一枝蒿开发利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1

研究对象。一枝蒿，用蒸馏水洗净后自然阴干，粉碎后过筛备用。

1.1.2

主要仪器。AL204电子天平，购自梅特勒-托利多仪器有限公司；KQ5200B超声波仪，购自昆山市超声仪器有限公司；T6新世纪紫外可见分光光度计，购自北京普析通用仪器有限责任公司；RE-52A型旋转蒸发仪，购自上海亚荣生化仪器厂。

1.1.3

主要试剂。盐酸小檗碱，购自中国药品生物药品生物制品检定所；正丙醇、硫酸铵、三氯甲烷、甲醇、浓氨水、磷酸氢二钠、柠檬酸、溴百里香草酚蓝，硫酸亚铁、过氧化氢、邻二氮菲、磷酸二氢钠、Tris-HCl缓冲溶液（pH 8.2）和焦性没食子酸均为分析纯，市售。

1.2 方法

1.2.1

标准溶液的制备。称取盐酸小檗碱20 mg，用适量无水甲醇溶解，移入250 ml容量瓶中配制成浓度为0.08 mg/ml标准溶液。将0.08 mg/ml标准溶液配制成浓度分别为8、16、32、64和80 μg/ml的盐酸小檗碱标准溶液。

1.2.2

线性关系的考察。分别准确移取浓度为8、16、32、64和80 μg/ml的盐酸小檗碱标准溶液1.0 ml于25 ml具塞试管中，加入pH=7.6的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液10.0 ml、溴百里香草酚蓝溶液2.0 ml以及三氯甲烷10 ml，剧烈摇试管2 min，移至分液漏斗中静置90 min，在波长417 nm处测定吸光值。以吸光度A为纵坐标，盐酸小檗碱质量浓度C（μg/ml）为横坐标进行线性回归，计算回归方程为：Y=0.005 16X+0.081 27，R=0.999 5，线性范围在8～80 μg/ml内线性良好。

1.2.3

新疆一枝蒿总生物碱提取液的制备与测定。准确称取一枝蒿粉末1.000 g于硫酸铵和丙醇双水相体系中，在一定条件下超声提取，抽滤后将提取液于分液漏斗中静置分层，取上层丙醇提取层旋转蒸发得浓缩液，用盐酸调节浓缩液pH为2～3，静置过夜，过滤后再用浓氨水调节pH为9～10后，用30 ml三氯甲烷分3次萃取，取三氯甲烷萃取层旋转蒸发除去三氯甲烷，用无水甲醇溶解后定至10 ml容量瓶中。准确移取样品提取液1.0 ml于25 ml具塞试管中按上述操作测定吸光度，并计算总生物碱含量。

1.2.4

单因素试验。以盐用量、丙醇用量、醇水比、超声时间4个因素进行单因素试验。单因素试验因素水平见表1。

3 结论

试验采用超声集成双水相体系提取一枝蒿总生物碱，考察了盐用量、丙醇用量、醇水比和提取时间对一枝蒿总生物碱提取量的影响。正交试验确定了新疆一枝蒿总生物碱的最佳提取工艺条件为硫酸铵用量8 g、丙醇用量25 ml、醇水比0.60∶1，超声提取60 min；在此条件下的总生物碱的平均提取率为0.436 mg/g。体外抗氧化活性研究表明，一枝蒿总生物碱具有一定清除·OH和抑制O2-·能力。当一枝蒿总生物碱浓度为200 μg/ml时，·OH清除率为67.65%，对·O2-抑制率达30.92%。试验采用超声波集成丙醇-硫酸铵双水相体系萃取一枝蒿总生物碱，具有分离操作简单、条件温和、成本低和污染小等优点。

参考文献

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