滋阴降火方药对牙周炎患者龈沟液中IL－1β及MMP－2含量的影响

河北省青县中医院 李水清 郝丽霞 王竞超（沧州 062650）

牙周炎是一种以炎症细胞浸润牙龈组织致炎症性水肿出血、组织液渗出、牙槽骨的吸收及组织进行性破坏为主要临床表现的慢性感染性疾病。此疾病不仅是成年人丧失牙齿的重要原因，而且近年发现牙周炎易引起内分泌系统、心血管系统及呼吸系统等方面的疾病。［1－2］目前，该病的病因不明，缺乏有效的治疗手段。本研究以滋阴降火的治疗法则，创制滋阴降火方药，在临床上化裁治疗慢性牙周炎，取得较好的临床疗效。为进一步研究滋阴降火方药治疗慢性牙周炎的作用机制，本研究选取来我院就诊的124例慢性牙周炎患者作为实验对象，观察慢性牙周炎致炎因子IL－1β及MMP－2细胞信号传导通路中关键分子表达的影响，探讨该方疗效的作用机制。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 滤纸签 （whatman，German），IL－1β及MMP－2人酶联免疫吸附试验试剂盒（R＆D，USA）。

1.2 主要仪器设备 分光光度计，电子天平，酶联免疫检测仪:国营华东电子管厂。

1.3 方法

1.3.1 研究对象:来我院口腔科门诊就诊的124例慢性牙周炎患者随机分为对照组和治疗组，每组62人，其中每位患者均以一颗单根牙作为研究对象，并且牙龈指数 （GI）≥3，附着丧失 （AL）≥2 mm，无吸烟史，无系统性疾病，两组患者在年龄、性别、病情、病程等方面的差异无显著性 （P＞0.05），具有可比性。

1.3.2 龈沟液的采样:在采样前，每个收集龈沟液的滤纸签均放入0.15 mL EP管中在电子分析天平上称重、记录、备用。然后去除龈沟液收集部位的菌斑和牙石，用棉签擦拭后，气枪将牙面吹干，1 min后将滤纸签插入龈沟或牙周袋内，遇阻力后停止插入，停留1 min，抽出滤纸签，迅速放回EP管中;等待3 min后再将第二个纸签以相同的方式放入同一位点。将两个纸签放入同一个EP管内，后置入－70℃冻存。若滤纸签被血液浸渍则弃置不用。

1.3.3 治疗:牙周基础治疗，龈上洁治，龈下刮治和根面平整在局麻下根据具体病情使用Gracy刮治器分次完成，调整磨牙、去除明显咬合创伤等。同时给予患者刷牙频率、方法等方面的口腔卫生指导。治疗组在此基础之上给予滋阴降火方药口服，组成方药:知母25 g，黄柏10 g，生地黄30 g，牡丹皮、泽泻各10 g，茯苓7 g，山茱萸10 g，山药15 g，黄芩10 g，金银花、白茅根各15 g。两组患者均以7 d为1个疗程，3个疗程后，再次对牙周炎组进行两组患者的龈沟液采样和对比。

1.3.4 龈沟液中IL－1β及MMP－2水平检测:将250μL含1% 牛血清白蛋白的PBS缓冲液加入装有样本滤纸签的EP管中，漩涡混匀器上震荡EP管1 min，然后2 000 r离心5 min。取出纸签，分离上清液分装，分别用于检测IL－1β及MMP－2。用ELISA双抗体夹心酶联免疫吸附法检测上清液中IL－1β及MMP－2的水平，按说明书进行操作:（1）将100μL标准液或样品置含有单克隆抗体的96板孔中，留第一孔为底物空白;（2）除底物空白孔外，其他各孔加入200μL McAb－乙酰胆碱脂酶;（3）加入200μL底物到各孔中，在18℃ ～25℃室温下，350 rpm振荡30 min;（4）震荡孵育后，每孔均加50μL反应停止液;（5）用450 nm波长检测吸光度值，根据标准浓度作出标准曲线，并计算出样品的相应浓度。IL－1β及MMP－2人ELISA检测试剂盒的灵敏度为1.5 pg/mL及12.5 ng/mL。细胞因子水平低于试剂盒最低限的位点计分为 “0”。

