褐黄水灰藓2种提取液抑菌作用比较研究

马海玲　刘俊华

摘 要：测定褐黄水灰藓配子体提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性，比较分析了2种提取液对受试菌的最小抑菌浓度。结果表明：褐黄水灰藓无菌水、80%乙醇2种溶剂提取液对受试菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更强。质量浓度为100g/L的乙醇提取液，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制率分别达69.98%、71.04%，乙醇提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC分别为12.5g/L、25g/L。

关键词：褐黄水灰藓提取液；抑菌作用；最小抑菌浓度；分光光度法

中图分类号 S482.7 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-31-02

褐黄水灰藓（Hygrohypnum ochraceum），又称黄色水灰藓，系柳叶藓科（Amblystegiaceae）水灰藓属（Hygroypnum Lindb.）植物，广泛分布于我国各省区[1]。已有研究表明，苔藓植物能够产生如萜类、黄酮类、脂肪酸等次生代谢产物及一些生物活性物质[2-3]，且多种苔藓植物亦被证明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黄水灰藓配子体为试材，以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为受试菌株，测定其抑菌活性，并比较不同溶剂提取液的抑菌效应与最低抑菌浓度。

1 材料与方法

1.1 材料 苔藓样品为褐黄水灰藓，采自山东省境内鹤伴山区。供试菌株为大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由滨州学院生物学实验教学中心提供。

1.2 仪器 立式蒸汽灭菌器、LH系列层流洁净工作台、生化培养箱、FA1004N型电子天平、双列六孔电热恒温水浴锅、紫外-可见光分光光度计、可调万用电热炉、电冰箱、气浴恒温振荡器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制备 用电子天平准确称取2份褐黄水灰藓配子体干粉（各10g），分别用无菌水、80%乙醇置于50℃恒温水浴锅内浸提24h后，过滤，重复提取1次，将2次浸提所得滤液合并，分别加入相应提取溶剂定容至100mL，得浓度为100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀释得到质量浓度为50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黄水灰藓水提液和醇提液，分别加入0.1mL菌悬液，同时设生长对照（菌悬液+培养基），培养12h后观察，无菌生长的最小处理浓度即为MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用测定 采用分光光度计法[6]测定褐黄水灰藓水浸提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑制作用。取装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，放入超净工作台中，紫外灭菌30min。在无菌室内，准确量取3mL褐黄水灰藓水浸提液加入上述试管中，再用移液枪准确量取200μL菌悬液，另取1支装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，加入3mL褐黄水灰藓提取液、200μL LB液体培养基，不接任何菌作为空白对照，置于37℃恒温培养箱中摇床培养24h。然后分光光度计600nm下比色测定。每一个的梯度做3次重复。另取1支装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，加入200μL金黄色葡萄球菌菌悬液，3mL已灭菌LB液体培养基，作为含菌对照，同样条件下培养24h后，分光光度计600nm下比色测定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-处理组吸光值/对照组吸光值）×100。

2 结果与分析

2.1 最小抑菌浓度的测定 由表1、表2可知，不同提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度不同：水提液对大肠杆菌的MIC为50g/L，而对金黄色葡萄球菌的MIC为25g/L；醇提液对2种受试菌的MIC分别为12.5g/L、25g/L。总体来看，本试验中褐黄水灰藓醇提液的抑菌效果较优。

3 结论

本研究结果初步表明，作为尚无药用记载的褐黄水灰藓，其水提液、醇提液均对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌生长具有一定的抑制作用，且抑菌活性与提取液质量浓度间呈正相关关系；与水提液相比，其配子体乙醇提取液具有更强的抑菌能力。该藓分布广且生物量大，但若作为抑菌植物资源加以开发利用，仍需围绕其抑菌机理及主要抑菌活性成分开展进一步研究。

参考文献

[1]赵遵田，曹同.山东苔藓植物志[M].济南：山东科学技术出版社，1998.

[2]吴鹏程.苔藓植物生物学[M].北京：科学出版社，1998.

[3]周江煜.苔藓植物的化学活性成分研究概况[J].广西中医学院学报，2002，5（4）：84-87.

[4]娄红祥.苔藓植物化学与生物学[M].北京：北京科学技术出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]刘洪霞，韩址楠，姜咏栋，等. 苍耳叶提取物与生物抑菌剂对几种常见食品污染菌的体外协同抑菌作用及其作用机理[J].食品与发酵工业，2013，39（4）：17-21.

