参苈加颗粒质量标准研究

杨天悦 解颖 姜德友

【摘 要】目的：建立参苈加颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法鉴别人参、红景天、淫羊藿；高效液相色谱法对人参皂苷进行含量测定。结果：试验中薄层斑点清晰，阴性对照组无干扰。每袋参苈加颗粒中含人参皂苷总含量不低于99.6mg。结论：本法简便、快速、准确、灵敏，可作为参苈加颗粒质量控制的有效方法。

【关键词】高效液相色谱法；薄层色谱法；参苈加颗粒；人参皂苷。

【中图分类号】R285.5 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）04-2174-02

【Abstract】Objective：To establish the quality standard of Shenlijia Granule. Methods：TLC method of ginseng， rhodiola root， Epimedium； combined with HPLC was used to determine the content of ginsenoside. Result：The TLC spots were clear， without interference of negative control group. Particles with each bag of Shenlijia ginsenoside content of not less than 99.6mg.Conclusion：The method is simple， rapid， accurate， sensitive， can be used as an effective method for quality control of Shenlijia Granule.

【Key words】HPLC；TCL；Ginsenoside；Shenlijia Granule.

參苈加颗粒组方为黑龙江中医药大学姜德友教授在《金匮要略》所载葶苈大枣泻肺汤的基础上结合多年临床经验加减而成。参苈加具有益气温阳、强心利水的功效，主要用于慢性充血性心力衰竭的治疗，临床疗效显著。为有效控制制剂质量，采用薄层色谱法对人参、红景天、淫羊藿进行定性鉴别。用高效液相色谱法检测制剂中的人参皂苷含量，作为控制该制剂的含量指标，为制剂的质量控制提供依据。

1 仪器与试药

20A型高效液相色谱仪、SPD-20A紫外—可见检测器、LCsolution数据处理系统工作站（日本岛津）；Diamonsil -C18（4. 6 mm×200 mm， 5μm ）色谱柱（迪马公司）。

人参皂苷Re、Rb1、Rg1标准品（110754-200822、110704-200420、110703-200726）；淫羊藿标准品（100737-200415），红景天苷标准品（110736-200108），购自中国药品生物检定所；甲醇、乙腈（HPLC级，美国迪马），其余为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1定性鉴别

2.1.1 人参的薄层鉴别[1，2] 分别精密称取人参皂苷Rg1、Re、Rb1标准品，加甲醇制成每1m1各含0.2mg的混合溶液，作为标准品对照溶液。分别取人参药材粉末1g、三批参苈加颗粒样品及阴性样品各5g置索氏提取器中，加三氯甲烷回流加热3小时，药渣挥干残存溶剂，加水0.5ml拌匀润湿后，加水饱和正丁醇10ml，超声45min，吸取上清液，加氨水3倍量，取上层液蒸干加1ml甲醇溶解，作为对照药材溶液。吸取各组溶液各1μl，分别点于同一以0.5%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）10℃以下放置后的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。在日光下，供试品、对照药材与对照品在相应位置上，显相同的橙红色斑点。而阴性对照品色谱中在相同位置处无则此斑点。（图1）。表明本法可将人参与其它成分较好的分离开，专属性好，灵敏度高。

2.1.2 红景天薄层鉴别[1，3] 精密称取红景天苷标准品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。分别取红景天药材粉末约0.5g、 三批参苈加颗粒及阴性对照颗粒各5g，研细精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇10ml，摇匀，称定重量，超声30min，滤过，取续滤液分别作为对照药材溶液、供试品溶液1、2、3，阴性对照溶液。吸取各组溶液10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水（6：3：1：1）的下层溶液为展开剂，展开，展距18cm，取出，晾干，置碘蒸气中熏至斑点显色清楚。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，而阴性对照品色谱中在相同位置处则无此斑点。（图2）。表明本法可将红景天与其它成分较好的分离开，专属性好，灵敏度高。

2.1.3 淫羊藿薄层鉴别[1，4] 精密称取淫羊藿苷标准品2mg，加甲醇溶液定容于2ml容量瓶中，配成每1ml含1mg的淫羊藿苷甲醇溶液，作为对照品溶液。取淫羊藿药材粉末约0.5g，三批参苈加颗粒、阴性对照颗粒各2g， 分别加入乙醇10ml，温浸30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇溶液1ml使之溶解，作为对照药材溶液、供试品溶液1、2、3及阴性对照溶液。吸取各组溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲苯-甲酸-水（10：1：1：1）为展开剂展开。喷以三氯化铝试液后，在紫外光下显相同的荧光斑点，而阴性对照品色谱中在相同位置处无则此斑点。（图3）。表明本法可将淫羊藿与其它成分较好的分离开，专属性好，灵敏度高。

