高效液相色谱法快速测定植物油中苯并（а）芘残留量

陈永菊

摘要：采用C18（250 mm×4.6mm×5μm）反相色谱柱，在流动相为乙腈：水（88∶12，v/v），流速为1.0 ml/min，激发波长384 nm，发射波长406 nm，柱温35 ℃，进样量10 μl 的条件下，建立高效液相色谱法快速测定植物油中苯并芘残留量的方法。结果：本方法的检出限为0.5μg/kg，加标回收率95%～103%，相对标准偏差RSD≤2.7%。该法具有样品预处理简便，试剂消耗少，分析时间短、精密度高等优点，适用于植物油中苯并芘残留量的高效测定。

关键词：植物油 苯并（а）芘 高效液相色谱

中图分类号：TS20 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2014）06-0033-02

Abstract：A method for determination of benzopyrene in vegetable oil by High Performance Liquid Chromatography was established. Using C18 （250mm×4.6mm×5μm） reversed-phase column， with acetonitrile and H2O （88∶12，v/v） as mobile phase，flow rate was 1.0 ml/min， and excitation wavelength was 384nm and emission wavelength was 406 nm， and column temperature was 35℃， and injection volume was 10 μl. Results： The detection limit was 0.5μg/kg， and the recovery rate arange from 95% to 103%， and relative standard deviation RSD was ≤ 2.7%. This method is simple preparation， reagent consumption， short analysis time， precision advantages for vegetable oils and efficient determination of benzopyrene residues.

Key Words：vegetable oil benzopyrene High Performance Liquid Chromatography

苯并（а）芘（BaP）是一種由五个苯环构成的多环芳烃，是公认的强致癌物之一，已成为当前环境污染中的重要监测物质[1，2，3]。苯并芘能够引起皮肤、肺、食道等部位的肿瘤和癌变，广泛存在于水、大气、土壤、动植物中。植物油中苯并芘的主要来源包括：油料作物在晾晒过程中可能受到苯并芘污染；在浸出阶段温度过高可能产生苯并芘；在油料焙烤时也可能产生苯并芘。目前，我国检测植物油中苯并芘的国标测定方法（GB/T22509-2008）中，操作过程复杂，费时、费溶剂、溶剂毒性大、回收率不稳定、对试剂和人员要求较高等问题，以致我国很多基层检验机构不能很好地用此法对植物油中苯并芘残留进行有效检测。因此，寻求更为准确、快速、简便的检测方法，对植物油中苯并芘残留进行高效的定性定量分析具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 试剂

乙腈、四氢呋喃均为色谱纯（TEDIA）；水为去离子水；滤膜（0.22μm，有机相）；苯并（a）芘标准品购于国家标准物质中心。

1.2 仪器与设备

Agilent1200高效液相色谱仪（配荧光检测器FLD）；涡旋混合器。

1.3 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18色谱柱（250×4.6mm，5μm）；流速：1.0mL/min；流动相：乙腈+水（88+12）；柱温：35℃；进样量：10μL；激发波长384nm；发射波长406[4]。

1.4 样品前处理

准确称取2.0g样品，置于10ml容量瓶中，加入5ml四氢呋喃后，摇匀后用乙腈定容，摇匀后过0.22μm有机滤膜，供HPLC检测分析。

1.5 回收率、精密度及检出限的测定

称取均匀破碎试样约2g，添加定量的BaP标准品，混匀，余下操作按1.3～1.4进行，计算回收率；将浓度为0.01μg/ml的标准样品按最佳色谱条件重复测定6 次并取平均值计算精密度；对添加逐级稀释得低浓度水平的BaP标准品的食用植物油进行测定，得到方法的检出限；采用本方法和国标GB/T22509-2008两种方法，对计算结果进行分析比较。

2 结果与分析

2.1 检测器的选择

BaP在紫外和荧光下都有吸收峰。但荧光检测器只对带荧光基团的物质有响应，因此可有效去除那些不带有荧光基团的杂质对样品测定的干扰，大大提高BaP的检测灵敏度，故本文采用荧光检测器检测。

由于大多数有荧光的化合物在230nm波长下都能被激发，因此在230nm激发波长下选择多波长发射，发现406nm为最佳发射波长，在固定406nm发射波长后选择多波长激发，最终选择激发波长384nm，发射波长为406nm（图1）。

2.2 苯并芘高效液相色谱测定条件

比较了3种流动相，分别为乙腈+水（84+16）、乙腈+水（88+12）、乙腈+水（90+10），发现乙腈+水（88+12）条件下苯并芘和样品中干扰物能达到较好的基线分离；流速为1.0ml/min 时，苯并芘出峰时间约为12.5min，分析时间短，有利于快速分析且峰形较好，基本达到基线分离效果。

2.3 线性关系与检测限

对BaP标准溶液逐级稀释后，配制一系列标准溶液，浓度分别为0.5μg/L、2.5μg/L、5.0μg/L、10μg /L、25μg/L、50μg/L，进样高效液相色谱仪上机测定，以峰面积A对BaP浓度Amt（μg/L）作线性回归方程，A=1.13136927Amt+2.2138403，线性相关系数r=0.99985，线性关系良好，可以依据此方程进行定量分析。根据对添加低浓度水平的BaP样品的测定，以3倍信噪比计算检出限得到，本方法的检出限为0.5μg/kg。

2.4 加标回收率和精密度

为了计算检测方法的回收率和考察本方法的实用性，向大豆油（图2）和花生调和油（图3）2份样品中，分别加入2种不同浓度BaP标样（表1），经样品前处理后，采用HPLC检测。结果显示，选定的样品经处理后，样品中BaP的加标回收率在95%～103%之间，RSD≤2.7%，符合食品检验分析的要求；与国标GB/T22509-2008试验结果对比，结果说明：本方法样品前处理简便，且回收率和精密度均较高，方法高效实用。

3 讨论

该研究建立了利用高效液相色谱法高效快速测定食用植物油中苯并芘残留的方法。试验结果表明，其回收率为95%～103%，最低检出量为2.5μg/kg，符合国标中对食用植物油中苯并芘的检测要求。该法样品预处理简单，试剂消耗少，分析时间短，明显提高了检测效率。且其准确性和精密度好，是测定食用植物油中苯并芘含量的较理想方法。

参考文献

[1]李伟紅，戴廷灿，周瑶敏 等.高效液相色谱法测定熟肉制品中的苯并（α）芘[J].江西农业学报， 2008，20（1）： 86～88.

[2]刘福岭，戴行均.食品物理与化学分析方法[M].北京： 轻工业出版社，1987：41l～425.

[3]Meudec A， Dussauze J，Jourdin M， et al. Gas chromatographic mass spectrometric method for polycyclic aromatic hydrocarbon analysis in plant biota[J].Journal of Chromatography A， 2006， 1108（2）：240-247.

[4]田晓玲，柏云江.高效液相色谱法测定饲料中的苯并（a）芘[J].饲料工业，2005，26（1）： 53～54.