雷公藤配伍甘草治疗类风湿关节炎减毒增效作用研究

马 哲，张 颖，梁茂新

(1.辽宁中医药大学 杏林学院，辽宁 沈阳 110167；2.辽宁省食品药品监督管理局 技术审评中心，辽宁 沈阳 110003；3. 辽宁中医药大学 方剂学科，辽宁 沈阳 110847)



雷公藤配伍甘草治疗类风湿关节炎减毒增效作用研究

马 哲1，张 颖2，梁茂新3*

(1.辽宁中医药大学 杏林学院，辽宁 沈阳 110167；2.辽宁省食品药品监督管理局 技术审评中心，辽宁 沈阳 110003；3. 辽宁中医药大学 方剂学科，辽宁 沈阳 110847)

目的：对雷公藤与甘草配伍前后的药效和毒性进行比较研究，初步探讨传统中药配伍减毒增效理论的科学内涵。方法：以昆明种小鼠和Wistar大鼠为试验动物，研究雷公藤配伍甘草前后ig给药对受试动物的镇痛、抗炎作用及毒性的影响。采用热板法和醋酸致小鼠扭体反应进行镇痛实验；采用角叉菜胶致大鼠足跖肿胀及DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应进行抗炎药效学实验。结果：雷公藤与甘草配伍前后均能明显延迟小鼠舔后足时间，并能减少醋酸引起的小鼠扭体反应，抑制率均在24%以上；对角叉菜胶引起的足跖肿胀，1～4h的抑制率在21%以上；对DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应有明显的抑制作用，抑制率为47.9%，且与甘草配伍后雷公藤的药理作用有显著提高。结论：甘草可以明显增强雷公藤的抗炎、镇痛作用，提示中药的配伍减毒增效作用可通过降低毒性药物用量，并配伍增效药物而实现。

雷公藤；甘草；配伍；减毒增效

配伍减毒增效是中医药理论中的一大特色，“七情合和”[1]和“君臣佐使”[2]等制方理论奠定了中药配伍减毒增效作用的理论基础。随着科学的进步，学者们对中医药配伍理论也进行了若干探讨[3]，然而从本质上来讲，“减毒”“增效”是方剂学“君臣佐使”配伍理论内涵的核心[4]。如何科学使用有毒药物，实现减毒增效，成为临床研究的永恒课题[5]。在研究复方雷公藤汤对肾病大鼠减毒增效作用实验中发现[6-8]，该复方对雷公藤起到减毒增效的作用。为排除干扰，先易后难，拟从减毒配伍基本单元入手，选取甘草与雷公藤配伍考察其对类风湿关节炎的减毒增效作用，为揭示中药配伍减毒增效理论的物质基础和相互作用机制提供实验依据。

1 实验材料

1.1 实验动物

昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g；Wistar 大鼠，体重140～160g；以上动物由辽宁中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(辽)2004-0016。

1.2 药物与试剂

角叉菜胶(批号：20080317)，醋酸(批号：20090413)，2,4-二硝基氯苯(DNCB)(批号：20080313)，95%医用酒精(批号：20090408)，以上试剂均购于国药集团；生理盐水，沈阳志鹰制药厂生产，批号：100112603。雷公藤、甘草饮片购于东北大药房，按雷公藤∶甘草(6∶1)的比例常规煎煮2次，去药渣后合并药液，浓缩成干膏，临用时取蒸馏水制成混悬液。

2 方法

2.1 对实验性炎症的抑制作用

2.1.1 对角叉菜胶引起的足跖肿胀的抑制作用 取大鼠30只，体重140～160g，雌雄各半，随机分成3组，即对照组(同容量生理盐水)、雷公藤组(雷公藤2 000mg/kg)、雷公藤甘草配伍组(雷公藤2 000mg/kg，甘草650mg/kg)，每组10只。灌胃给药，1次/天，连续7天，末次给药30min后，分别在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶0.1mL/只致炎，随后分别于1、2、4、6h，采用玻璃容器法测量大鼠足跖致炎前及致炎后容积。并按下述公式分别计算肿胀率(%)和抑制率(%)：

肿胀率(%)=(致炎后足容积-致炎前足容积)/ 致炎前足容积×100%

抑制率(%)=(对照组平均肿胀率-给药组平均肿胀率)/ 对照组平均肿胀率×100%

2.1.2 对DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应的影响 取昆明种小鼠30只，体重18～22g，雌雄各半，分组情况同“2.1.1”项。给药方法分别为对照组(同容量生理盐水)、雷公藤组(雷公藤4 500mg/kg)、雷公藤配伍甘草组(雷公藤4 500mg/kg，甘草1 500mg/kg)。分别用浓度为5%的2,4-二硝基氯苯(DNCB)乙醇液涂于小鼠腹部皮肤致敏，致敏前1天各组动物ig给药，1次/天，连续9天，致敏7天后用1% DNCB(溶于橄榄油中)分别涂于小鼠右耳，1天后处死小鼠，7mm打孔器取两侧耳片称量两耳重量，以小鼠两耳重之差为迟发性超敏反应值，比较各组反应值。

