HPLC法测定番泻叶中番泻苷A、番泻苷B含量

王 童，刘娜娜，刘媛媛，王艳敏

(北京碧生源药业有限公司，北京102433)



HPLC法测定番泻叶中番泻苷A、番泻苷B含量

王 童，刘娜娜，刘媛媛，王艳敏

(北京碧生源药业有限公司，北京102433)

目的：对番泻叶中番泻苷A、番泻苷B的含量测定方法进行方法学确认。方法：流动相为乙腈-5mmol·L-1四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)(1→10) (35∶65)；检测波长为340nm；流速：1.0mL·min-1；进样体积为10μL。结果：番泻苷A的线性方程为Y=956.03X-2.4468，R=1.0000；番泻苷B的线性方程为Y=932.98X-3.232，R=1.0000；番泻苷A、番泻苷B的回收率分别为99.52%、101.32%，RSD%分别为0.98%、1.75%。结论：中国药典收载的番泻叶的含量测定方法简便、准确、重现性好，适用于该品的质量控制。

HPLC；番泻叶；含量

番泻叶为豆科植物狭叶番泻(CassiaangustifoliaVahl)或尖叶番泻(CassiaacutifoliaDelile)的干燥小叶，是国家食品药品监督管理局规定可用于保健食品的物质，近年来应用越来越广泛。该品含有番泻苷A及番泻苷B，并含葱酮衍生物：芦荟大黄素、大黄酚、大黄酸等，具有泻热导滞的功效。此品收载于《中国药典》2010年版一部，本文对其含量测定方法进行方法学确认。

1 仪器与试药

1.1 仪器设备

仪器：Agilent 1260 HPLC；色谱柱： Agilent ZORBAX SB-C184.6mm×250mm, 5-micron，S.N.:USCL036342。

1.2 试药与试剂

中药材番泻叶由北京盛世龙药业有限公司提供；番泻苷A(110824-201301，94.7% )、番泻苷B(110825-201301，94.9%)对照品均由中国食品药品检定研究院提供。乙腈为色谱纯；冰醋酸、醋酸钠、四庚基溴化铵、碳酸氢钠均为分析纯。

2 试验方法

2.1 对照品溶液制备

取番泻苷A对照品、番泻苷B对照品适量，减压干燥12h，置棕色量瓶中，加0.1%碳酸氢钠溶液制成每1mL含番泻苷A 50μg、番泻苷B 0.1mg的混合溶液，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液制备

取本品细粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1%碳酸氢钠溶液50mL，称定重量，超声处理15min(30～40℃)，放冷，再称定重量，用0.1%碳酸氢钠溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 色谱条件

C18柱；流动相为乙腈-5mmol·L-1四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)(1→10)(35∶65)混合溶液1 000mL中，加入四庚基溴化铵2.45g；检测波长为340nm；柱温为40℃；进样量为10mL·min-1；理论塔板数按番泻苷B峰计算应不低于6 500。

3 结果

3.1 色谱行为

在上述色谱条件下，番泻苷A、番泻苷B能达到良好的分离，番泻苷B的保留时间约为7.5min，番泻苷A的保留时间约为14.0min，两峰分离度良好，在番泻苷B色谱峰前有一小杂质峰，两者分离度为5.2，分离度符合检测要求。

图1 番泻叶中番泻苷A、番泻苷B分离效果

3.2 标准曲线考察

3.2.1 标准溶液配制 称取番泻苷A 7.09mg(实际称取7.49mg，纯度为94.7%)与番泻苷B 12.00mg(实际称取12.64mg，纯度为94.9%)对照品分别至50mL棕色量瓶中，加0.1%碳酸氢钠溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。分别吸取1mL、2mL、3mL、4mL、7mL、10mL于10mL棕色量瓶中，加0.1%碳酸氢钠溶液稀释至刻度，摇匀。分别吸取上述6个浓度的溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。

3.2.2 标准曲线 番泻苷A回归方程为Y=956.03X-2.4468， R=1.0000，表明番泻苷A对照品进样量在0.1418～1.4180μg范围内线性关系良好。番泻苷B回归方程为Y=932.98X-3.232，R=1.0000，表明番泻苷B对照品进样量在0.2400～2.4000μg范围内线性关系良好。

3.3 回收率试验

取番泻叶细粉，称取0.25g，精密称定，平行操作6份，置于6个棕色具塞锥形瓶中，分别精密加入以0.1%碳酸氢钠为溶剂配制的含番泻苷A 29.96μg·mL-1与番泻苷B 50.56μg·mL-1对照品的混合对照品溶液50mL，密塞，称定重量，超声处理15min(30～40℃)，放冷，再称定重量，用0.1%碳酸氢钠溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，分别吸取上述6个浓度的溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。经统计，番泻苷A、番泻苷B的回收率分别为99.52%、101.32%，RSD%分别为0.98%、1.75%，表明回收率良好。

3.4 精密度试验

照前述含量测定方法，平行配制6份样品，分别测定每份样品的含量。经统计，番泻苷A的RSD为0.11%，番泻苷B的RSD为0.07%,表明该方法精密度良好。

4 讨论

流动相配制过程中，四庚基溴化铵为离子对色谱试剂，不溶于水，所以在配制5mmol·L-1四庚基溴化铵的醋酸-醋酸钠缓冲液(pH5.0)(1→10)时，表现为浑浊状态，但加入乙腈后，四庚基溴化铵迅速溶解，混合溶液变得澄清。

本实验用同一种方法同时测定两种物质，番泻苷A和番泻苷B的线性良好；番泻苷A、B的回收率均达到99.5%以上，操作简单、快捷，结果准确，适用于实验室质量控制。

[1] 中华人民共和国药典委员会.中国药典[M].一部.北京:化学工业出版杜，2010:326.

(责任编辑：魏 晓)

2014-04-22

王童(1979-)，男，北京碧生源药业有限公司执业药师、中药师，研究方向为药品研发。

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1673-2197(2014)15-0032-01