HPLC法测定不同产地及不同采收时间大花紫薇叶中鞣花酸含量

王 燕

(福建卫生职业技术学院，福建 福州 350101)



HPLC法测定不同产地及不同采收时间大花紫薇叶中鞣花酸含量

王 燕

(福建卫生职业技术学院，福建 福州 350101)

目的：采用高效液相色谱法测定不同产地及不同采收期大花紫薇叶中鞣花酸的含量。方法：采用Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，柱温25℃，以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.8mL·min-1，检测波长254nm。结果：鞣花酸浓度在2.66～66.45μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0.9998。平均回收率为103.7%(RSD=0.9%，n=6)。不同产地的大花紫薇叶中，鞣花酸以广东深圳采收的含量最高，不同采收时间的福建卫生职业技术学院大花紫薇叶中鞣花酸含量在始果期8月下旬达到最高。结论：本方法操作简单、快速、重复性好，可用于测定大花紫薇叶中鞣花酸的含量。

大花紫薇；鞣花酸；HPLC

大花紫薇Lagerstroemiaspeciosa(Linn.)Pers为千屈菜科紫薇属植物，又名大叶紫薇、大果紫薇，落叶高大乔木，广泛分布于我国福建、广东、广西等地区[1]。在东南亚国家，大花紫薇作为传统民间药物用以治疗糖尿病和肾病[2]，现代研究表明其降血糖的主要活性成分为鞣质类[3]和鞣花酸类化合物[4]。鞣花酸是没食子酸的二聚衍生物，具有抗癌、抗氧化、抗菌、抗病毒等作用[5]。大花紫薇在我国资源丰富，近几年国内学者对其进行了化学成分方面的研究[6]，但关于其质量控制尚未见相关文献报道。因此，本文采用HPLC法，测定了不同产地及不同采收期大花紫薇叶中鞣花酸的含量，以期为控制大花紫薇叶的内在质量及进一步开发利用提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20AB型高效液相色谱仪(日本岛津)；Elmasonic S150型超声波清洗仪(德国Elma)；PL 203型电子天平(瑞士METTLER TOLEDO)；Ultimate XB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)。

1.2 药品与试剂

甲醇为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。对照品鞣花酸购于美国Sigma公司，其纯度大于98%。大花紫薇叶采自不同产地，不同采收期的大花紫薇叶采收自福建卫生职业技术学院，经福建农林大学园艺学院陈清西教授鉴定为千屈菜科紫薇属大花紫薇(LagerstroemiaspeciosaL.)的叶，40℃烘干，粉碎后过三号筛，干燥保存，备用。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱采用Ultimate XB-C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)。流动相以甲醇-0.1%磷酸梯度洗脱：0～10min，20%甲醇；10～15min，甲醇从40%～60%;15～30min，60%甲醇。流速0.8mL·min-1，检测波长254nm，柱温25℃，进样量10μL。对照品和大花紫薇叶样品(批号2013082002)色谱见图1。

2.2 对照品溶液制备

精密称取鞣花酸对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成浓度约为0.1mg·mL-1的对照品储备液。精密量取5mL，置于50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液制备

精密称取大花紫薇叶粉末(过三号筛)0.1g，精密加入甲醇100mL，称定重量，超声提取30min(100W，40kHz)，温度40℃。放冷，以甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液过0.45μm微孔滤膜，即得大花紫薇供试品溶液。

2.4 线性关系考察

分别精密量取对照品储备液0.2、0.25、1.0、1.5、2.0、4.0、5.0mL置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别进样10μL，按“2.1”项下色谱条件测定。以对照品浓度X(μg/mL)为横坐标，测得的峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y=66767X+15492，r=0.9998。结果表明，鞣花酸在2.66～66.45μg/mL范围内具有良好线性关系。

图1 鞣花酸对照品色谱(A)、大花紫薇叶样品色谱(B)

2.5 精密度试验

取对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定鞣花酸的峰面积。结果峰面积RSD为0.7%，表明该实验精密度良好。

