不同贝母的指纹图谱鉴别研究

闵会 吴健 胡江宁 叶剑锋

摘要 [目的]建立指纹图谱方法，区分与鉴别浙贝母、平贝母、川贝母药材。[方法]采用高效液相色谱法，蒸发光散射检测器。[结果]测定方法稳定可靠，3种贝母测定精密度、重复性RSD均小于5%，同时色谱峰均具有各自的特征性。[结论]该方法稳定可靠，可作为浙贝母、平贝母、川贝母区分与判定的有效途径。

关键词 浙贝母;平贝母;川贝母;HPLCELSD;指纹图谱

中图分类号 S188  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2014）34-12051-02

The Identification of Different Fritillaria Species by Fingerprints

MIN Hui2， WU Jian2， HU Jiangning2， YE JianFeng1

（

1. Zhejiang Conba Drug Discovery & Development Co. Ltd.， Hangzhou， Zhejiang 310052;2. Zhejiang Conba Pharmaceutical Co. Ltd.， Hangzhou， Zhejiang 310052）

Abstract [Objective] To establish a fingerprint determination method to distinguish and identify Fritillariae thunbergii bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus.[Method] HPLC and ELSD were adopted. [Result] The method is reliable， the reproducibility and precision of Fritillariae thunbergii bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus are all less than 5%， and the chromatographic peaks are characterized. [Conclusion] This method is stable and reliable， it can be a good method to distinguish and identify Fritillariae thunbergii Bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus.

Key words Fritillariae thunbergii bulbus; Fritillariae cirrhosae bulbus; Fritillariae ussuriensis bulbus; HPLCELSD; Fingerprint

基金项目 国家科技支撑计划项目（2011BAI04B06）;浙江省重点实验室和中试基地计划项目（2009E10009）;浙江省企业研究院项目（2010E90011）。

浙贝母（Fritillariae thunbergi ibulbus.）为百合科贝母属浙贝母的干燥鳞茎，为传统常用中药之一，被列为著名的“浙八味”之一，其味苦、性寒，有清热润肺、化痰止咳、散结消肿等功效。川贝母（Fritillariae cirrhosae bulbus.）为百合科植物川贝母的干燥鳞茎，是润肺止咳的名贵中药材，具有良好的止咳化痰功效，且能养肺阴、宣肺、润肺而清肺热，是一味治疗久咳痰喘的良药。平贝母（Fritillariae ussuriensis bulbus.）为百合科植物平贝母的干燥鳞茎，有清热润肺、止咳化痰的作用，为一种常用中药，与川贝母、渐贝母同属贝母属，但在药用上有一定差别，3种贝母药材均具有止咳化痰功效，其有效成分均为生物碱类物质。但由于其内在生物碱类成分种类不同，药用上存在一定差别。目前市场上的贝母品种较多，且价格差别大，以川贝母价格最高，存在互相代替或者以伪替真的现象。由于众多原因，从性状、显微、理化上不易将它们区别开，同时采用传统的薄层鉴别法人为影响因素大，重现性不好，无法将三者共性与特性进行良好的展现与区分，故急需建立一种良好的方法将三者进行有效的指认与区分。

高效液相色谱法具有高效、快速、稳定的特点，重现性好，灵敏度高。同時中药材指纹图谱的建立是药材鉴别的新标准，能够全面反映中药材化学成分的种类与数量，从整体上反映中药材的特性。采用高效液相色谱法建立中药材指纹图谱用以鉴定中药材特性，稳定、可靠、重现性高，目前已得到国际公认，亦是未来发展趋势。

1 材料与方法

1.1 试验材料

浙贝母样品来自浙江宁波、磐安、舟山产地，川贝母样品分别购自华东中药饮片有限公司及康恩贝集团医疗保健品有限公司，平贝母样品购自吉林省药房。贝母素甲标准品（11750201311）、贝母素乙标准品（110751201110）均购自中国食品药品检定研究院，含量分别以97.3%、99.9%计。

表1 不同贝母样品信息

样品名称批号样品名称批号

平贝母1103001川贝母120118

平贝母20100412浙贝母120538

平贝母070118浙贝母120552

平贝母110710868浙贝母120572

川贝母120308浙贝母1205114

川贝母110501浙贝母1205136

川贝母120401

1.2 仪器

BS210S电子天平（德国赛多利斯）、HH.S电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司）、Agilent1200液相色谱仪（ELSD）（美国Aglient公司）。

