萎缩芽孢杆菌生理生化特征与检测鉴定

李萌萌等

摘 要：萎缩芽孢杆菌旧称“枯草芽孢杆菌黑色变种”，是芽孢杆菌属的一个重要种。该研究以其生理生化特征试验为基础，探索萎缩芽孢杆菌的便捷检测方法。通过生化试验完成的萎缩芽孢杆菌ATCC 9372 生化谱，可用于萎缩芽孢杆菌的检测。

关键词：萎缩芽孢杆菌；生理生化特征；检测鉴定

中图分类号 Q93-331 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]发现萎缩芽孢杆菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培养基上产生黑色素，根据这一特性将NRS-1221A归到枯草芽孢杆菌黑色变种新种中。1989年，Nakamura[2]提出将枯草芽孢杆菌黑色变种改名为萎缩芽孢杆菌，以区别于枯草芽孢杆菌。目前，国际上将ATCC 9372称为萎缩芽孢杆菌，国内仍使用枯草杆菌黑色变种这一命名方式。萎缩芽孢杆菌细胞宽0.5～1.0μm，长2.0～4.0μm，可运动，好氧生长；芽孢椭圆形、中生、不膨大，无芽孢壁[3]。萎缩芽孢杆菌能产生孢子而耐受不良环境，能在80℃以上的温度生长，抗性强[4]，无致病性，广泛应用于医疗[5]、工业、农业和卫生[6]等领域。国际上将萎缩芽孢杆菌ATCC 9372作为消毒检测以及灭菌质量控制标准菌株[7]。目前，萎缩芽孢杆菌的研究重点在于其应用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效区分萎缩芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，还未见文献报道。本文从生理生化方面对萎缩芽孢杆菌进行研究，旨在为检测萎缩芽孢杆菌提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 菌株 本研究中萎缩芽孢杆菌ATCC 9372有2种形式：一种为萎缩芽孢杆菌菌粉；另一种为萎缩芽孢杆菌的芽孢悬液。另选取8种芽孢杆菌属菌株，本研究中使用的菌株均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 讨论与结论

萎缩芽孢杆菌ATCC 9372，国内称“枯草芽孢杆菌黑色变种”，芽孢杆菌属新种，在干热、环氧乙烷等杀菌效果评价试验作为指示菌运用广泛。近年来对萎缩芽孢杆菌的生化鉴定和产黑色素特征研究较少。目前，国内外的研究方向主要是对萎缩芽孢杆菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地区分萎缩芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌却鲜有报道。本研究主要通过对萎缩芽孢杆菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎缩芽孢杆菌检测方法。

黑色素是一种广泛存在于微生物、植物和动物中的色素。黑色素的形成是通过酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再经过一系列聚合反应合成的[10]。萎缩芽孢杆可在本研究中使用的酪氨酸培养基上产生黑色素。而其它8种芽孢杆菌能生长但不产生黑色素。因此，在酪氨酸平板上产生黑色素这一特性应可用于萎缩芽孢杆菌的初步判定。

法国梅里埃API微生物鉴定系统由于其简单、可靠和快速而应用广泛。本研究中选用了用于鉴定芽孢杆菌的API 50 CHB试剂条检测供试菌株，结果表明其无法区分萎缩芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌。而本研究生化试验得到的萎缩芽孢杆菌ATCC 9372生化谱不仅有效丰富了萎缩芽孢杆菌的生化特征，而且能清晰地将萎缩芽孢杆菌ATCC 9372与其它8种类似芽孢杆菌区别开来，可用于萎缩芽孢杆菌的检测鉴定。

参考文献

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]刘波，李红，姚栗.枯草芽孢杆菌黑色变种ATCC 9372的特性及其应用[J].中国消毒学杂志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文伟.酸性氧化电位水对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果与影响因素研究[J].中国消毒学杂志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中华人民共和国卫生部.GB/T 15981–1995消毒与灭菌效果的评价方法与标准[S].北京：中国标准出版社，1995：257.

[10]徐燕，陈越英，吴晓松.环氧乙烷灭菌生物指示物抗力实验研究[J].中国消毒学杂志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株产黑色素海洋细菌的筛选、鉴定及发酵条件优化[J].海洋环境科学，2011，30（5）：686.