2.2 人参皂苷Rg1、Re、Rb1含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性 色谱柱Diamonsil-C18（4.6mm×200mm，5μm）色谱柱；检测波长为203nm；流速为1.3ml/min；柱温40℃；流动相是乙腈（A）-水（B）梯度洗脱。梯度洗脱程序见表1。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称定在60℃减压干燥4小时的人参皂苷对照品Rg1、Re和Rb1适量，加甲醇制成每1ml含皂苷Rg1、Re、Rb1分别为0.228618mg、0.1936mg、0.2010mg的对照品混合溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 分别取参苈加颗粒三批样品适量，研细，各取0.5g，精密称定，加入70%乙醇溶液100ml，超声提取两小时，过滤，收集滤液，回收溶剂至干，用甲醇溶解转移至25ml容量瓶中，定容，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 对照品来源及纯度测定采用HLPC法测定，检测人参皂苷Rg1、Re、Rb1标准品，纯度符合要求，无杂质峰。（图4）

2.2.5 线性范围的考察及标准曲线的制备精确量取对照品混合溶液2μl、4μl、6μl、8μl、12μl、16μl和20μl，分别注入高效液相色谱仪，绘制标准曲线，计算得出线性回归方程、相关系数R值和线性范围。结果见表2。

2.2.6 精密度考察 精确吸取对照品混和溶液，连续进样5次， 10μl /次，测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1的峰面积。经计算，三种成分峰面积积分值的RSD分别为1.24%，1.56%，1.43%。表明仪器精密度高，稳定可靠。

2.2.7 重现性试验 取供试参苈加颗粒5袋，精密稱定，分别按2.2.3项下的方法操作，平行制备5份样品溶液，分别连续5次，每次进样10μl，测定人参皂苷Rg1，Re，Rb1的峰面积，计算含量。经计算，人参皂苷Rg1，Re，Rb1的RSD分别为1.79%、1.87%、1.56%，表明测定方法重现性良好。

2.2.8 稳定性试验 取供试参苈加颗粒，分别按2.2.3项下的方法操作，平行制备5份样品溶液，测定48h内溶液中人参三种皂苷随时间变化的峰面积积分值，以考察其稳定性。测定结果表明，三个峰面积积分值的RSD分别为1.07%、1.02%、1.36%。

2.2.9 加样回收率试验 精密称取已知含量参苈加颗粒5份，分别加入一定量的人参皂苷Rb1标准品，按2.2.3项下制备样品溶液，定容10ml，进样量20μl，测定人参皂苷Rb1的含量，测得五次加样回收率平均值为99.89%，RSD为1.65%。实验结果表明该测定方法测定结果准确。

2.2.10 参苈加颗粒中人参皂苷的含量测定按2.2.3项下方法操作，制备供试品溶液，测定三批参苈加颗粒中三种人参皂苷的含量，测定结果见表3。复方中人参皂苷色谱图见图5，阴性对照色谱图见图6。

测定结果表明，参苈加颗粒中人参皂苷含量基本稳定，考虑到药材的来源及制剂生产、储藏等因素的影响，在三种人参皂苷总含量平均值的基础上上下浮动20%制定本制剂含量限度，即每克本品中含人参皂苷Rg1不低于4.48mg，Re不低于0.78mg，Rb1不低于3.04mg。皂苷总含量不低于8.3mg。每袋中不低于99.6mg。

3 讨论

人参为方中君药，而人参中主要有效成分为人参皂苷类成分，其中人参皂苷Rg1、Re、Rb1是最能代表人参药理活性物质的成分。可以反应和控制本品的内在质量。因此本质量标准并不单独限定其中某一种人参皂苷的含量，而是将人参皂苷Rg1、Re、Rb1的总含量作为控制制剂的含量标准是非常有意义的。通过以上试验证明本法简便、稳定性强、灵敏度高可作为参苈加颗粒质量控制方法。

参考文献：

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[2] 黎阳，张铁军，刘素香，等.人参化学成分和药理研究进展[J].中草药，2009，40（1）：164-166.

[3] 宋月英，马玉珍，韩慧文，等.红景天属植物化学成分及药理作用的研究进展[J]. 中草药：医学版，2004，35（2） ：235-236

[4] 郭寒.淫羊藿对心血管系统的药理作用[J].山西中医，2009，25（7）：52-53.

作者简介：

杨天悦（1967- ），女，博士研究生。

通讯作者简介：

姜德友 （1960- ），男，教授，博士研究生导师，博士。研究方向：经方治疗内科疑难杂病临床与基础研究。