2.6 重复性试验

取同一批大花紫薇叶的粉末(批号2013082002)6份，按“2.3”项下方法分别制备，按“2.1”项色谱条件，测定鞣花酸的峰面积，计算鞣花酸含量，结果样品中鞣花酸的平均含量为2.01%(RSD=1.3%，n=6)，表明该实验重复性良好。

2.7 稳定性试验

取供试品溶液分别于制备后 0、2、4、6、8、10、12、24h进样，记录鞣花酸的峰面积，结果其峰面积RSD为0.3%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.8 回收率试验

精密称取已测定含量的样品(批号2013082002)共6份，分别精确加入一定量的鞣花酸对照品，混匀后，按“2.3”项下方法制备样品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，计算平均回收率，结果见表1。

表1 鞣花酸的回收率试验 (n=6)

2.9 样品的含量测定

分别取不同产地和不同采收期大花紫薇叶各3份，按“2. 3”项下方法制备供试品溶液。按“2.1”项下的色谱条件测定，按外标法计算大花紫薇叶中鞣花酸的含量，结果见表2、表3。

表2 不同产地大花紫薇叶中鞣花酸含量测定结果 (n=3，RSD<2%)

表3 不同采收期福建卫生职业技术学院大花紫薇叶中鞣花酸的含量测定结果 (n=3，RSD<2%)

3 讨论

不同产地的大花紫薇叶中鞣花酸，以广东深圳采收的含量最高。总体来说，广东和福建地区大花紫薇叶中鞣花酸的含量差别不大，但在相同的采收期下，广东深圳所产的大花紫薇叶中鞣花酸含量较河南洛阳所产含量高出近10倍，这可能与广东地区光照充足，温度与湿度均较高等生长环境有关。

本试验还对采自福建卫生职业技术学院的大花紫薇叶在花期和果期内鞣花酸的含量进行了分析。由结果可以看出，鞣花酸含量在开花期含量逐渐上升，在始果期即8月下旬时达到含量最大值，而在成长期含量开始逐渐降低，到果实成熟期含量达到最低值。因此，据此含量变化规律，可确定大花紫薇叶在花期8月中下旬为最佳采收期，此时有效成分鞣花酸的含量较高。

鞣花酸作为大花紫薇叶中主要活性成分之一，其含量高低对于大花紫薇的内在质量具有重要的意义。本实验结果表明，不同的产地和采收时间对鞣花酸的含量均有影响。而产地对其含量的影响较大，说明产地是决定大花紫薇次生代谢产物形成的主要因素。本实验结果可为进一步开发利用大花紫薇提供一定的研究依据。

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会. 中国植物志[M]. 北京：科学出版社，1983：97.

[2] LIU F，KIM JK，LiIY，et al．An extract ofLagerstroemiaspeciosaL. has insulin-like glucose uptake-stimulatory and adipocyte differentiation-inhibitory activities in 3T3-L1 cells[J]．J Nutr，2001，131(9)：2242．

[3] LIU X，KIM J，LI Y，et al．Tannic acid stimulates glucose transport and inhibits adipocyte differentiation in 3T3-L1 cells[J]．J Nutr，2005，135(2)：165．

[4] BAI N，HE K，ROLLER M，et al．Active compounds from Lagerstroemia speciosa, insulin-like glucose uptake-stimulatory/inhibitory and adipocyte differentiation-inhibitory activities in 3T3-L1 cells[J]．J Agric Food Chem，2008，56(24)：11668．

[5] 李素琴，袁其朋，徐健梅．鞣花酸的生理功能及工艺开发研究现状[J]．天然产物研究与开发，2001，13(5)：71-79．

[6] 詹勤，王燕，李霞，等．大花紫薇叶醋酸乙酯部位的化学成分研究[J]．时珍国医国药，2009，20(8)：1841-1844．

(责任编辑：魏 晓)

2014-03-01

福建省教育厅资助科技项目(JB12303)；福建卫生职业技术学院院级科研课题(2012-2-03)

王燕(1986-)，女，福建卫生职业技术学院助教，研究方向为中药资源及品质评价。

R284.2

A

1673-2197(2014)11-0025-02