1.3 方法

1.3.1 标准品溶液的制备。取贝母素甲标准品、贝母素乙标准品适量，精密称定，加甲醇溶解，即得。

1.3.2 供试品溶液的制备。

取本品粉末（过四号筛）约2.0 g，精密称定，置具塞烧瓶中，加浓氨试液4 ml浸润1 h，精密加入氯仿∶甲醇（4∶1）的混合溶液40 ml，称定重量，混匀，置于80 ℃水浴中加热回流2 h，放冷，精密加入6 ml无水乙醇，用力摇匀，滤过，精密量取续滤液20 ml，水浴蒸干，残渣加5 ml甲醇溶解，滤过，取续滤液，即得。

1.3.3 测定方法。

色谱条件：色谱柱：以十八烷基键合硅胶为固定相;流动相：甲醇（含0.05%三乙胺）[1]，水梯度洗脱：0～10 min甲醇（含0.05%三乙胺）由60到70;10～35 min甲醇（含0.05%三乙胺）由70到90，35～50 min甲醇（含0.05%三乙胺）由90到100，50～60 min甲醇（含0.05%三乙胺）保持100;流速1.0 ml/min;记录60 min色谱图;进样量：供试品及对照品溶液各20 μl;ELSD条件：漂移管温度70 ℃;氮气流速1.6 L/min。

2 结果与分析

2.1 方法学验证

2.1.1 浙贝母。

2.1.1.1 精密度试验。

取“1.3.2”方法制备供试品溶液，参照“1.3.3”测定方法连续进样6次，记录色谱图，以贝母素乙的色谱峰为参照峰，各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0～0.16%、0～4.02%，精密度良好。

2.1.1.2 重复性试验。

参照“1.3.2”方法制备供试品溶液6份，参照“1.3.3”测定方法测定，记录色谱图，以贝母素乙的色谱峰为参照峰，各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0～0.32%、0～4.46%，重复性良好。

2.1.1.3 稳定性试验。

取“1.3.2”方法制备供试品溶液，参照“1.3.3”测定方法记录0、4、8、12、24 h的色谱图。各色谱峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别在0～0.33%、0～3.82%，供试品溶液在24 h内稳定。

2.1.2 平贝母。

2.1.2.1 精密度试验。

取“1.3.2”方法制备供试品溶液，参照“1.3.3”测定法连续进样6次，记录色谱图，以贝母素乙的色谱峰为参照峰，各色谱峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别在0～0.30%、0～1.97%，精密度良好。

2.1.2.2 重复性试验。

参照“1.3.2”方法制备供试品溶液6份，参照“1.3.3”测定方法测定，记录色谱图，以贝母素乙的色谱峰为参照峰，各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0～0.26%、0～3.15%，重复性良好。

2.1.2.3 穩定性试验。

取“1.3.2”方法制备供试品溶液，参照“1.3.3”测定法记录0、4、8、12、24 h的色谱图。各色谱峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别在0～0.22%、0～3.20%，供试品溶液在24 h内稳定。

2.1.3 川贝母。

2.1.3.1 精密度试验。

取“1.3.2”方法制备供试品溶液，参照“1.3.3”测定法连续进样6次，记录色谱图，以贝母素乙的色谱峰为参照峰，各色谱峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别在0～0.47%、0～3.80%，精密度良好。

2.1.3.2 重复性试验。

参照“1.3.2”方法制备供试品溶液6份，参照“1.3.3”测定法测定，记录色谱图，以贝母素乙的色谱峰为参照峰，各色谱峰相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在0～0.47%、0～4.82%，重复性良好。

2.1.3.3 稳定性试验。

取“1.3.2”方法制备供试品溶液，参照“1.3.3”测定法记录0、4、8、12、24 h的色谱图。各色谱峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别在0～0.30%、0～4.80%，供试品溶液在24 h内稳定。

2.2 不同贝母指纹图谱 由图1可知，不同贝母指纹图谱特征存在明显差异。浙贝母色谱峰个数最多，且峰响应也最大，其次为平贝母，川贝母样品色谱峰个数较少，且峰响应亦较小。与此同时，浙贝母、平贝母、川贝母亦存在共有峰峰1、峰2、峰4、峰7。

浙贝母样品其特征图谱中峰5、峰6为各色谱峰中相应最大色谱峰，且满足峰5<峰6;平贝母样品其特征图谱中峰1、峰2响应最大，峰5、峰6响应较小;川贝母样品其特征图谱中峰1、峰2响应最大，但在峰5、峰6出峰处无明显色谱峰出现。

图1 不同贝母指纹图谱分析测定结果

3 讨论

张建兴[2]研究表明，浙贝母中含有浙贝甲素、浙贝乙素、

贝母辛、贝母芬，贝母啶、贝母替啶、原贝母碱、异浙贝甲素