原子吸收分光光度法测定杆菌肽锌预混剂的锌含量

余德照等

摘 要：本文阐述利用锌元素的特征谱线（锌原子从基态到激发态在213.8 nm处有最大吸收），创建了原子吸收法测定杆菌肽锌预混剂中锌的含量，并对方法进行了验证。结果表明，该方法在锌离子浓度为0.25～1.00 μg/mL的范围内，浓度与吸光度之间具有良好的线性关系，回归方程为y=0.401x+0.0437 相关系数r=0.9975，且精密度高、平均回收率为100.1% RSD=2.0%。

关键词：杆菌肽锌预混剂；测定；锌含量；原子吸收

杆菌肽锌由锌与杆菌肽络合而成，主要以杆菌肽锌预混剂的制剂形式在饲料中使用，有效成分为杆菌肽，其作用主要是抑制革兰氏阳性菌的生长。锌与杆菌肽络合，有利于增加杆菌肽的稳定性，因此锌在本品的含量显得尤为重要。中华人民共和国兽药典[1]、欧洲药典 （EP[2]）及USP药典 [3]中只有对杆菌肽锌原药中有锌含量测定方法。本实验参照USP药典35版“杆菌肽锌”的原子吸收分光光度法，建立了杆菌肽锌预混剂的锌含量原子吸收分光光度测定法，并对方法进行了验证。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

电子天平（梅特勒-托利多AB135-S型）、搅拌器、原子吸收分光光度计（北京普析通用 TAS-990型）、乙炔（南平金山气体有限公司）、空心阴极灯（北京普析通用）。氧化锌工作基准物（含量：99.95%～100.05% 天津化学试剂研究所）；盐酸（AR. 衡阳市凯信化工试剂有限公司）、15%杆菌肽锌预混剂（批号P120810、P120709、 P120712、P120801绿康生化股份有限公司生产）、10%杆菌肽锌预混剂（批号 P120704、P120706 、P120707绿康生化股份有限公司生产）。

1.2 试剂

1 mol/L盐酸溶液：量取90 mL盐酸溶液（AR.）至烧杯中加入900 mL超纯水搅拌均匀，待冷却后移入1 L容量瓶中，少量、多次荡洗烧杯，洗液需全部移入容量瓶中，最后用超纯水定容至刻度，摇匀。

0.01 mol/L盐酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L盐酸溶液移至1 L容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀。

0.001 mol/L盐酸溶液：取1.00 mL的1 mol/L盐酸溶液移至1000 mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度，摇匀。

锌标准储备液：精密称定氧化锌工作基准物3.11 g置于250 mL容量瓶中，加入1 mol/L盐酸溶液80 mL使溶解，冷却，用超纯水稀释至刻度，混匀，制成每毫升含10 mg锌的锌标准储备液。

锌标准中间液：精密吸取锌标准储备液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀释至刻度，混匀，配制成每毫升含100 μg锌的锌标准中间液。

2 方法与结果

2.1 测定方法

利用元素在乙炔焰中被转化为基态原子蒸气，且在一定的浓度范围内蒸气对该元素空心阴极灯发射的特征谱线的吸收强度与被测元素含量成正比的原理，在213.8 nm处测定各锌溶液的吸光值，用外标法定量计算锌含量。按照下式计算：

式中：C为依据标准曲线得出的供试品溶液浓度，单位μg/mL；

W为杆菌肽锌样品重量，单位mg。

2.2供试品溶液制备

取供试品约100 mg，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加入0.01 mol/L盐酸溶解并稀释至刻度，混匀。吸取此溶液1.00 mL移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L盐酸稀释至刻度，混匀，即得。

2.3 锌标准曲线的建立

分别精密吸取锌标准中间液0.25 mL、0.50 mL、0.75 mL、1.00 mL分别移至100 mL容量瓶中，用0.001 mol/L HCL稀释至刻度，混匀，即得0.25 μg/mL、0.50 μg/mL、0.75 μg/mL、1.00 μg/mL的锌标准工作液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L的HCL为空白进行基线校零，在213.8 nm处测定上述各锌标准工作液的吸光度，以锌标准工作液为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。

结果见图1。结果显示：锌标准品工作液浓度为0.25～1.00 μg/mL，线性回归方程为y=0.401x+0.0437，相关系数r=0.9975。

2.4 样品测定范围的确认

精密称定15%杆菌肽锌预混剂供试品（批号P120810）约40 mg、70 mg、100 mg、130 mg、160 mg于100 mL量瓶中，加入0.01 mol/L盐酸溶解并稀释到刻度，混匀。分别吸取此溶液1 ml到100 mL量瓶中，用0.001 mol/L盐酸稀释至刻度，混匀，制得每毫升含4 μg、7 μg、10 μg、13 μg和16 μg的供试品溶液。在乙炔焰中，以0.001 mol/L HCL为空白进行基线校零，测定供试验品溶液吸光度。以供试品称量为横坐标，对应供试品溶液的吸光度为纵坐标，绘制线性曲线。

结果见图2。得到供试品称量范围在40 ～160 mg，回归方程为y=0.0023x+0.0479 相关系数r=为0.9967。

2.5 精密度试验

两分析员在不同天测定，每人每天平行测定6次。结果见表1。单人6次测定结果的RSD分别为0.7%，0.8%，两人12次测定结果的RSD为1.0%。

2.6 加标回收试验

以精密度试验15%杆菌肽锌预混剂供试品（批号P120810）锌测定结果平均值含量6.34%计，准确称取供试品约80 mg置于100 mL容量瓶中，称取3份，依次加入1000 μg/mL的锌标准储备溶液1.00 mL、2.00 mL、4.00 mL至3份供试品中，按2.2方法操作，制备成3份不同浓度的溶液，每个浓度重复测定3次。计算9次加样回收率的RSD。

结果见表2。平均回收率为100.1%，RSD=2.0%（n=9）， 结果表明，该方法的回收率良好。

2.7 样品锌含量测定

按2.2方法操作，测定规格为10%与15%的杆菌肽锌预混剂产品各3批，结果见表3。

3 讨论与结论

中国兽药典中被收录的杆菌肽锌预混剂品种，没有锌含量测定方法，标准文献资料中也只有对杆菌肽锌原药中锌含量有测定方法，本实验室参照USP35版，根据实验室实际情况经过摸索，建立了原子吸收法测定杆菌肽锌预混剂中锌的含量，并对方法进行了线性、精密度、回收率的验证。

验证结果表明，该方法在锌离子浓度为0.25～1.00 μg/mL的范围内，浓度与吸光值之间具有良好的线性关系，回归方程为y=0.401x+0.0437 相关系数r=0.9975，且精密度高、重现性好、平均回收率为100.1% RSD=2.0%。使用该方法测定杆菌肽锌预混剂中锌的含量，可获得准确、可靠的结果。

（编辑：狄慧）

参考文献：

[1] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典[S].2001版一部，2010，103.

[2] European Pharmacopoeia 欧洲药典 （EP） [S].杆菌肽锌，2011，1443.

[3] USP35，Volume2，杆菌肽锌，2012，2297-2298.