2.2 镇痛作用

2.2.1 热板法 取小鼠50只，18～22g，雌性。实验前筛选小鼠，调节恒温水浴装置，使热板温度为(55±0.5)℃，将反应潜伏期低于5s及高于30s的动物剔除。选合格小鼠30只，分组及给药同“2.1.2”项，采用ig给药，给药后30、45、60min分别测各鼠痛阈值，60s不舐后足者立即取出，其痛阈值按60s计算。

痛阈提高率(%)=(给药后痛反应时间-给药前痛反应时间)/给药后痛反应时间×100%

2.2.2 扭体法 取体重18～22g小鼠30只，雌雄各半，分组及给药同“2.1.2”项。采用ig给药，1次/天，连续3天，末次给药30min，ip0.6%醋酸溶液0.2mL，记录15min内小鼠扭体数。计算各组小鼠扭体次数均值，各给药组与对照组进行比较。

抑制率=(空白组扭体次数-给药组扭体次数)/空白组扭体次数×100%

3 结果

3.1 对角叉菜胶引起的大鼠足肿胀的影响

由表1可见，雷公藤组、配伍组能抑制角叉菜胶引起的足跖肿胀，且在1～4h内抑制作用比较明显(P<0.01)，6h以后抑制作用下降。雷公藤与甘草配伍组与雷公藤组2h时差异较显著(P<0.05)，其余时间差异不显著。

表1 雷公藤甘草配伍对角叉菜胶引起的大鼠足肿胀的影响

注：与对照组比较*P<0.05，**P<0.01；配伍组与雷公藤组比较，△P<0.05，△△P<0.01；( )内为抑制率，下表同。

3.2 对DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应的影响

实验结果表明，雷公藤组、配伍组均可显著抑制DNCB诱导的小鼠耳肿胀，与对照组相比，P<0.01，差异具有统计学意义，而配伍组与雷公藤组组间比较无统计学差异，结果见表2。

3.3 对小鼠热板法实验的影响

各组对小鼠热板法实验的影响如表3所示，雷公藤组与配伍组对热刺激引起的小鼠疼痛反应均有明显的抑制作用(P<0.01)，且雷公藤与甘草配伍后较单用镇痛作用显著增强(P<0.01)。

表2 雷公藤甘草配对DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应的影响

表3 雷公藤与甘草配伍对热刺激引起小鼠疼痛反应的影响

3.4 对醋酸所致小鼠扭体次数的影响

由表4可以看出，雷公藤对醋酸引起的小鼠的扭体反应有明显的抑制作用，与对照组比较差异具有显著统计学意义(P<0.01)。与甘草配伍后可以增强雷公藤的镇痛作用，与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。

表4 雷公藤与甘草配伍对醋酸所致小鼠扭体次数的影响

4 讨论

雷公藤与甘草配伍后，对抑制热刺激和醋酸引起的小鼠疼痛反应均较单用雷公藤时有显著提高；对角叉菜胶引起的大鼠足肿胀的抑制作用、DNCB引起的小鼠迟发性超敏反应的抑制作用有一定的提高，但差异不明显，表明甘草对雷公藤具有一定的增效作用[9-10]。

中药的功用各有所长，有毒药物大多疗效显著，但可能存在安全隐患。通过合理配伍，调其偏性，制其毒性，增强或改变其原有功效，消除或缓解其对人体的不利因素，发挥相辅相成的综合作用，发挥中医药理论中辨证施治的优势和特色。中药配伍减毒增效的研究多集中在有毒成分的含量变化上[11-12]，若毒性成分与药效成分不同则该方法尚可，一旦二者为同一成分，则在减毒的同时亦即是在降效。

由实验结果可知，甘草可以增强雷公藤的抗炎、镇痛活性，对毒性降低作用不明显。甘草具有抗炎、镇痛等类激素样作用，且常用于治疗类风湿性关节炎等免疫性疾病[13-15]。中成药中的风湿骨痛颗粒、风湿定胶囊等治疗关节炎的药物也含有甘草，推测甘草对雷公藤的增效作用与其具有一定的抗炎、镇痛作用有关。因此，甘草对雷公藤的减毒增效作用实际表现为：一方面在降低雷公藤用量的同时配伍甘草达到甚至超过单用雷公藤的疗效；另一方面因雷公藤的用量较单用减少，而达到减毒的作用。推测该作用机制可能为甘草本身发挥抗炎活性，同时其含有的甘草酸类物质与雷公藤中二萜类物质[16]结合使毒性降低，或延缓其发挥活性。

中药方剂减毒增效理论实际上分为减毒、增效、减毒合并增效三种情况。目前多数研究只对“减毒”进行了考察[17-18]，似乎还不能全面回答中药配伍减毒增效理论的问题。本试验对雷公藤配伍甘草治疗类风湿关节炎的减毒增效作用进行了初步研究，但理论的充分阐释还需进一步试验分析。有毒药物通过配伍另一种药物降低毒性、提高总体疗效的思想是中医药理论的特色及优势之一，应当尽快阐明作用机理，并加以合理利用。

[1] 顾观光.神农本草经[M].北京:学苑出版社,2002.

