知母等几种中药炮制品或提取物的抑菌活性对照分析

2014-04-27林晓珊汪锦飘陈永康

亚太传统医药 2014年9期

关键词：知母连翘挥发油

林晓珊，汪锦飘，陈永康

(中山大学孙逸仙纪念医院，广东广州 510120)

知母等几种中药炮制品或提取物的抑菌活性对照分析

林晓珊，汪锦飘，陈永康

(中山大学孙逸仙纪念医院，广东广州 510120)

目的：了解知母、连翘等几种中药炮制品或提取物的抑菌活性，明确抑菌有效部位，对比分析知母炮制前后抑菌活性变化，探讨其炮制原理。方法：应用纸片法，对比观察知母炮制品与连翘等中药提取物的抑菌作用。结果：连翘籽挥发油作用于金黄色葡萄球菌与大肠杆菌，其抑制效果显著，且抑制作用随着浓度的升高而呈增长趋势；而锦灯笼宿萼醇提物作用于大肠杆菌抑制效果不明显，抑制金黄色葡萄球菌作用显著，当醇提取物浓度为90%时，作用最好；知母炮制前后抑菌环不明显。结论：锦灯笼宿萼醇提物与连翘籽挥发油抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌作用显著。

知母；锦灯笼宿萼；连翘籽；金黄色葡萄球菌；大肠杆菌；炮制；抑菌

连翘作为木犀科连翘属植物连翘的一种干燥果实，其叶与花药用历史悠久，相关抑菌作用研究较多；知母属于百合科知母属植物知母根状茎，据相关报道显示[1]，知母煎剂作用于葡萄球菌与伤寒杆菌，抑菌作用较强，知母乙醇浸膏处理后培养的H37RV人型结核杆菌亚种抑菌效果颇佳，但对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌的抑制作用不显著。本文主要对知母炮制品与连翘等中药提取物抑菌作用进行研究，对比其抑菌活性，进一步分析其药理作用，探讨其炮制原理。

1 资料与方法

1.1 一般资料

连翘籽挥发油、锦灯笼宿萼醇提物( 由江西吉安市国光香料厂提供)；知母选自江西本草天工科技有限责任公司,《中国药典》显示，为百合科植物干燥根,能够自行进行炮制。试验仪器选择超净工作台、手提式不锈钢蒸汽消毒器以及电热恒温培养箱。

1.2 方法

1.2.1 试剂与药品蛋白胨(三门峡百特生物制品有限公司,批号：20110815)；牛肉膏(长葛沃凯德食品配料有限公司生产, 批号：20110423)；氯化钠(华北地区特种化学试剂开发中心,批号:20120402)；琼脂条(福建省明琼脂有限公司,批号：2012002)；二甲基亚砜(济南大合伟化工有限公司,批号:20120123)。金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠杆菌(ATCC25922)均选自江西省疾病控制中心，

1.2.2 培养基制备取15g氯化钠、3g牛肉膏、18g琼脂、10g蛋白胨、1 000mL水,将pH值控制在7.0～7.2，调整温度为121.3℃，灭菌持续时间为20min。

1.2.3 药液制备就连翘籽挥发油而言，其原油要应用吐温80进行乳化处理,借助无菌水，将连翘籽挥发油稀释成乳液。按照浓度的不同，将锦灯笼宿萼分为四个乙醇提取物，即30%乙醇提取物、50%乙醇提取物、70%乙醇提取物以及90%乙醇提取物,提取物溶解物选用二甲基亚砜,制备供试液1g，为实验备用。取生知母，制成水煎液,其浓度为1g/mL；选择生知母, 置入锅内，调整火候，采用文火将其翻炒，直至颜色微变,加入适当盐水,继续文火翻炒，炒干后将其取出,置凉，制成盐知母水煎液, 浓度为1g/mL。

1.2.4 研究方法基于无菌基础上，取稀释后的菌液( 首先将菌液稀释成50倍的菌液,不可见抑菌环后稀释至100倍或200倍)一滴,以琼脂平板培养基为媒介，将其置入中央, 采用涂布器涂布予以均匀处理, 借助无菌镊子，将药液浸润纸片置入琼脂培养基表面, 保持均匀，且具有一定间隔，每皿贴预留2个滤纸片,施加压力于纸片上, 促使纸片与培养基的接触部位处于良好状态。随之，将培养基放入培养箱中,保持恒温(37℃)，培养时间在18～24h,完成后取出, 测量抑菌圈大小变化状况,并及时进行记录。观察药物纸片的四周是否存在抑菌圈，当存在时，要测量其直径大小,进而分析药物有无抑菌活性以及强弱变化状况。

2 结果

当金黄色葡萄球菌与大肠杆菌稀释200倍后，盐知母与生知母对其抑菌作用不显著；连翘籽挥发油作用于金黄色葡萄球菌与大肠杆菌，抑制效果明显，其抑制作用随浓度的升高而不断增大；锦灯笼宿萼醇提物对大肠杆菌的抑制效果不明显，但抑制金黄色葡萄球菌作用相对较为显著，当乙醇提取物浓度达到90%时，抑制作用处于最高水平。详见表1、表2。

3 结论

本文研究结果显示，连翘籽挥发油对金黄色葡萄球菌与大肠杆菌具有显著的抑菌作用, 其稀释浓度越大,抑菌效果也越佳。由此可知，可以对连翘籽挥发油展开深入研究与探讨,予以充分开发，制成抑菌新药[2]。相关研究报道显示，连翘浓缩煎剂体外抑菌效果明显，对链球菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、白喉杆菌、痢疾杆菌以及葡萄球菌等具有一定的抑制作用。体外抑菌效果近似于金银花，而金银花抑制门氏菌属效果优于连翘，但金黄色葡萄球菌与痢疾杆菌抑制作用低于连翘[3]。当金银花与连翘联合使用时，无协同作用[4]。有学者表示，连翘对金黄色葡萄球菌而言，其抑菌浓度达到了1∶5 120，体外醇提取物抗真菌作用显著[5]。此外，本文研究显示，盐炙品与知母生品抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作用不明显[6]。而对于锦灯笼宿萼醇提取物来讲，其金黄色葡萄球菌抑制作用强烈,当浓度达到90%时，提取物的抑菌作用最高,而对大肠杆菌抑制作用不明显。由此可得，在连翘、锦灯笼等中药提取物抑菌作用研究中,可以综合分析其与革兰氏阳性菌间的关系，考虑其抑菌作用，分离探究抑菌成分,进而发明抑菌新药。