（责编：施婷婷）

摘 要：测定褐黄水灰藓配子体提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性，比较分析了2种提取液对受试菌的最小抑菌浓度。结果表明：褐黄水灰藓无菌水、80%乙醇2种溶剂提取液对受试菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更强。质量浓度为100g/L的乙醇提取液，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制率分别达69.98%、71.04%，乙醇提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC分别为12.5g/L、25g/L。

关键词：褐黄水灰藓提取液；抑菌作用；最小抑菌浓度；分光光度法

中图分类号 S482.7 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-31-02

褐黄水灰藓（Hygrohypnum ochraceum），又称黄色水灰藓，系柳叶藓科（Amblystegiaceae）水灰藓属（Hygroypnum Lindb.）植物，广泛分布于我国各省区[1]。已有研究表明，苔藓植物能够产生如萜类、黄酮类、脂肪酸等次生代谢产物及一些生物活性物质[2-3]，且多种苔藓植物亦被证明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黄水灰藓配子体为试材，以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为受试菌株，测定其抑菌活性，并比较不同溶剂提取液的抑菌效应与最低抑菌浓度。

1 材料与方法

1.1 材料 苔藓样品为褐黄水灰藓，采自山东省境内鹤伴山区。供试菌株为大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由滨州学院生物学实验教学中心提供。

1.2 仪器 立式蒸汽灭菌器、LH系列层流洁净工作台、生化培养箱、FA1004N型电子天平、双列六孔电热恒温水浴锅、紫外-可见光分光光度计、可调万用电热炉、电冰箱、气浴恒温振荡器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制备 用电子天平准确称取2份褐黄水灰藓配子体干粉（各10g），分别用无菌水、80%乙醇置于50℃恒温水浴锅内浸提24h后，过滤，重复提取1次，将2次浸提所得滤液合并，分别加入相应提取溶剂定容至100mL，得浓度为100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀释得到质量浓度为50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黄水灰藓水提液和醇提液，分别加入0.1mL菌悬液，同时设生长对照（菌悬液+培养基），培养12h后观察，无菌生长的最小处理浓度即为MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用测定 采用分光光度计法[6]测定褐黄水灰藓水浸提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑制作用。取装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，放入超净工作台中，紫外灭菌30min。在无菌室内，准确量取3mL褐黄水灰藓水浸提液加入上述试管中，再用移液枪准确量取200μL菌悬液，另取1支装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，加入3mL褐黄水灰藓提取液、200μL LB液体培养基，不接任何菌作为空白对照，置于37℃恒温培养箱中摇床培养24h。然后分光光度计600nm下比色测定。每一个的梯度做3次重复。另取1支装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，加入200μL金黄色葡萄球菌菌悬液，3mL已灭菌LB液体培养基，作为含菌对照，同样条件下培养24h后，分光光度计600nm下比色测定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-处理组吸光值/对照组吸光值）×100。

2 结果与分析

2.1 最小抑菌浓度的测定 由表1、表2可知，不同提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度不同：水提液对大肠杆菌的MIC为50g/L，而对金黄色葡萄球菌的MIC为25g/L；醇提液对2种受试菌的MIC分别为12.5g/L、25g/L。总体来看，本试验中褐黄水灰藓醇提液的抑菌效果较优。

3 结论

本研究结果初步表明，作为尚无药用记载的褐黄水灰藓，其水提液、醇提液均对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌生长具有一定的抑制作用，且抑菌活性与提取液质量浓度间呈正相关关系；与水提液相比，其配子体乙醇提取液具有更强的抑菌能力。该藓分布广且生物量大，但若作为抑菌植物资源加以开发利用，仍需围绕其抑菌机理及主要抑菌活性成分开展进一步研究。

参考文献

[1]赵遵田，曹同.山东苔藓植物志[M].济南：山东科学技术出版社，1998.

[2]吴鹏程.苔藓植物生物学[M].北京：科学出版社，1998.

[3]周江煜.苔藓植物的化学活性成分研究概况[J].广西中医学院学报，2002，5（4）：84-87.

[4]娄红祥.苔藓植物化学与生物学[M].北京：北京科学技术出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]刘洪霞，韩址楠，姜咏栋，等. 苍耳叶提取物与生物抑菌剂对几种常见食品污染菌的体外协同抑菌作用及其作用机理[J].食品与发酵工业，2013，39（4）：17-21.