[2] 黄帝.黄帝内经素问[M].北京:人民卫生出版社,2005.

[3] 段金廒,宿树兰,范欣生,等.基于药物相互作用探讨中药七情合和相反/相恶/相畏配伍禁忌作用模式与机制[J].世界科学技术——中医药现代化,2012,14(3):1547-1552.

[4] 梁茂新,范颖.中药七情问难[J].新疆中医药,2007,25(增刊):3-5.

[5] 马哲,梁茂新.中药配伍减毒增效研究现状、问题与思考[J].辽宁中医药大学学报,2011,13(8):187-190.

[6] 李波,宋顺鹏,史月君.复方雷公藤汤对肾病大鼠血液系统减毒作用的实验研究[J].中国中医急症,2011,20(9):1439,1471.

[7] 李波,梁茂新.复方雷公藤汤对肾病大鼠减毒增效作用的实验研究[C].第五届全国雷公藤学术会议论文汇编,2008:314-317.

[8] 李波,周昕欣,梁茂新,等.雷公藤配伍减毒增效研究与展望[J].中国中西医结合杂志,2006,26(11):1045-1048.

[9] 杜佳林,崔明昊,忠伟.雷公藤与甘草配伍对大鼠生化指标的影响[J].实用中医内科学杂志,2008,22(5):71-72.

[10] 张皖东,吕诚,赵宏艳,等.雷公藤甲素配伍甘草酸对CIA大鼠血清TNF-α、IL-10的影响[J].中国中药杂志,2007,32(5):414-417.

[11] 李晓丽,宋振华,秦林.马钱子配伍赤芍前后毒性及镇痛抗炎作用的实验研究[J].中国中西医结合杂志,1998,18(基础理论研究特辑):286-289.

[12] 闫静,朱海光,刘志强,等.马钱子与甘草配伍前后生物碱成分的变化规律[J].分析化学, 2007,35(8):1218-1220.

[13] 罗碧贵.甘草附子汤加味治疗风湿寒性关节痛78例[J].国医论坛,1996,11(3):19.

[14] 叶映月.甘草附子汤治疗寒湿型踝关节炎33例时效观察[J].中国实验方剂学杂志, 2010,16(12):231.

[15] 张立亭.甘草泻心汤治疗风湿类疾病应用体会[J].山东中医药大学学报,2001,25(6):447-449

[16] 马哲,梁茂新,张颖.中药雷公藤化学成分及药理作用研究进展[J].亚太传统医药,2011,7(3):157-160.

[17] 张岩,刘养清,赵慧辉.中药配伍对关木通中马兜铃酸A含量的影响[J].天津药学,2005,17(4):3-6.

[18] 刘树民,李玉洁,罗明媚,等.当归对黄药子的减毒作用[J].中西医结合肝病杂志,2004,14(4):216-218.

(责任编辑：尹晨茹)

Toxicity Reducing and Efficacy Enhancing Research on Rheumatoid Arthritis Effect of Tripterygium Compatible with Licorice

Ma Zhe1,Zhang Ying2,Liang Maoxing3*

(1.Xinglin College of Liaoning Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110167, China;2.Liaoning Food and Drug Administration Technical Evaluation Center, Shenyang 110003, China;3.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Shenyang 110847, China)

Objective:Compare the pharmacokinetics and toxic between Tripterygium and Licorice, to investigate the traditional Chinese medicine theory on toxicity reducing and efficacy enhancing. Methods:The pharmacodynamic effects were observed in 2 analgesic tests and 2 inflammatory models in experimental animals，including: hot plate test in mice, writhing reaction induced by acetic acid in mice, paw swelling caused by carrageenan in rats and auricular edema induced by DNCB in mice. Results:Tripterygium could delay the latency of licking of the hind paw in hot plate test. And it could reduce the times of writhe response actions, and the inhibition rates were more than 24%. Tripterygium could significantly inhibit the paw swelling caused by carrageenan in rats, and the inhibition rates were more than 21% from 1 to 4 hour. And then it could significantly inhibit the Delayed hypersensitivity induced by DNCB, and the inhibition rates were 47.9%. Furthermore the effect above could be additional increased, when tripterygium compatibitied with Licorice. Conclusion:Licorice can significantly enhance anti-inflammatory, analgesic effect of tripterygium, but can not reduce the toxic of tripterygium. The phenomenon shows that the theory on toxicity reducing and efficacy enhancing in Chinese compatibity may achieve via reducing the content of toxic medicine and compatibitying another medicine at the same time.

Tripterygium; Licorice; Compatibility; Attenuated Efficiency

2013-12-28

马哲(1981-)，男，辽宁中医药大学杏林学院讲师，研究方向为中药药理学。

梁茂新(1949-)，男，辽宁中医药大学研究员，研究方向为中药配伍减毒增效。

R285.5

A

1673-2197(2014)08-0009-03