1.3.5 统计分析:采用SPSS13软件进行统计分析，慢性牙周炎患者两组采集位点的临床指标检测之间比较采用ANOVA检验及两两比较。

2 实验结果

两组患者龈沟液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量结果详见表1。从表中可以看出，在治疗前对照组与治疗组中患者龈沟液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量差异无显著性 （P＞0.05），治疗后，治疗组基础治疗和运用滋阴降火方药的治疗后，治疗组患者龈沟液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量明显下降，与对照组比差异具有非常显著性 （P ＜0.01）。

表1 龈沟液中炎性因子IL－1、MMP－2含量（±s）

表1 龈沟液中炎性因子IL－1、MMP－2含量（±s）

注:与对照组治疗后比较，△P＜0.01

组别 IL－1含量 （pg/mL）治疗前 治疗后MMP－2含量 （ng/mL）治疗前 治疗后对照组 103.4±22.1 95.2±15.9 212.4±12.1 145.2±17.2治疗组 109.5±21.6 54.3±18.5△ 209.5±21.6 64.2±15.5△

3 结论

牙周炎是人类口腔两大疾患之一，根据我国第三次全国口腔健康调查表明，目前我国大约有80%～97%的成年人患有不同程度的牙周疾病。现代临床医学认为牙周炎是细菌入侵袭和肌体防御功能之间动态失衡所引起的慢性感染性疾病，临床表现为牙龈肿痛、出血等常见的炎症反应。牙周炎致病因素除了牙周细菌感染外，肌体对牙周细菌的反应，其中包括招募白细胞及随后释放的炎症介质和炎性因子等，均在牙周炎病程中起着关键性作用。［3］引起炎症反应的诸多细胞因子中，尤以IL－1β及MMP－2与牙周炎的发生发展有着密切的关系。现有研究证明IL－1β是介导牙周炎症过程的主要因子，IL－1β协同其他炎性因子直接抑制骨形成和金属蛋白酶因子，促进结缔组织降解，抑制胶原纤维形成，延迟牙周病灶的愈合和患牙骨的形成。［4］在肌体内，MMP家族具有促进炎症细胞迁移和降解基底膜的作用，其中MMP－2在牙周组织中胶原纤维的改建和牙根吸收等方面起极其重要的作用，Ejeil等证实MMP－2含量与牙周组织中胶原纤维的破坏程度呈正相关。［5］

在中医学中，牙周炎属“牙宣”范畴，《仁斋直指方》认为:“齿者骨之所终，髓之所养，肾实主之;故肾衰则齿豁，精固则齿坚，虚热则齿动。”其中说明牙齿与肾之间的重要关系，肾虚则齿浮动，虚火上炎则齿衄。本临床研究，运用滋阴降火方药治疗阴虚火旺而致牙周炎的患者，其研究结果表明滋阴降火方药能够有效地降低IL－1β及MMP－2的含量，从而抑制了炎症的发生，控制了牙周炎的病程，从而说明滋阴降火方药抑制或消除IL－1β及MMP－2炎性因子是治疗牙周炎疾病的机制之一。随着对牙周炎发病机理的认识，用中医药调节肌体的免疫机制治疗牙周炎已成为目前研究的热点，本研究从牙周炎病因病机的一方面为研究牙周炎机制提供了思路，但对于滋阴降火方药治疗牙周炎的效果及作用机制还有待进一步的研究。

［1］ 曹采芳.牙周病学［M］.北京:人民卫生出版社，2001.43－471

［2］ 李德懿.牙周病微生物学［M］.天津:天津科技翻译公司，1994.98－1 231

［3］ 赵玉雪，赵丽娟.白细胞介素－1及其与牙周病的关系［J］.中国实用口腔科杂志，2012，5（6）379－381

［4］ 赵丽凤，王新革，黄纪美.龈沟液中IL－1β的监测和临床意义［J］.求医问药 （下半月刊），2012，10（3）:269－270

［5］ 左渝陵，金钊，余剑锋.益气升阳法对慢性牙周炎患者龈沟液IL－6和 MMP－2含量的影响 ［J］.现代预防医学，2012，39（21）:5 678－5 682

（2013－12－18 收稿）