（责编：施婷婷）

摘 要：萎缩芽孢杆菌旧称“枯草芽孢杆菌黑色变种”，是芽孢杆菌属的一个重要种。该研究以其生理生化特征试验为基础，探索萎缩芽孢杆菌的便捷检测方法。通过生化试验完成的萎缩芽孢杆菌ATCC 9372 生化谱，可用于萎缩芽孢杆菌的检测。

关键词：萎缩芽孢杆菌；生理生化特征；检测鉴定

中图分类号 Q93-331 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]发现萎缩芽孢杆菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培养基上产生黑色素，根据这一特性将NRS-1221A归到枯草芽孢杆菌黑色变种新种中。1989年，Nakamura[2]提出将枯草芽孢杆菌黑色变种改名为萎缩芽孢杆菌，以区别于枯草芽孢杆菌。目前，国际上将ATCC 9372称为萎缩芽孢杆菌，国内仍使用枯草杆菌黑色变种这一命名方式。萎缩芽孢杆菌细胞宽0.5～1.0μm，长2.0～4.0μm，可运动，好氧生长；芽孢椭圆形、中生、不膨大，无芽孢壁[3]。萎缩芽孢杆菌能产生孢子而耐受不良环境，能在80℃以上的温度生长，抗性强[4]，无致病性，广泛应用于医疗[5]、工业、农业和卫生[6]等领域。国际上将萎缩芽孢杆菌ATCC 9372作为消毒检测以及灭菌质量控制标准菌株[7]。目前，萎缩芽孢杆菌的研究重点在于其应用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效区分萎缩芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，还未见文献报道。本文从生理生化方面对萎缩芽孢杆菌进行研究，旨在为检测萎缩芽孢杆菌提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 菌株 本研究中萎缩芽孢杆菌ATCC 9372有2种形式：一种为萎缩芽孢杆菌菌粉；另一种为萎缩芽孢杆菌的芽孢悬液。另选取8种芽孢杆菌属菌株，本研究中使用的菌株均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 讨论与结论

萎缩芽孢杆菌ATCC 9372，国内称“枯草芽孢杆菌黑色变种”，芽孢杆菌属新种，在干热、环氧乙烷等杀菌效果评价试验作为指示菌运用广泛。近年来对萎缩芽孢杆菌的生化鉴定和产黑色素特征研究较少。目前，国内外的研究方向主要是对萎缩芽孢杆菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地区分萎缩芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌却鲜有报道。本研究主要通过对萎缩芽孢杆菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎缩芽孢杆菌检测方法。

黑色素是一种广泛存在于微生物、植物和动物中的色素。黑色素的形成是通过酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再经过一系列聚合反应合成的[10]。萎缩芽孢杆可在本研究中使用的酪氨酸培养基上产生黑色素。而其它8种芽孢杆菌能生长但不产生黑色素。因此，在酪氨酸平板上产生黑色素这一特性应可用于萎缩芽孢杆菌的初步判定。

法国梅里埃API微生物鉴定系统由于其简单、可靠和快速而应用广泛。本研究中选用了用于鉴定芽孢杆菌的API 50 CHB试剂条检测供试菌株，结果表明其无法区分萎缩芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌。而本研究生化试验得到的萎缩芽孢杆菌ATCC 9372生化谱不仅有效丰富了萎缩芽孢杆菌的生化特征，而且能清晰地将萎缩芽孢杆菌ATCC 9372与其它8种类似芽孢杆菌区别开来，可用于萎缩芽孢杆菌的检测鉴定。

参考文献

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]刘波，李红，姚栗.枯草芽孢杆菌黑色变种ATCC 9372的特性及其应用[J].中国消毒学杂志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文伟.酸性氧化电位水对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果与影响因素研究[J].中国消毒学杂志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中华人民共和国卫生部.GB/T 15981–1995消毒与灭菌效果的评价方法与标准[S].北京：中国标准出版社，1995：257.

[10]徐燕，陈越英，吴晓松.环氧乙烷灭菌生物指示物抗力实验研究[J].中国消毒学杂志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株产黑色素海洋细菌的筛选、鉴定及发酵条件优化[J].海洋环境科学，2011，30（5）：686.