（责编：施婷婷）

摘 要：测定褐黄水灰藓配子体提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌活性，比较分析了2种提取液对受试菌的最小抑菌浓度。结果表明：褐黄水灰藓无菌水、80%乙醇2种溶剂提取液对受试菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更强。质量浓度为100g/L的乙醇提取液，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的抑制率分别达69.98%、71.04%，乙醇提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC分别为12.5g/L、25g/L。

关键词：褐黄水灰藓提取液；抑菌作用；最小抑菌浓度；分光光度法

中图分类号 S482.7 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-31-02

褐黄水灰藓（Hygrohypnum ochraceum），又称黄色水灰藓，系柳叶藓科（Amblystegiaceae）水灰藓属（Hygroypnum Lindb.）植物，广泛分布于我国各省区[1]。已有研究表明，苔藓植物能够产生如萜类、黄酮类、脂肪酸等次生代谢产物及一些生物活性物质[2-3]，且多种苔藓植物亦被证明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黄水灰藓配子体为试材，以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌为受试菌株，测定其抑菌活性，并比较不同溶剂提取液的抑菌效应与最低抑菌浓度。

1 材料与方法

1.1 材料 苔藓样品为褐黄水灰藓，采自山东省境内鹤伴山区。供试菌株为大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由滨州学院生物学实验教学中心提供。

1.2 仪器 立式蒸汽灭菌器、LH系列层流洁净工作台、生化培养箱、FA1004N型电子天平、双列六孔电热恒温水浴锅、紫外-可见光分光光度计、可调万用电热炉、电冰箱、气浴恒温振荡器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制备 用电子天平准确称取2份褐黄水灰藓配子体干粉（各10g），分别用无菌水、80%乙醇置于50℃恒温水浴锅内浸提24h后，过滤，重复提取1次，将2次浸提所得滤液合并，分别加入相应提取溶剂定容至100mL，得浓度为100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀释得到质量浓度为50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黄水灰藓水提液和醇提液，分别加入0.1mL菌悬液，同时设生长对照（菌悬液+培养基），培养12h后观察，无菌生长的最小处理浓度即为MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用测定 采用分光光度计法[6]测定褐黄水灰藓水浸提液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑制作用。取装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，放入超净工作台中，紫外灭菌30min。在无菌室内，准确量取3mL褐黄水灰藓水浸提液加入上述试管中，再用移液枪准确量取200μL菌悬液，另取1支装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，加入3mL褐黄水灰藓提取液、200μL LB液体培养基，不接任何菌作为空白对照，置于37℃恒温培养箱中摇床培养24h。然后分光光度计600nm下比色测定。每一个的梯度做3次重复。另取1支装有5mL已灭菌LB液体培养基试管，加入200μL金黄色葡萄球菌菌悬液，3mL已灭菌LB液体培养基，作为含菌对照，同样条件下培养24h后，分光光度计600nm下比色测定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-处理组吸光值/对照组吸光值）×100。

2 结果与分析

2.1 最小抑菌浓度的测定 由表1、表2可知，不同提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度不同：水提液对大肠杆菌的MIC为50g/L，而对金黄色葡萄球菌的MIC为25g/L；醇提液对2种受试菌的MIC分别为12.5g/L、25g/L。总体来看，本试验中褐黄水灰藓醇提液的抑菌效果较优。

3 结论

本研究结果初步表明，作为尚无药用记载的褐黄水灰藓，其水提液、醇提液均对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌生长具有一定的抑制作用，且抑菌活性与提取液质量浓度间呈正相关关系；与水提液相比，其配子体乙醇提取液具有更强的抑菌能力。该藓分布广且生物量大，但若作为抑菌植物资源加以开发利用，仍需围绕其抑菌机理及主要抑菌活性成分开展进一步研究。

参考文献

[1]赵遵田，曹同.山东苔藓植物志[M].济南：山东科学技术出版社，1998.

[2]吴鹏程.苔藓植物生物学[M].北京：科学出版社，1998.

[3]周江煜.苔藓植物的化学活性成分研究概况[J].广西中医学院学报，2002，5（4）：84-87.

[4]娄红祥.苔藓植物化学与生物学[M].北京：北京科学技术出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]刘洪霞，韩址楠，姜咏栋，等. 苍耳叶提取物与生物抑菌剂对几种常见食品污染菌的体外协同抑菌作用及其作用机理[J].食品与发酵工业，2013，39（4）：17-21.

（责编：施婷婷）