不同产地败酱草中齐墩果酸、熊果酸含量测定

周献词

(镇江市句容黄梅社区卫生服务中心， 江苏 镇江 212426)



不同产地败酱草中齐墩果酸、熊果酸含量测定

周献词

(镇江市句容黄梅社区卫生服务中心， 江苏 镇江 212426)

目的：建立采用反相高效液相色谱法(HPLC)测定不同产地败酱草中齐墩果酸、熊果酸含量，为控制败酱草的质量提供一定参考。方法：采用Hypersil ODS2 C18色谱柱，以乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液(67∶12∶21)为流动相，检测波长为215nm，流速为1mL/min，柱温为室温。结果：败酱草中齐墩果酸在0.052～10.4μg/L范围内呈现良好的线性关系(r=0.9992)，平均回收率为99.4%，RSD为2.41%；熊果酸在0.048～9.6μg/L范围内呈现良好的线性关系(r=0.9994)，平均回收率为99.2%，RSD为2.16%。结论：使用反相高效液相色谱法测定不同产地败酱草中齐墩果酸、熊果酸的含量，具有简便、快捷、重复性好等优点，可用于不同产地败酱草药材中齐墩果酸、熊果酸的含量测定。

败酱草；齐墩果酸；熊果酸；高效液相色谱法

败酱草是多年生的草本植物，始载于《神农本草经》，味辛、苦，具有清热解毒、祛瘀排脓等功效，在临床应用较为广泛，质量差异较大[1-2]。为控制药材质量，提高临床疗效，本文采用反相高效液相色谱(HPLC)法对不同产地败酱草中齐墩果酸、熊果酸的含量进行测定，为评价药材质量、合理选用药材提供参考。

1 材料与仪器

1.1 材料

齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定研究院，批号：110709-201206)；熊果酸对照品(中国药品生物制品检定研究院，批号：110742-201220)；乙腈(山东禹王试液有限公司禹成化工厂，色谱纯，批号：201209060)；甲醇(上海振兴化工一厂，色谱纯，批号：201213104)；败酱草药材自购，其余试剂均为分析纯。

1.2 仪器

超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)；Agilent 1200高效液相色谱仪(Agilent 1200色谱泵，Agilent 1200自动进样器紫外检测器，Agilent 1200色谱工作站)；AL104/01电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；TG16-WS台式高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为Hypersil ODS2 C18色谱柱；齐墩果酸、熊果酸的色谱条件为：以乙腈-甲醇-0.5%醋酸铵溶液(67∶12∶21)为流动相，检测波长为215nm，流速为1mL/min，柱温为室温。

2.2 对照品溶液制备

精密称定齐墩果酸、熊果酸对照品适量，均置于10mL量瓶中，加流动相溶解并定容，即得混合对照品，其中齐墩果酸的浓度为10.6μg/L，熊果酸的浓度为10.2μg/L，备用。

2.3 供试品溶液制备

取败酱草原药材，烘干，打成细粉(过20目筛)，取粉末1.0g，精密称定，置于100mL具塞的锥形瓶中，加入甲醇30mL超声(500W,40Hz)提取45min，放冷，补足减失的重量，静置10min后滤过。精密量取续滤液1mL，置于10mL量瓶中，用甲醇适量定容，即得。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液0.05、0.5、1、2、5mL置于10mL量瓶中，定容，吸取对照品溶液20μL，测定，以浓度(X)与峰面积(Y)作图得标准曲线，经回归得齐墩果酸曲线：Y1=1.8684X+6.3298，r=0.9993；熊果酸曲线：Y2=1.9231X+7.6523，r=0.9996。结果表明，齐墩果酸在0.053～10.6μg/L、熊果酸在0.051～10.2μg/L范围内呈现良好的线性关系。

2.4.2 精密度实验 取供试品溶液，在色谱条件下，连续进样5次，每次进样20μL，测定齐墩果酸、熊果酸的峰面积。结果显示，齐墩果酸的RSD值为1.98%，熊果酸的RSD值为2.16%，表明该方法的精密度良好。

2.4.3 稳定性实验 取供试品溶液，在色谱条件下，每隔2h精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，连续进样7次，测定峰面积。结果显示：齐墩果酸的RSD值为1.14%，熊果酸的RSD值为1.52%，表明供试品溶液中齐墩果酸、熊果酸在12h内基本稳定。

2.4.4 重复性实验 取同一批样品，按照“2.3”项下方法平行制备5份供试品溶液，精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件测定齐墩果酸、熊果酸的峰面积，计算含量。结果显示，齐墩果酸的RSD值为1.42%，熊果酸的RSD值为1.19%，表明采用该方法测定败酱草中齐墩果酸、熊果酸的含量，重现性良好。

2.4.5 加样回收率实验 精密称取同一批已知含量的败酱草药材粉末(过20目筛)样品6份，每份为0.2g，按比例加入齐墩果酸、熊果酸对照品，按照“2.3”项下方法制备溶液，溶液制备好之后，分别精密吸取20μL注入高效液相色谱仪，按照色谱条件测定齐墩果酸、熊果酸的峰面积，计算回收率。结果显示：齐墩果酸的回收率为99.6%，RSD值为2.26%，熊果酸的回收率为99.1%，RSD值为2.11%，表明该方法的回收率符合含量测定基本要求。

2.4.6 含量测定 按照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按照色谱条件测定6个不同产地败酱草样品中齐墩果酸、熊果酸的峰面积，按照回归方程，计算含量，结果见表1。

表1 不同产地败酱草中齐墩果酸、熊果酸的含量 (%)

3 讨论

已有文献报道[3]，败酱草中含有白花败酱甙、莫罗忍冬甙、番木鳖甙等化学成分，具有镇静、保肝利胆、抗病原微生物、抗癌等作用，临床主要与其它中药材合理配伍，用于治疗肺痈、肠痈、产后血、腹中刺痛等疾病。因市场对败酱草需求的日益增大，原有的资源已不能满足临床需求，为解决药材资源紧缺的状况，人工种植败酱草的规模逐步增大，但因各地的种源、气候、管理等不同，导致不同产地败酱草的质量差异比较大[4]。

齐墩果酸、熊果酸属三萜皂苷类化合物，其吸收位于紫外吸收的末端，故吸收波长采用215nm，同时对提取条件及流动相进行筛选，最终确定了含量测定条件[5]。通过对6个不同产地败酱草的含量测定发现，齐墩果酸、熊果酸的含量差异比较大，可能与各地的种源、气候、管理等不同有关，故临床应选用符合要求的败酱草，以提高临床治疗效果。

[1] 杨东辉,魏璐雪,蔡少青,等.黄花败酱根及根茎化学成分的研究[J].中国中药杂志,2000,25(1):39-41.

[2] 冯京,王丽莉,张铁军.HPLC同时测定藏药花锚中齐墩果酸和熊果酸含量[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(23):79-81.

[3] 杨柳,姜海,王雪莹,等.黄花败酱草化学成分和药理作用的研究进展[J].中医药信息,2012,29(4):169-172.

[4] 张一芳,周淑琴,杜文炜.败酱草药材高效液相色谱指纹图谱鉴别研究[J].中国药业,2011,20(12):25-26.

[5] 毛红梅,平欲晖,宗星星,等.HPLC同时测定败酱草中常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的含量[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(15):89-92.

(责任编辑：余 婷)

2014-03-14

周献词(1973-)，男，江苏省镇江市句容黄梅社区卫生服务中心主管中药师，研究方向为中药学。

R284.2

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1673-2197(2014)12-0032-01