（责编：施婷婷）

摘 要：萎缩芽孢杆菌旧称“枯草芽孢杆菌黑色变种”，是芽孢杆菌属的一个重要种。该研究以其生理生化特征试验为基础，探索萎缩芽孢杆菌的便捷检测方法。通过生化试验完成的萎缩芽孢杆菌ATCC 9372 生化谱，可用于萎缩芽孢杆菌的检测。

关键词：萎缩芽孢杆菌；生理生化特征；检测鉴定

中图分类号 Q93-331 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]发现萎缩芽孢杆菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培养基上产生黑色素，根据这一特性将NRS-1221A归到枯草芽孢杆菌黑色变种新种中。1989年，Nakamura[2]提出将枯草芽孢杆菌黑色变种改名为萎缩芽孢杆菌，以区别于枯草芽孢杆菌。目前，国际上将ATCC 9372称为萎缩芽孢杆菌，国内仍使用枯草杆菌黑色变种这一命名方式。萎缩芽孢杆菌细胞宽0.5～1.0μm，长2.0～4.0μm，可运动，好氧生长；芽孢椭圆形、中生、不膨大，无芽孢壁[3]。萎缩芽孢杆菌能产生孢子而耐受不良环境，能在80℃以上的温度生长，抗性强[4]，无致病性，广泛应用于医疗[5]、工业、农业和卫生[6]等领域。国际上将萎缩芽孢杆菌ATCC 9372作为消毒检测以及灭菌质量控制标准菌株[7]。目前，萎缩芽孢杆菌的研究重点在于其应用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效区分萎缩芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，还未见文献报道。本文从生理生化方面对萎缩芽孢杆菌进行研究，旨在为检测萎缩芽孢杆菌提供实验基础。

1 材料与方法

1.1 菌株 本研究中萎缩芽孢杆菌ATCC 9372有2种形式：一种为萎缩芽孢杆菌菌粉；另一种为萎缩芽孢杆菌的芽孢悬液。另选取8种芽孢杆菌属菌株，本研究中使用的菌株均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 讨论与结论

萎缩芽孢杆菌ATCC 9372，国内称“枯草芽孢杆菌黑色变种”，芽孢杆菌属新种，在干热、环氧乙烷等杀菌效果评价试验作为指示菌运用广泛。近年来对萎缩芽孢杆菌的生化鉴定和产黑色素特征研究较少。目前，国内外的研究方向主要是对萎缩芽孢杆菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地区分萎缩芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌却鲜有报道。本研究主要通过对萎缩芽孢杆菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎缩芽孢杆菌检测方法。

黑色素是一种广泛存在于微生物、植物和动物中的色素。黑色素的形成是通过酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再经过一系列聚合反应合成的[10]。萎缩芽孢杆可在本研究中使用的酪氨酸培养基上产生黑色素。而其它8种芽孢杆菌能生长但不产生黑色素。因此，在酪氨酸平板上产生黑色素这一特性应可用于萎缩芽孢杆菌的初步判定。

法国梅里埃API微生物鉴定系统由于其简单、可靠和快速而应用广泛。本研究中选用了用于鉴定芽孢杆菌的API 50 CHB试剂条检测供试菌株，结果表明其无法区分萎缩芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌。而本研究生化试验得到的萎缩芽孢杆菌ATCC 9372生化谱不仅有效丰富了萎缩芽孢杆菌的生化特征，而且能清晰地将萎缩芽孢杆菌ATCC 9372与其它8种类似芽孢杆菌区别开来，可用于萎缩芽孢杆菌的检测鉴定。

参考文献

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]刘波，李红，姚栗.枯草芽孢杆菌黑色变种ATCC 9372的特性及其应用[J].中国消毒学杂志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文伟.酸性氧化电位水对枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭效果与影响因素研究[J].中国消毒学杂志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中华人民共和国卫生部.GB/T 15981–1995消毒与灭菌效果的评价方法与标准[S].北京：中国标准出版社，1995：257.

[10]徐燕，陈越英，吴晓松.环氧乙烷灭菌生物指示物抗力实验研究[J].中国消毒学杂志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株产黑色素海洋细菌的筛选、鉴定及发酵条件优化[J].海洋环境科学，2011，30（5）：686.

（责编：施婷婷）